Получение мутаций или генная инженерия, ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка, использование их хозяев: ...векторы или экспрессионные системы, специально приспособленные для эукариотических хозяев – C12N 15/79

Изобретение относится к области биохимии, в частности к искусственным белкам-иммуногенам, имеющим свойства антигенов меланомы. Заявлен искусственный ген, кодирующий полиэпитопный белок-иммуноген MEL-TCI-A0201, содержащий множественные цитотоксические рестриктированные HLA-A*0201 и Т-хелперные эпитопы антигенов меланомы NY-ESO-1, MART1, MAGE-A1, MAGE-A3, MAGE-A11, MAGE-C1, имеющий последовательность длиной 1535 п.н., представленную на Фиг. 3. Также заявлены рекомбинантная плазмидная ДНК, содержащая указанный искусственный ген, и белок-иммуноген MEL-TCI-A0201 со свойствами антигенов меланомы. Изобретение позволяет повысить иммуногенность искусственного полиэпитопного Т-клеточного иммуногена, индуцирующего более высокий уровень ответа цитотоксических Т-лимфоцитов. 3 н.п. ф-лы, 11 ил., 3 табл., 2 пр.

Представленные изобретения относятся к области биомедицины и касаются полинуклеотидной последовательности, кодирующей сконструированный белок пертактин (Prn), вектора, включающего такую последовательность, и композиций, содержащих белок или вектор. Охарактеризованная полинуклеотидная последовательность кодирует 300 первых аминокислот, ближайших к N-концу данного типа природного, зрелого Prn (PrnX300), и аминокислотную последовательность, включающую 620 последних аминокислот, ближайших к С-концу данного типа природного, зрелого Prn (PrnY620), с получением сконструированного пертактина PrnX300-PrnY620 из рода Bordetella. Сконструированные молекулы Prn включают в своей структуре полиморфизмы из различных штаммов B. pertussis и вызывают иммунные ответы с повышенной защитной способностью и опсонофагоцитирующей активностью, превышающими соответствующие показатели предшествующих вакцин. Получаемый по представленному изобретению белок может применяться в медицине и ветеринарии в качестве компонента противобактериальных вакцин против Bordetella pertusis. 5 н. и 7 з.п.ф-лы, 3 ил., 3 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к молекуле нуклеиновой кислоты, которая является циклическим или линейным вектором, пригодным для экспрессии, по меньшей мере, одного целевого полипептида в клетках млекопитающих, включающая (а) по меньшей мере, одну экспрессирующую кассету (POI) для экспрессии целевого полипептида; (б) экспрессирующую кассету (MSM), включающую ген селективного маркера млекопитающих; (в) экспрессирующую кассету (MASM), включающую амплифицированный ген селективного маркера млекопитающих; причем экспрессирующая кассета (POI) фланкирована в направлении 5 кассетой экспрессии (MASM), кассета экспрессии (MSM) локализована в направлении 3 от кассеты экспрессии (POI) и в которой кассеты экспрессии (MASM), (POI) и (MSM) расположены в той же ориентации от 5 к 3 . Также раскрыты способ получения указанной молекулы нуклеиновой кислоты вектора, клетка млекопитающего-хозяина, включающая указанную молекулу нуклеиновой кислоты вектора, способ получения клетки-хозяина, содержащей указанную молекулу нуклеиновой кислоты вектора, а также способ получения целевого полипептида, используя указанную клетку-хозяина. Изобретение позволяет эффективно получать целевой полипептид в клетках млекопитающего. 5 н. и 19 з.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл., 13 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к области генной терапии. К рассмотрению предложен способ стимулирования регенерации спинного мозга проводят путем введения в область повреждения вектора на основе двухкассетной плазмиды pBud-VEGF-FGF2, одновременно экспрессирующей комбинацию двух клонированных генов нейротрофических и ангиогенных факторов человека VEGF и FGF2. Использование изобретения обеспечивает увеличение эффективности восстановления функции спинного мозга, что может найти дальнейшее применение в лечении пациентов с травматическим повреждением спинного мозга. 2 з.