изопропиламид 2-[4-(4,6-диметил-2-пиримидилсульфамил)анилино]цинхониновой кислоты, проявляющий противовоспалительную и анальгетическую активность

Формула изобретения

Изопропиламид 2-[4-(4,6-диметил-2-пиримидилсульфамил)анилино] цинхониновой кислоты формулы:



проявляющий противовоспалительную и анальгетическую активность.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к новым биологически активным соединениям, а именно к изопропиламиду 2-[4-(4,6-диметил-2-пиримидилсульфамил)-анилино]цинхониновой кислоты формулы I:

обладающего противовоспалительной и анальгетической активностью, что позволяет предположить возможность его использования в медицине в качестве лекарственного средства для лечения воспалительных процессов.

Ближайшим аналогом по структуре является изопропиламид 2-(4-хлоранилино)цинхониновой кислоты, который проявляет противовоспалительную и анальгетическую активность [Михалев А.И., Коньшин М.Е., Зуева М.В., Закс А.С., Вахрин М.И. Патент РФ на изобретение № 2130018. Изопропиламид 2-(4-хлоранилино)цинхониновой кислоты, проявляющий противовоспалительную и анальгетическую активность. По заявке № 97110942 от 02.07.97. Приоритет от 02.07.97. Зарегистрирован в государственном реестре изобретений РФ 10.05.1999 г.].

В медицинской практике широко используется медицинский препарат диклофенак натрия (ортофен) [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Новая Волна, 2002, Т. 1, С.170], который взят нами в качестве эталона сравнения противовоспалительной и анальгетической активности.

Целью изобретения является поиск в ряду амидов цинхониновой кислоты соединения, проявляющего высокую противовоспалительную активность, обладающего при этом низкой токсичностью.

Поставленная цель достигается синтезом изопропиламида 2-[4,6-диметил-2-пиримидилсульфамил)анилино]цинхониновой кислоты взаимодействием изопропиламида 2-хлорцинхониновой кислоты с 2-(4-амино-бензолсульфамидо)-4,6-диметилпиримидином (сульфадимидином, сульфадимезином) [Машковский М.Д. Лекарственные средства, М.: Новая волна, 2002, Т.2, С.277] по следующей схеме:

Пример получения заявляемого соединения.

2,48 г (0,01 моль) изопропиламида 2-хлорцинхониновой кислоты [Павлова М.В., Михалев А.И., Коньшин М.Е., Закс А.С., Зуева М.В., Вахрин М.И. Синтез, противовоспалительная и анальгетическая активность 2-замещенных амидов цинхониновой кислоты // Хим.-фарм. журн., 1999, Т.33, № 8, С.18-19] и 2,78 г (0,01 моль) 2-(4-аминобензолсульфамидо)-4,6-диметилпиримидина (сульфадимезина) в 10 мл ДМФА кипятят в течение 6 часов, охлаждают, остаток обрабатывают гексаном. Осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из этанола. Выход 1,9 г (85%)?.

Т.пл., 267-269°С. C₂₅H₂₆N₆O₃S.

Найдено, %: C 61,27; H 5,30; N 17,20.

Вычислено, %: C 61,20; H 5,34; N 17,13.

ИК-спектр получен на ИК-спектрометре SPECORD M-80 в вазелиновом масле, ,

см^-1: 1648 (СО); 3300, 3336, 3378 (NH); 1160,1380 (SO₂).

ПМР-спектр (спектрометр ЯМР MERCURY-300 фирмы Varian, 100 МГц),

в ДМСО-d₆, внутренний стандарт ГМДС, , м.д.: 1,20 д (6H, 2 CH₃); 2,27 с (6H, 2CH ₃); 4,16 м (1H, CH(CH₃)₂; 6,77-8,15 м (10H, HetH, ArH); 8,67 д (1H, NH-амид); 10,00 с (1H, HetNH); 11,41 уш. с (1H, SO₂NH). Полученное соединение представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, нерастворимое в воде. При хранении на воздухе соединение устойчиво.

Заявляемое соединение и ортофен изучены на наличие противовоспалительного и анальгетического действия и острой токсичности. Исследования были проведены на 100 белых нелинейных крысах, сгруппированных по 5 особей массой 120-200 г на 70 нелинейных мышах массой 30-40 г.

Острая токсичность полученного соединения и ортофена изучена на белых мышах по методу [Прозоровский В.Б. Практическое пособие по ускоренному определению среднеэффективных доз и концентраций биологически активных веществ. - С.-Петербург, НПП-Наука, 1992, с.42] при внутрибрюшинном введении и установлено, что ЛД₅₀ для заявляемого соединения >1260 мг/кг, и оно относится по классификации Сидорова К.К. [Сидоров К.К., Измеров Н.Ф. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии. М.: Медицина, 1977, 240 с.] к практически нетоксичным веществам, а ЛД₅₀ для ортофена 132±46,8 мг/кг. Соединение 1 является менее токсичным, чем структурный аналог и ортофен, соответственно в 2 и 9,5 раз.

Противовоспалительная активность (ПВА) изучена на белых крысах обоего пола массой 120-200 г. на каррагениновой модели воспаления, создаваемой субплантантным введением в заднюю лапу крыс 0,1 мл 1% водного раствора каррагенина (Marine Colloids Inc., N.Y). В качестве эталона сравнения использовался ортофен (Россия). Исследуемое вещество и ортофен вводили в виде водной взвеси с твином-80 внутрибрюшинно за один час до моделирования воспаления. Прирост объема воспаленной стопы оценивали онкометрически через 3 и 5 часов после введения флогогенного агента и вычисляли процент торможения отека к контролю [Шварц Г.Я. Методические указания по изучению новых нестероидных противовоспалительных препаратов / Шварц Г.Я., Сюбаев Р.Д. // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Ремедиум, 2000, С.234-241].

