способ повышения адаптационных возможностей предстательной железы крыс при действии низких сезонных температур

Формула изобретения

Способ повышения адаптационных возможностей предстательной железы крыс при действии низких сезонных температур, включающий пероральный прием дигидрокверцитина в дозе 5 мг/кг массы тела перед охлаждением в течение четырех недель.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной морфологии.

В результате проведенного патентного поиска аналогичных решений выявлено не было.

Задача изобретения заключается в создании способа повышения адаптационных возможностей предстательной железы лабораторных животных к низким сезонным температурам.

Предложен способ применения препарата, являющегося производным флавоноидов дигидрокверцитина в качестве средства, повышающего адаптационные возможности предстательной железы крыс при адаптации организма животных к низким сезонным температурам.

Способ осуществляется следующим образом.

В эксперименте изучалось влияние дигидрокверцитина на структурный гомеостаз предстательной железы при адаптации животных к низким температурам. Для этого экспериментальные животные (40 беспородных белых крыс-самцов) были разделены на три группы: группу контроля составили интактные крысы (n=10), содержавшиеся в виварии при 18-20°С, крысы второй группы (группа сравнения, n=15) и третьей группы (группа коррекции, n=15), которые охлаждались в климатокамере «ILKA» при температуре -15°С по 3 часа ежедневно на протяжении четырех недель с соблюдением адекватных условий влажности и вентиляции. Режим охлаждения был выбран с учетом возникновения в таких условиях в тканях и органах подопытных животных выраженных биохимических и морфологических изменений [Окислительный стресс в предстательной железе на этапах адаптации организма к низким температурам. И.Ю.Саяпина, С.С.Целуйко. Сибирский медицинский журнал, Том 106, № 7].

Экспериментальные животные из группы коррекции ежедневно перед охлаждением получали перорально дигидрокверцитин в дозе 5 мг/кг массы тела. В качестве объекта исследования был использован орган репродуктивной системы самцов белых крыс, а именно дорсолатеральные доли предстательной железы, являющиеся структурным эквивалентом простатических желез человека. Для получения предстательной железы и крови после окончания эксперимента лабораторных животных умерщвляли под тиопенталовым наркозом путем декапитации. Адаптационные возможности предстательной железы оценивали путем проведения гистохимических (реакция с дитизоном), иммуногистохимических (выявление индуцибельной формы NO-синтетазы), количественных («Морфология 5.0»), биохимических и статистических методов.

Результаты способа представлены на фигурах:

Фиг.1 - Предстательная железа (гистохимическая реакция с дитизоном):

1a - крысы из группы контроля;

1б - крысы из группы сравнения;

1в - крысы из группы коррекции.

Фиг.2 - Предстательная железа (иммуногистохимическая реакция на индуцибельную NO-синтетазу):

2а - крысы из группы контроля;

2б - крысы из группы сравнения;

2в - крысы из группы коррекции.

На Фиг.1а видно, что в эпителии предстательной железы интактных крыс содержатся высокие концентрации цинка (позиция 1), обладающего антиоксидантным и антипролиферативным действием [Castration- and aging-induced changes in the expression of zinc-transporter and metallothionein in rat prostate, K. Iguchi et al. Journal of Andrology, 2011, Vol.32, № 2]. После 4-х недель адаптации содержание цинка в железистом эпителии предстательной железы снижается, что показано на Фиг.16 (позиция 1). В эпителии предстательной железы крыс, получавших дигидрокверцетин, цинка содержится больше, чем у крыс из группы сравнения, что показано на Фиг.1в (позиция 1).

На Фиг.2а показано, что в эпителии предстательной железы интактных крыс присутствуют продукты иммунооцитохимической реакции на индуцибельную NO-синтетазу в виде преципитатов коричневого цвета (позиция 2). На Фиг.2б показано, что после 4-х недель адаптации эпителий предстательной железы полностью утрачивает иммунопозитивные свойства (позиция 2). Данное явление указывает на резкое угнетение экспрессии индуцибельной формы NО-синтетазы, которая является дополнительной системой антиоксидантной защиты местного уровня. В то же время в эпителии предстательной железы крыс, получавших дигидрокверцетин, выявляются продукты реакции на индуцибельную NO-синтетазу в виде преципитатов светло-коричневого цвета, что представлено на Фиг.2в (позиция 2).

После 4-х недель адаптации увеличивается площадь фиброзно-мышечной стромы предстательной железы (табл.1), что косвенно указывает на наличие интерстициального отека. В предстательной железе крыс, получавших дигидрокверцетин, отмечается уменьшение площади фиброзно-мышечной стромы (табл.1), что связано с капилляропротективными свойствами дигидрокверцитина [Диквертин - новое антиоксидантное и капилляропротекторное средство. Колхир В.К. Хим.-фарм. журнал, 1995, № 9].