п. ф-лы, 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу получения иммортализованной клетки человека, стабильно трансфицированной последовательностью нуклеиновой кислоты, стабильно трансфицированной иммортализованной клетке человека, полученной данным способом, способу рекомбинантной продукции целевого белка человека и применению вектора трансфекции. Способ получения иммортализованной клетки человека включает трансфекцию иммортализованной клетки-хозяина человека в бессывороточных условиях вектором трансфекции, содержащим ген, кодирующий целевой белок человека, промотор и сигнал полиаденилирования (полиА) гормона роста быка, где указанный промотор и сигнал полиА связаны с 5'- и 3'-концом гена, кодирующего целевой белок человека соответственно и начало репликации. Указанный вектор трансфекции дополнительно несет, по меньшей мере, один ген маркера селекции. Отбирают стабильно трансфицированные клетки. Предложенное изобретение позволяет получить стабильно трансфицированные иммортализованные клетки человека для получения рекомбинантных белков человека. 4 н. и 12 з.п. ф-лы, 16 ил., 2 табл., 5 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Описана эукариотическая клетка-хозяин для экспрессирования слитого белка, которая содержит рекомбинантный слитый белок в рекомбинантных подобных белковым тельцам упорядоченных структурах (RPBLA). Указанный слитый белок содержит две последовательности, связанные вместе, где одна последовательность является индуцирующей белковые тельца последовательностью (PBIS), а другая является биологически активным полипептидом, где индуцирующая белковые тельца последовательность содержит последовательность проламина. Указанный биологически активный полипептид природно обнаруживается во втором типе клеток, который отличается от указанной эукариотической клетки-хозяина. Представлены рекомбинантные подобные белковым тельцам упорядоченные структуры (RPBLA) для сборки слитого белка, которые содержат заключенный в мембрану слитый белок. Также предложен способ получения биологически активного полипептида и вакцина или инокулят, содержащие иммуногенно эффективное количество рекомбинантных подобных белковым тельцам упорядоченных структур (RPBLA), которые содержат рекомбинантный слитый белок, растворенный или диспергированный в фармацевтически приемлемом разбавителе. 5 н. и 33 з.п. ф-лы, 8 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению рекомбинантного фактора свертываемости крови VIII, и может быть использовано в медицине. Конструируют экспрессионную плазмидную ДНК pOptivec/F8BDD, кодирующую рекомбинантный фактор свертываемости крови VIII с делецией В-домена, которой трансформируют клетки линии DG-OV-F8BDD-18 для продуцирования. Изобретение обеспечивает высокий уровень секреции рекомбинантного фактора свертываемости крови VIII с делецией В-домена в бессывороточную культуральную среду. 2 н.п. ф-лы, 1 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к генетической инженерии, и может быть использовано в медико-биологической промышленности. Предложена рекомбинантная плазмида pBMC-RT(A)-hum, предназначенная для экспрессии обратной транскриптазы вируса иммунодефицита человека и отличающаяся тем, что содержит искусственный ген (RT(A)-hum) синтезируемого фермента, который характеризуется последовательностью нуклеотидов, оптимально адаптированной к экспрессии в клетках млекопитающих. Использование рекомбинантной плазмиды по изобретению обеспечивает существенное (в 6-8 раз) повышение выхода целевого белка по сравнению с прототипом. 4 ил., 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к получению белков-цитокинов, и может быть использовано в области клеточных технологий. Получают полипептид, связывающий рецептор Zalpha11-лиганда. Нуклеотидную последовательность, кодирующую новый полипептид, в составе вектора экспрессии вводят в клетку-хозяина и производят полипептид. Изобретение позволяет эффективно регулировать пролиферацию и/или развитие гемопоэтических клеток in vitro и in vivo. 14 н.п. ф-лы, 1 ил., 6 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается получения белка фактора VII методом рекомбинантных ДНК. Сконструирована рекомбинантная плазмидная ДНК для экспрессии фактора свертывания крови VII в клетках млекопитающих, представляющая собой продукт лигирования фрагмента кДНК гена фактора VII человека, фланкированного сайтами узнавания рестриктазами XhoI и BamHI, с большим XhoI/BglII фрагментом вектора pEFZeo, включающим гены устойчивости к ампициллину и зеоцину. В результате трансформации клеток ВНК новой рекомбинантной плазмидой получена линия клеток BHK/F7, продуцирующая рекомбинантный белок фактора VII с выходом до 40 мкг/мл. 2 н.п. ф-лы, 4 ил.