Анальгетическую активность (АА) соединения изучали на модели «уксусных корчей» на беспородных белых мышах обоего пола. Мышам внутрибрюшинно вводили 0,75% водный раствор уксусной кислоты в объеме 0,25 мл и сразу после этого подсчитывали количество «корчей» в течение 10 минут [Winter C.A. Carrageenininduced oedema in an assay for antiinflammatory drugs / Winter C.A., Risley E.A., Nuss G.M. // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. - 1962. Yol.111. P.544-547]. Исследуемое вещество вводили перорально через желудочный зонд в виде водной взвеси с твином-80 за 1 час до введения уксусной кислоты. Результаты оценивали по способности тормозить количество «корчей» в процентах по сравнению с контрольными животными, получавшими эквивалентную водную взвесь с твином-80.

Данные опытов по ПВА и АА обрабатывали статистически с вычислением критерия достоверности [Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта, 2-е изд. Л.: Медгиз, 1963, с.81-106]. Результаты исследований представлены в таблице.

Таблица 1
Острая токсичность, противовоспалительная и анальгетическая активность соединения I в сравнении с аналогом по структуре и ортофеном
Соединение	ЛД50, мг/кг	ПВА, % торможения отека к контролю после введения каррагенина через	Анальгетическая активность, % торможения "уксусных корчей"	Терапевтический индекс по ПВА ЛД50/ЕД50
Доза, мг/кг	3 ч	5 ч
Заявляемое соединение I	>1260	25	57,1****	52,2****	50,2***	143,2
20	67,4****	64,6****
15	62,8****	61,0****
10	56,5**	49,5**
5	38,6**	36,3**
1	43,8**	41,1**
11	47,6***	44,4***	43,7***
0,5	43,8**	42,4**
0,1	37,8**	20,7*
Аналог по структуре	631±25,0	25	56,8****	61,0****	34,4***	79,0
10	50,0****	51,8****
5	44,2***	49,2***
1	40,0****	44,0****
Ортофен	132±46,8	25	69,4****	72,2**		16,5
251	65,6****	66,4***	50,0**
10	55,4**	52,2**	22,0**
5	40,8**	41,0**	0
* - p>0,05; ** - p<0,05; *** - p<0,01; **** - p<0,001 1 - соединение вводили через рот

В результате опытов установлено, что заявляемое соединение при внутрибрюшинном введении обладает противовоспалительным действием в дозах 25-1 мг/кг (таблица), которое проявляется торможением каррагенинового воспаления во все сроки наблюдения. Разница между ПВА соединения 1 в дозе 10 мг/кг и активностью ортофена в этой же дозе стастически незначима. По анальгетическому действию исследуемое соединение в дозе 25 мг/кг превосходит аналог по структуре и не уступает активности ортофена в этой же дозе.

Для заявляемого соединения и ортофена математическим методом (методом наименьших квадратов) [Государственная фармакопея СССР, 11-е изд., вып.1. М.: Медицина, 1987, 334 с.] определена среднеэффективная доза ЕД₅₀ , вызывающая уменьшение отека лапы животных на 50% при внутрибрюшинном способе введения, и ЕД₅₀ для заявляемого соединения составляет 8,8 мг/кг, а ортофена - 8,0 мг/кг.

Положительным отличием заявляемого соединения от применяемого в медицине противовоспалительного средства - ортофена является большая величина терапевтичекого индекса по ПВА (ЛД₅₀ /ЕД₅₀), которые соответственно равны 143,2 и 16,5, т.е. терапевтический индекс соединения 1 в 8,7 раза больше, чем у ортофена.

Изучены эффекты заявляемого соединения при воспалительных реакциях, вызываемых классическими флогогенными агентами: гистамином, серотонином, брадикинином. Опыты проведены на 55 белых нелинейных крысах обоего пола массой 140-200 г, сгруппированных по 5 особей.

Исследуемое соединение 1 вводили внутрибрюшинно за 1 час до субплантарной инъекции в заднюю лапу крыс 0,1 мл водных растворов: 0,1% гистамина («Fluka» Швейцария), 0,01% серотонина («Rеanal»), 0,01% брадикинина («Sandoz», Швейцария). Соединение 1 вводили в дозе 1 мг/кг в водной суспензии с твином-80, контрольные животные получали эквиобъемные количества водной взвеси твина без вещества. Онкометрию лап животных проводили через 15, 30, 45, 90 минут. ПВА соединения 1 оценивали на пике воспаления: 45 мин при серотониновом, 30 мин - гистаминовом и 15-18 мин при брадикининовом. Эффект рассчитывали по формуле, используемой при определении влияния исследуемого соединения на каррагениновое воспаление [Шварц Г.Я. Методические указания по изучению новых нестероидных противовоспалительных препаратов / Шварц Г.Я., Сюбаев Р.Д. // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Ремедиум, 2000, С.234-24]. Результаты исследований представлены в таблице 2.

	Таблица 2
	Эффект соединения I после инъекции флогогена, мин.
Флогоген	Доза, мг/кг	15	30	45	90
Гистамин	1	24,0*	27,8**	23,2**	29,5**
Серотонин	1	6,4*	4,4*	7,1*	3,9*
Брадикинин	1	16,5*	8,7*	13,0*	0,5*
*p>0,05; **p<0,05 по сравнению с контролем

Из данных, приведенных в таблице 2 следует, что соединение 1 в дозе 1 мг/кг достоверно, но слабо тормозит гистаминовый отек через 30,45, 90 мин после инъекции флогогена, но не изменяет интенсивность и динамику воспалительной реакции на экзогенный серотонин и брадикинин.