Ферменты, например лигазы (6.), проферменты, композиции их, способы получения, активирования, ингибирования, разделения или очистки ферментов: ....получаемые из бактерий – C12N 9/52

Изобретение относится к области биохимии и молекулярной биологии прокариотической клетки и касается способа получения положительно заряженных белковых фракций с ингибирующей в отношении трипсина активностью в растущей популяции Escherichia coli. Способ включает консервацию клеток в присутствии забуференного 80-90% глицерина с последующим снятием клеточных оболочек 3% тритоном Х-100, экстракцию возрастающими концентрациями солей: 0,14 М, 0,35 М; 2 М NaCl, 6 М гуанидин гидрохлоридом с 0,1% в-меркаптоэтанолом, выделение из вышеперечисленных фракций положительно заряженных белков с помощью ионообменной хроматографии с амберлитом ИРЦ-50 в прерывистом градиенте гуанидин гидрохлорида: 6%, 8,9%, 10,6%, 13% в 0,1 М калий-фосфатном буфере рН 6,8 и определение в них ингибирующей в отношении трипсина активности. Представленное изобретение может быть применено к анализу молекулярно-генетических механизмов формирования структуры клетки прокариот и роли белковых компонентов в их организации, а также особенностей ремоделирования генома. 9 ил., 1 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Описан пергидролазный фермент, который способен гидролизовать n-нитрофенилкапроат (pNC6) или n-нитрофенилоктаноат (pNC8) в присутствии перекиси, где указанный фермент включает одну из следующих комбинаций аминокислотных замен: Ala в положении 154 и Met в положении 194; Gly в положении 154 и Val в положении 194; или Gly в положении 12 и Met в положении 194, где указанные положения аминокислот позиционно эквивалентны положениям 12, 154 и 194 в последовательности SEQ ID NO: 2 пергидролазы М. smegmatis и где указанный фермент продуцирует перкислоту. Раскрыты: выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая указанный пергидролазный фермент; рекомбинантная нуклеиновая кислота, экспрессирующая пергидролазный фермент, включающая промотор и указанную выделенную нуклеиновую кислоту; вектор экспрессии, включающий указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту; клетка-хозяин, содержащая рекомбинантную нуклеиновую кислоту и продуцирующая пергидролазный фермент. Описаны композиции для мойки, отбеливания и дезинфекции, включающие эффективное количество пергидролазного фермента и источник перекиси водорода. Предложены способы мойки, отбеливания и дезинфекции, включающие поддержание субстрата в присутствии указанных композиций для мойки, отбеливания или дезинфекции указанного субстрата, соответственно. Кроме того, предложено применение указанного выделенного пергидролазного фермента для гидролиза ацильного эфирного субстрата, содержащего до 8 атомов углерода, в присутствии перекиси водорода. Изобретение позволяет осуществлять реакцию гидролиза n-нитрофенилкапроат (pNC6) или n-нитрофенилоктаноат (pNC8) в присутствии перекиси водорода с образованием перкислот. 13 н. и 6 з.п. ф-лы, 5 табл., 4 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой новую сериновую протеазу, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична последовательности протеазы 1AG3 Streptomyces дикого типа. Также настоящее изобретение относится к последовательностям нуклеиновых кислот, кодирующих протеазу, а также к клеткам-хозяевам, моющим композициям и корму для животных, содержащим предлагаемую сериновую протеазу. Изобретение позволяет расширить ассортимент ферментов, а именно сериновых протеаз, имеющих высокую ферментативную активность. 9 н. и 23 з.п. ф-лы, 8 ил., 16 табл., 13 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Способ получения фракции из клеток Escherichia coli, обладающей ингибирующей протеазы активностью, предусматривает консервирование клеток бактерий в присутствии забуференного 80-90% глицерина, обработку 3% тритоном X-100 с целью снятия клеточной оболочки. Полученные цитоплазматические белки экстрагируют возрастающими концентрациями солей, а именно 0,14 М, 0,35 M, 2 М NaCl, 6 М гуанидин гидрохлоридом с 0,1% -меркаптоэтанолом. Осуществляют аффинную хроматографию на сефарозе 4В с иммобилизованным трипсином и оценивают ингибирующую протеазы активность в элюатах. Изобретение может быть использовано при анализе молекулярно-генетических механизмов формирования структуры клетки прокариот и роли белковых компонентов в их организации, а также особенностей ремоделирования генома, что является необходимым для раскрытия путей регулирования механизмов воздействия макро- и микроорганизмов, а также поиска новых мишеней для лекарственных средств и разработки экологически безопасных новых лечебных препаратов. 