Адаптация к низким температурам сопровождается развитием в организме животных окислительного стресса, на что указывает повышение в крови крыс из группы сравнения малонового диальдегида, диеновых конъюгатов и гидроперекисей липидов при одновременном снижении витамина Е (табл.2). В крови животных, получавших дигидрокверцетин, отмечается снижение малонового диальдегида, диеновых конъюгатов и гидроперекисей липидов, содержание витамина Е повышается (табл.2), что связано с антиоксидантным действием данного препарата [Сравнительная оценка реакционной способности кверцетина и дигидрокверцетина по отношению к пероксильным радикалам. И.Г.Конкина с соавт. Химия растительного сырья № 3. - 2011].

Таблица 1
Относительная площадь стромы предстательной железы после 4-х недель адаптации к низким сезонным температурам и на фоне приема БАД дигидрокверцитин
Морфометрический показатель	Группа контроля	Группа сравнения	Группа коррекции
Площадь стромы (мкм2)	1681,35±380,02	2972,75±422,25*	2580,23±363,88

Примечание: здесь и в таблицах 2 и 3

* - различия статистически значимы по сравнению с группой контроля при <0,05;

** - различия статистически значимы по сравнению с группой сравнения при <0,05.

Таблица 2. Содержание витамина Е, диеновых конъюгатов и малонового диальдегида в сыворотке крови крыс после 4-х недель адаптации к низким сезонным температурам и на фоне приема БАД дигидрокверцитин
Показатель	Группа контроля	Группа сравнения	Группа коррекции
Витамин Е, мкг/г	43,3±4,3	32,5±2,4*	36,2±2,07
Малоновый диальдегид, нмоль/г	4,9±0,3	6,1±0,3*	5±0,3**
Диеновые конъюгаты, нмоль/г	27±3,07	48,9±4,1*	35,1±2,5**
Гидроперекиси липидов, нмоль/г	26±1,4	32,7±2,07*	30,2±2,08

Таблица 3. Количественная оценка активности гистохимических и иммуногистохимических реакций (оптическая плотность, отн. ед.)
Методы	Группа контроля	Группа сравнения	Группа коррекции
Дитизон	0,438±0,022	0,154±0,010*	0,386±0,032**
1NOS	0,268±0,012	0,198±0,009*	0,249±0,004**

В течение четырех недель одна группа крыс подвергалась охлаждению в климатокамере «ILKA» при температуре -15°С по 3 часа ежедневно. Крысы другой группы перед охлаждением перорально получали дигидрокверцитин на протяжении четырехнедельного действия холода в дозе 5 мг/кг массы тела.

Количественная оценка результатов цитохимической реакции с дитизоном показала резкое уменьшение оптической плотности продуктов реакции в эпителии простаты крыс из группы сравнения (табл.3), а оптическая плотность в эпителии предстательной железы крыс из группы коррекции статистически значимо выше, чем в группе сравнения (табл.3).

По результатам количественной оценки иммуноцитохимической реакции на индуцибельную NO-синтетазу оптическая плотность продуктов реакции в эпителии предстательной железы крыс из группы сравнения статистически значимо ниже, чем в группе контроля (табл.3). В эпителии крыс из группы коррекции оптическая плотность достоверно выше, чем у крыс из группы сравнения (табл.3).

В предстательной железе крыс из группы сравнения увеличивается площадь фиброзно-мышечной стромы предстательной железы (табл.1). В предстательной железе крыс из группы коррекции отмечается уменьшение площади фиброзно-мышечной стромы (табл.1).

По результатам биохимического исследования в сыворотке крови крысы из группы сравнения повышается уровень гидроперекисей липидов, диеновых конъюгатов и малонового диальдегида, уровень витамина Е понижается (табл.2). В сыворотке крови крыс из группы коррекции отмечается статистически значимое снижение диеновых конъюгатов и малонового диальдегида, повышается уровень витамина Е (табл.2).

Таким образом, структурно-функциональное состояние предстательной железы крыс, получавших во время адаптации к низким температурам дигидрокверцитин, позволяет рассматривать данную БАД в качестве средства, уменьшающего негативные эффекты экстремальных климатических факторов среды на предстательную железу животных.

Технический результат изобретения заключается в повышении адаптационных возможностей предстательной железы лабораторных животных к низким сезонным температурам и расширении арсенала средств, обладающих адаптогенными свойствами.

Источники информации

1. И.Ю.Саяпина, С.С.Целуйко Окислительный стресс в предстательной железе на этапах адаптации организма к низким температурам // Сибирский медицинский журнал. - 2011. - Том 106, № 7. - С.31 - 34.

2. Iguchi K. Castration- and aging-induced changes in the expression of zinc-transporter and metallothionein in rat prostate / K. Iguchi, N. Morihara, S. Usui, M. Hayama, Y. Sugimura, K. Hirano // Journal of Andrology. - 2011. - Vol.32, № 2. - P.253-258.

3. Колхир, В.К. Диквертин - новое антиоксидантное и капилляропротекторное средство / Колхир В.К., Тюкавкина Н.А., Быков В.А. и др. // Хим.-фарм. журнал. - 1995. - № 9. - С.61-64.

4. Конкина И.Г. Сравнительная оценка реакционной способности кверцетина и дигидрокверцетина по отношению к пероксильным радикалам / И.Г.Конкина, С.А. Грабовский, Ю.И. Муринов, Н.Н. Кабальнова // Химия растительного сырья. - 2011. - № 3. - С.207-208.