Ферменты, например лигазы (6.), проферменты, композиции их, способы получения, активирования, ингибирования, разделения или очистки ферментов: ...протеиназы – C12N 9/50

Изобретение относится к биохимии и молекулярной биологии эукариотической клетки. Предложен способ получения ядерных протеиназ из негистоновых и гистоновых белков растений, в котором первоначально в определенные интервалы времени от начала замачивания 0 ч, 3 ч, 6 ч, 9 ч, 12 ч, 15 ч, 18 ч, 21 ч проводят отделение зародышей от эндосперма с последующей консервацией зародышей в забуференном 80-90% глицерине при минус 25°С, выделяют клеточные ядра, проводят экстракцию ядерных фракций возрастающими концентрациями 0,14 М, 0,35 М, 2 М хлористого натрия и 6 М гуанидин гидрохлорида с 0,1% -меркаптоэтанолом, выделяют из вышеперечисленных фракций гистоновые и негистоновые белки с помощью ионообменной хроматографии с амберлитом ИРЦ-50 в прерывистом градиенте гуанидин гидрохлорида: 6%, 8,9%, 10,6%, 13%, 40% на 0,1 М калий-фосфатном буфере рН 6,8, пропускают полученные белки с помощью метода аффинной хроматографии через колонку с сефарозой 4В с иммобилизованным ингибитором трипсина с последующей оценкой протеолитической активности. Изобретение может применяться для анализа молекулярно-генетических механизмов формирования структур клеточного ядра, что необходимо для получения дополнительной информации в разработках и построении компьютерных моделей организации генных и эпигенных сетей управления. 4 ил.

Группа изобретений относится к хлебопекарной промышленности. Способ улучшения легкости разжевывания хлебобулочных изделий включает добавление по меньшей мере одной средне-термостойкой или термостойкой сериновой протеазы или металлопротеазы в указанное хлебобулочное изделие, где измеряют параметры текстуры, представляющие собой силу (г) и полную работу (г·сек), необходимые для разрушения идентичного образца хлебобулочного изделия. Сила и полная работа улучшены по меньшей мере на 10% по сравнению с идентичным образцом, но не содержащим по меньшей мере одной из указанных сериновой протеазы или металлопротеазы. Отношение между активностью указанной сериновой протеазы или металлопротеазы при оптимуме температуры и активностью указанной сериновой протеазы или металлопротеазы при 25°С составляет более 10. Кроме того, группа изобретений предусматривает улучшитель легкости разжевывания мягких хлебобулочных изделий, содержащий термостойкую металлопротеазу, где отношение между активностью указанной термостойкой металлопротеазы при оптимуме температуры и активностью указанной протеазы при 25°С составляет более 10, а также улучшитель легкости разжевывания хлебобулочных изделий с корочкой, содержащий от 1300 до 10400 единиц Taq протеазы/100 кг муки. Улучшаются легкость разжевывания и параметры текстуры хлебобулочных изделий. 3 н. и 18 з.п. ф-лы, 5 ил., 12 табл., 13 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано при получении рекомбинантных форм представляющих практический интерес белков. Предложен способ получения рекомбинантного белка через его гибридный предшественник с природным сайтом расщепления энтеропептидазой, который обеспечивает повышение качества (гомогенности) и выхода целевого продукта в условиях, когда гибридный белок обнаруживает дополнительные (скрытые) сайты расщепления энтеропептидазой. Результат достигается путем замены в природном сайте расщепления энтеропептидазой Асп-Асп-Асп-Асп-Лиз аминокислотного остатка лизина (Лиз) аминокислотным остатком аргинина (Арг) и последующего расщепления гибридного предшественника легкой каталитической субъединицей энтеропептидазы человека или быка. 3 табл., 3 ил., 4 пр.

Изобретение относится к области иммунологии и генной инженерии. Предложена ферментативно неактивная IgA1 протеаза с заменой Ser267Ala для применения в качестве компонента поливалентной вакцины, предназначенной для защиты человека от менингококковой инфекции и других микроорганизмов, патогенность которых обусловлена IgA1 протеазой. Изобретение включает полинуклеотид, кодирующий названную мутантную форму IgA1 протеазы Neisseria meningitidis серогруппы В; содержащую данный полинуклеотид рекомбинантную плазмидную ДНК, штамм Escherichia coli - продуцент мутантной формы IgA1 протеазы по изобретению; способ получения рекомбинантной формы фермента с помощью технологии рекомбинантных ДНК и рекомбинантную инактивированную IgA1 протеазу, проявляющую повышенный в сравнении с ферментом дикого типа уровень иммуногенности. 5 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 табл., 5 ил., 7 пр.

Изобретение относится к области биохимии и биотехнологии. Штамм Escherichia coli ВКПМ В-10996 культивируют на питательной среде КС, содержащей, мас.%: пептон 2-4, дрожжевой экстракт 1-2 и вода - остальное в присутствии селективного антибиотика до стационарной фазы роста при температуре от 20 до 30°С. Разводят полученную культуру свежей порцией той же среды в соотношении от 1:1 до 1:3. Одновременно вносят индуктор и продолжают культивировать в течение не менее 4 часов. Проводят очистку синтезированной протеиназы. Это обеспечивает получение ферментативно активной протеиназы Ulp275 - варианта SUMO-протеиназы Ulp1 дрожжей Saccharomyces cerevisiae, которая включает в свой состав каталитический домен протеиназы Ulp1 и содержит на С-конце последовательность из 6 остатков гистидина. 9 пр.