Изобретение относится к области генетической инженерии, биотехнологии, иммунологии и медицины и может быть использовано для получения противоопухолевых вакцин и лечения меланомы. Сущность изобретения составляют вакцинные композиции на основе белков теплового шока и антигенных пептидов для лечения опухолевых заболеваний, содержащие гибридный белок, состоящий из белка теплового шока семейства HSP70 и одного из специфических пептидов меланомы MAGE (A1, А2, A3) или gp 100, а также пригодный фармацевтический носитель. Предлагается также способ получения указанных гибридных белков путем экспрессии их генов в составе синтетических рекомбинантных векторов в штаммах-продуцентах клеток Е coli BL21 (DE3). Преимущество изобретения заключается в повышении иммуногенности. 3 н.п. ф-лы, 1 табл., 2 ил.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генетической инженерии. Сконструированные in vitro рекомбинантные плазмидные ДНК содержат полученные генно-инженерными методами искусственные гены легкой и тяжелой цепей полноразмерного человеческого антитела. Гены созданы на основе вариабельных фрагментов легких и тяжелых цепей рекомбинантного антитела 1F4 и константных генов IgG1 человека, цитомегаловирусного промотора и сайта полиаденилирования BGH. Плазмиды обусловливают биосинтез в клетках млекопитающих рекомбинантных полноразмерных человеческих антител класса IgG1. Данные антитела специфически взаимодействуют с вирусом осповакцины. Константа аффинности для полученных рекомбинантных антител составляет 3,54·10 ⁹±0,38·10⁹ М ^-1. Плазмиды применяются путем совместной котрансфекции клеток человека НЕК 293Т. Полученное полноразмерное рекомбинантное антитело против белка 27 кДа вируса осповакцины может стать основой для создания фармацевтических препаратов для диагностики ряда поствакцинальных осложнений, вызываемых вирусом осповакцины. При этом препараты будут содержать уменьшенные терапевтически дозы иммуноглобулинов, что обеспечит сведение к минимуму нежелательного иммунного ответа на вводимый препарат у пациентов. 3 н.п. ф-лы, 7 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к медицине, иммунологии. Рекомбинантная вакцина против ВИЧ-1 представляет собой комбинацию иммуногенов, в виде мицеллоподобных частиц, включающая рекомбинантную плазмидную ДНК pcDNA-TCI, покрытую конъюгатом спермидина-полиглюкина с рекомбинантным белком TBI, содержащим консервативные Т- и В-клеточные вируснейтрализующие эпитопы, в стабилизирующей смеси. При иммунизации созданной вакцины индуцируется выработка специфических антител, обладающих вируснейтрализующей активностью, а также специфический цитотоксический иммунный ответ. 1 табл., 5 ил.

(56) (продолжение):

CLASS="b560m"DNA-vaccine construction encoding multiple CTL-epitopes of major HIV-1 antigens, Vaccine, 22, 2004, p.1672-1682.

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для специфической профилактики натуральной оспы и вирусного гепатита В. Набор включает две таблетки, каждая из которых содержит стабилизирующие добавки, наполнитель и лиофилизированный живой вирусный материал, наработанный на основе рекомбинантного штамма ВОВ с типичными свойствами ВОВ, экспрессирующего белки preS2-S и HBs вируса гепатита В, иммунизирующая доза первой из которых составляет минимальное количество вирусного материала, достаточное для получения слабого иммунного ответа в организме при незначительной реактогенности, а иммунизирующая доза второй - максимальное количество вирусного материала, которое вызывает выраженный и длительно сохраняющийся иммунный ответ в организме без отрицательного побочного на него действия. Способ вакцинации включает использование набора таблеток бивакцины, в соответствии с которым вначале принимают первую таблетку с минимальной дозой бивакцины, а вторую таблетку с максимальной дозой бивакцины принимают до истечения времени формирования гуморального иммунного ответа (через 7-14 дней) после введения в организм первой таблетки с минимальной иммунизирующей дозой бивакцины. Преимущество изобретения заключается в создании стойкого иммунитета, 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 6 табл.