3 табл., 4 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения IgAl-протеазы из N. meningitidis. Способ состоит в выращивании культуры N. meningitidis серогруппы А штамм А 208 на модифицированной питательной среде Франца, с последующей инактивацией культуральной жидкости цетавлоном до конечной концентрации 0,1% и осаждением микробной массы центрифугированием, выделением IgAl-протеазы путем очистки и лиофильным высушиванием продукта. Для выделения IgAl-протеазы используют обе фракции - цетавлоновый супернатант и цетавлоновый осадок. Полученный осадок многократно экстрагируют, экстракты осадка и супернатант концентрируют методом ультрафильтрации. Полученные концентраты фракционируют методом абсорбционной хроматографии на колонке с сорбентом силохром-80 при температуре +8°С, уравновешенной 0,02 М фосфатно-солевым буферным раствором, рН 7,0, причем IgAl-протеазу получают при промывке сорбента указанным буферным раствором. Изобретение позволяет упростить способ получения IgAl-протеазы из N. meningitidis за счет замены многостадийной инактивации возбудителя на одностадийную обработку цетавлоном, исключения стадии гель-проникающей хроматографии и повысить экологическую безопасность процесса в целом. Изобретение позволяет также получить компонент вакцины неполисахаридной природы для защиты от заражения менингококком серогруппы В. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 табл., 6 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к генной инженерии, и может быть использовано в биомедицинской промышленности. Предложен способ получения целевого пептида путем расщепления полипептида или слитого белка вариантом протеазы OmpT с заменой аминокислоты в положении 97 аминокислотой, выбранной из группы, включающей аланин, лейцин, фенилаланин, метионин, серин, треонин, цистеин, аспарагин, глутамин, глутаминовую кислоту и гистидин, по сайту, структура которого характеризуется общей формулой Pn Р2-Р1-Р1'-Р2' Pn', где P1 - аргинин или лизин, Р2 и Р2' - аминокислота, не являющаяся глутаминовой или аспарагиновой кислотой, а Р1' - аланин, валин, изолейцин, фенилаланин, метионин, серин, треонин, цистеин, тирозин или аспарагин. Применение изобретения может обеспечить эффективное и специфическое выделение терапевтических пептидов с любым типом N-концевой последовательности. 2 н. и 20 з.п.ф-лы, 3 табл., 20 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой фермент карбоксипептидазу KПSB. Также изобретение относится к штамму Streptomyces bikiniensis ВКПМ Ас-1783-продуценту карбоксипептидазы KПSB и способу микробиологического синтеза карбоксипептидазы KПSB. Изобретение позволяет расширить арсенал карбоксипептидаз с широкой специфичностью и способных эффективно отщеплять аминокислотные остатки различной природы от С-конца белков и пептидов. 4 н.п. ф-лы, 4 ил., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложена мутантная карбамоилфосфатсинтетаза из Escherichia coli, в которой последовательность аминокислот, соответствующая положениям 947-951 в природной карбамоилфосфатсинтетазе, заменена любой из последовательностей аминокислот SEQ ID NO:1 - SEQ ID NO:9. Описана также аналогичная мутантная карбамоилфосфатсинтетаза из Escherichia coli, содержащая любые делеции, замены, вставки или добавления одной или нескольких аминокислот в одном или множестве положений, кроме 947-951. Предложен фрагмент ДНК, кодирующий указанные мутантные карбамоилфосфатсинтетазы, а также способ продукции производного карбамоилфосфата с использованием штамма Escherichia coli, трансформированного указанным фрагментом ДНК. В изобретении описываются также различные штаммы Escherichia coli, каждый из которых трансформирован предложенным фрагментом ДНК: штамм Escherichia coli 311 (ВКПМ В-8085)-продуцент оротовой кислоты, штамм Escherichia coli 333 (ВКПМ В-8084) - продуцент L-аргинина и цитруллина, штамм Escherichia coli 374 (ВКПМ В-8086) - продуцент цитруллина. Использование изобретения позволяет получать повышенные количества производных карбамоилфосфата, таких как L-аргинин, цитруллин, производных пиримидина, по сравнению с природными штаммами Escherichia coli. 7 н. и 3 з.п. ф-лы, 2 ил., 5 табл.