Изобретение относится к прикладной биохимии, медицине, ветеринарии и клинической лабораторной диагностике и касается способа определения активности тканевых, бактериальных, вирусных и грибковых протеиназ, расщепляющих иммуноглобулины различных классов. Способ включает сенсибилизацию планшета бактериальным антигеном любого представителя условно патогенной микрофлоры, нанесение на сорбированный антиген антител классов IgG, IgM и IgA, проведение реакции протеолиза путем инкубации в лунках планшета исследуемой биологической жидкости вместе с ингибиторами активных центров ферментов (сериновых, цистеиновых, металлзависимых), отмывку продуктов реакции и расчет активности фермента с соответствующим типом активного центра. Представленное изобретение позволяет одновременно определить активность протеиназ различного происхождения с различными типами активных центров. 1 з.п. ф-лы, 4 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и химико-фармацевтической промышленности. Способ получения суммы водорастворимых протеолитических ферментов из высушенного млечного сока незрелых плодов дынного дерева предусматривает экстракцию сырья водой при комнатной температуре и перемешивании, разделение твердой и жидкой фаз и выделение очищенного продукта. При этом водное извлечение, полученное после разделения твердой и жидкой фаз, дополнительно фильтруют через фильтр с размером пор (0,45-2,0) мкм. Сушат методом распыления до получения очищенного продукта в виде сухого экстракта с протеолитической активностью не менее 3,5 ПЕ/мг препарата и содержанием белка от 0,43-0,50 мг/мг препарата. Полученный сухой экстракт растворяют в воде, осуществляют стерилизирующую фильтрацию и лиофильную сушку раствора. Способ позволяет получить продукт с высокой протеолитической активностью и содержанием белка. 1 з.п. ф-лы.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложено применение бактериальной протеазы, полученной из Bacillus licheniformis, с аминокислотной последовательностью, приведенной в материалах заявки, в качестве лекарственного средства для лечения недостаточности экзокринной функции поджелудочной железы. Изобретение расширяет арсенал средств для лечения экзокринной недостаточности поджелудочной железы. 2 з.п. ф-лы, 4 табл.

Изобретение относится к физиологии и биохимии растений. Первоначально проращивают семена пшеницы в 0,004 мМ растворе бутирата натрия, в определенные интервалы времени от начала замачивания 0 ч, 3 ч, 6 ч, 9 ч, 12 ч, 15 ч, 18 ч, 21 ч проводят отделение зародышей от эндосперма с последующей консервацией зародышей в забуференном 80-90% глицерине при минус 25°С, выделяют клеточные ядра, проводят экстракцию ядерных фракций возрастающими концентрациями 0,14 М, 0,35 М, 2 М хлористого натрия и 6 М гуанидин гидрохлорида с 0,1% -меркаптоэтанолом и определяют в вышеперечисленных ядерных фракциях протеолитическую и ингибиторную активности. Изобретение позволяет реализовать указанное назначение. 1 табл., 4 ил.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии и касается полинуклеотида, кодирующего полипептид с цистеинпротеазной активностью. Изобретение относится также к трансформированной указанным полинуклеотидом клетке кофейного дерева. Изобретение позволяет модулировать уровень предшественников аромата кофе в сырых (необжаренных) кофейных зернах. 8 н. и 6 з.п. ф-лы, 24 ил., 7 табл.

Изобретение относится к пищевой промышленности. Способ предусматривает мойку сырья, его измельчение, консервирование, проведение автолиза, центрифугирование для отделения жидкого ферментного препарата, расфасовку и хранение. После мойки сырье ополаскивают анолитом электрохимически активированной воды. При консервировании добавляют хлористый натрий в количестве 3-4% к массе сырья. Автолиз осуществляют с использованием католита электрохимически активированной воды в количестве 30% к массе сырья в течение не более 2 ч при температуре 40°С. Изобретение позволяет сократить процесс автолиза и уменьшить количество вносимого консерванта.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в парфюмерно-косметической промышленности, кожевенном производстве, меховом производстве, химико-фармацевтической промышленности. Способ предусматривает выделение фермента из замороженного гепатопанкреаса краба посредством автолиза. Автолиз осуществляют в растворе деионизированной воды температурой не выше 21°С, при соотношении гепатопанкреас краба : деионизированная вода 1:4 соответственно и периодическом перемешивании в течение 14-15 ч. Полученную смесь фильтруют при температуре не выше 21°С под давлением через сито с размером ячей 5 мм, затем через фильтрующие устройства с размером пор 1,5 и 0,1 мм соответственно. К полученному фильтрату сначала добавляют раствор пищевой соды и перемешивают 5 мин. Затем к полученной смеси добавляют раствор аскорбата хитозана, температурой не выше 21°С, при общем соотношении частей фильтрат : раствор пищевой соды : раствор аскорбата хитозана 1,25:0,15:1 соответственно. Смесь перемешивают в течение 10-15 мин. Выдерживают в течение 1,5 ч до расслоения на белковую и липидную фракции. Белковую фракцию направляют на последовательную микрофильтрацию, затем ультрафильтрацию с охлаждением фильтрата до 12°С. Ультрафильтрацию проводят в замкнутом цикле при подаче деионизированной воды и поддержании соотношения белкового раствора и деионизированной воды 2:1. Изобретение позволяет упростить процесс получения ферментного препарата, дает возможность его легко автоматизировать, повысить экологичность процесса. 1 з.п. ф-лы.