Изобретение относится к области генной инженерии. Предложен способ модификации интересующего эндогенного гена или хромосомного локуса в эукариотических клетках. Способ предусматривает получение большого клонированного геномного фрагмента, размером более 20 т.п.н., и создание на его основе с использованием бактериальной гомологичной рекомбинации большого нацеливающего вектора (LTVEC). Далее проводят введение LTVEC в эукариортические клетки для модификации эндогенного гена или хромосомного локуса. В заключение проводят количественный анализ для определения модификации аллеля (МОА) в этих клетках. Способ позволяет осуществлять модификацию большими последовательностями ДНК. Описано также применение этих клеток для генерирования организмов, несущих эту генетическую модификацию. 15 н. и 21 з.п. ф-лы, 6 ил., 2 табл.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и может быть использовано в медицине. При анализе мДНК клеточных линий плоскоклеточных карцином различного происхождения выявлены последовательности, представляющие собой транскрипты реаранжированных генов SCCA1 и SCCA2. Установлено, что результатом реаранжировки является образование слитого гена, состоящего из экзонов 2-7 гена SCCA1 и экзона 8 гена SCCA2 или из экзонов 2-7 гена SCCA2 и экзона 8 гена SCCA1. Получены экспрессирующие векторы, включающие названные комбинации экзонов двух генов, которые обеспечивают синтез соответствующего слитого белка в клетке-хозяине. Предложенные последовательности нуклеиновых кислот и генетические конструкции на их основе представляют собой новые средства для диагностики плоскоклеточных карцином. 4 н. и 4 з.п. ф-лы., 9 ил., 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к выделенной молекуле ДНК, обеспечивающей устойчивость растений к болезням, а также к способу придания растениям устойчивости к болезням. Выделяют молекулу ДНК, которая включает ген NIM1. Конструируют рекомбинантный вектор, включающий активный в растении промотор, функционально связанный с вышеуказанной молекулой ДНК. Проводят трансформацию растения данным вектором. Изобретение позволяет снизить производственные затраты и повысить сбор сельскохозяйственной продукции. 3 с. и 6 з.п. ф-лы, 19 ил., 18 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генной инженерии, и может быть использовано для получения белка, способного модулировать функцию Fas-рецептора. Полипептид, способный связываться с внутриклеточным доменом Fas-R, получают путем культивирования клеток, трансформированных вектором, содержащим последовательность ДНК, кодирующую указанный полипептид. Модуляцию действия лиганда Fas-R осуществляют с помощью полипептида или мРНК, кодирующей полипептид. Фармацевтическая композиция для модуляции действия лиганда Fas-R на клетки содержит указанный полипептид или вирусный вектор, его кодирующий. Изобретение позволяет разрабатывать терапевтические средства для модуляции цитотоксической активности Fas-R. 9 н. и 3 з.п. ф-лы, 8 ил., 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генной инженерии, и может быть использовано для модулирования действия лиганда FAS-R или TNF на клетки. Полипептид, способный связываться с MORT-1 и воздействовать на внутриклеточный процесс передачи сигнала, инициируемый связыванием FAS лиганда с его рецептором или связыванием TNF с р55-TNF-R, получают путем культивирования клеток, трансформированных вектором, содержащим ДНК, кодирующую полипептид. Модуляцию действия лиганда FAS-R или TNF на клетки или модуляцию индуцируемого MORT-1 действия осуществляют с помощью полипептида, связывающегося с MORT-1, или нуклеотидной последовательности, кодирующей его. Фармацевтическая композиция для модулирования действия лиганда FAS-R или TNF на клетки содержит полипептид, связывающийся с MORT-1. Изобретение позволяет разрабатывать средства для обработки опухолевых или ВИЧ-инфицированных клеток. 13 н. и 42 з.п. ф-лы, 37 ил., 4 табл.