Получение мутаций или генная инженерия, ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка, использование их хозяев: ...векторы или системы экспрессий, специально приспособленные для E.coli – C12N 15/70

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантному получению G-CSF, и может быть использовано для продуцирования G-CSF в клетках Е.coli. Для эффективной продукции белка в клетках Е.coli оптимизируют последовательность ДНК, кодирующую G-CSF. На основе полученной оптимизированной последовательности ДНК конструируют плазмиду pAS017, которая включает также NdeI/BamHI-фрагмент ДНК вектора рЕТМ-50 и имеет физическую карту, представленную на чертеже. 2 н.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генно-инженерному получению белков человека, и может быть использовано для получения эпидермального фактора роста человека (чЭФР) в клетках бактерий в виде гибридного белка с глутатион-3-трансферазой. Конструируют рекомбинантную ДНК, кодирующую гибридный белок GST-hEGF, который состоит из аминокислотной последовательности глутатион-S-трансферазы и аминокислотной последовательности эпидермального фактора роста человека, разделенных сайтом расщепления энтерокиназой, и характеризующуюся нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:1. На основе KpnI/XhoI-фрагмента вектора рЕТ41 и указанной рекомбинантной ДНК создают рекомбинантную плазмиду рАS007 для экспрессии гибридного белка GST-hEGF в клетках E.coli. Изобретение позволяет достичь высоких уровней экспрессии GST-hEGF в клетках E.coli. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл., 5 пр.

Группа изобретений относится к биотехнологии, генной и белковой инженерии, конкретно к рекомбинантной плазмидной ДНК pG1-Rm7, обеспечивающей в клетках Escherichia coli синтез гибридного белка G1-Rm7, способного связывать фактор некроза опухолей и обладающего биолюминесцентной активностью люциферазы Renilla muelleri, где указанная плазмидная ДНК включает нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1, и может быть использована в медицине. Изобретения также относятся к белку pG1-Rm7 с молекулярной массой 65,4 кДа, состоящему из одноцепочечного антитела против фактора некроза опухолей, пептида GGSGGS и модифицированной люциферазы Renalla muelleri и характеризующемся SEQ ID NO: 2. Изобретения позволяют получить высокочувствительный репортер для выявления фактора некроза опухолей методом биолюминесцентного анализа. 2 н.п. ф-лы, 4 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается получения генетической конструкции, обеспечивающей синтез в клетках Escherichia coli рекомбинантного белка p35d.Представлены: рекомбинантная плазмидная ДНК pQE-p35d, обеспечивающая синтез рекомбинантного белка p35dвируса оспы коров и содержащая в соответствии с физической и генетической картой плазмиды, приведенной на фиг. 2: плазмидный вектор pQE30, фрагмент, кодирующий олигопептид MRGSHHHHHHG и фрагмент размером 717 п.о., кодирующий фрагмент белка р35 вируса оспы коров с 1 по 239 аминокислотный остаток (фиг.1а); штамм бактерий Escherichia coli XL1Blue/pQE-p35d В-1252 - продуцент рекомбинантного белка p35dвируса оспы коров, содержащий рекомбинантную плазмидную ДНК pQE-p35d, депонированный в Коллекции бактерий, бактериофагов и грибов ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» под регистрационным номером В-1252 и рекомбинантный белок p35d вируса оспы коров. Охарактеризованные решения могут быть использованы для создания тест-систем и конструирования субъединичных вакцин против ортопоксвирусных инфекций. 3 н. п. ф-лы, 7 ил., 5 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения рекомбинантного антигена G2 хантавирусов. Представленный способ характеризуется тем, что ДНК конструкции pGHF, кодирующая слитый белок из трех частей, где N-концевое положение занимает зеленый флуоресцентный белок GFP, центральное - пептид длиной 73 а.о. с последовательностью аминокислот SRKKCNFATTPICEYDGNMVSGYKKVMATIDSFQAFNTSYIHYTDEQIEWKDPDGMLKDHLNILVTKDIDFDT, а C-концевое - мини-домен фолдон фибритина колифага JS98C3 (фиг.2), вводят в клетки E.coli, культивируют трансформированные данной конструкцией клетки, лизируют биомассу, отделяют нерастворимую фракцию лизата центрифугированием, продукт экспрессии в форме телец включения солюбилизируют с помощью денатурата, проводят хроматографию и используют полученный продукт для выявления специфических антител в сыворотке больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом. Представленное решение позволяет улучшить воспроизводимость и чувствительность иммуноферментного анализа при диагностике ГЛПС. 7 ил.

Изобретение относится к области микробиологии и молекулярной генетики и касается рекомбинантного полипептида А2, ДНК, его колирующей, штамма продуцирующего полипептид А2 и способов использования такого рекомбинантного полипептида. Представленный рекомбинантный полипептид А2, характеризуется аминоксилотной последовательностью из 346 аминокислот, в которой первые 13 аминокислот кодируются последовательностью плазмиды pQE 32 и ковалентно связаны с последующими 333 аминокислотами, кодируемыми последовательностью HAS-связывающего фрагмента хромосомной ДНК штамма DG 13 стрептококков группы G-CTG. Представленная группа изобретений может быть использована в диагностике, например, при создании тест-системы по определению микроальбуминурии - основного лабораторного критерия доклинической стадии диабетической нефропатии, а также в качестве реагента для выделения человеческого сывороточного альбумина аффинной хроматографией и для освобождения сыворотки крови от HAS, что позволит определять другие белки, присутствующие в сыворотке в более низких концентрациях. 7 н. и 2 з.п. ф-лы, 11 ил., 1 табл., 9 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу получения рекомбинантного антигена G2 хантавируса Добрава в клетках Е.coli. Способ характеризуется тем, что ДНК конструкции рНК6, указанной на фиг.1, кодирующая слитой белок из трех частей, где N-концевое положение занимает зеленый флуоресцентный белок GFP, центральное - пептид длиной 73 а.о. с последовательностью аминокислот SRKKCNFATTPICEYDGNMVSGYKKVMATIDSFQAFNTSYIHYTDEQIEW KDPDGMLKDHLNILVTKDIDFDT, а С-концевое - легкая цепь двуцепочечного белкового ингибитора типа Кунитца из клубней картофеля (PKPI-BI), вводят в клетки Е.coli. Культивируют трансформированные данной конструкцией клетки, лизируют биомассу, отделяют нерастворимую фракцию лизата центрифугированием. Продукт экспрессии в форме телец включения солюбилизируют с помощью денатуранта. Проводят хроматографию в денатурирующих условиях. Используют полученный продукт для выявления специфических антител в сыворотке больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом. Предложенное изобретение позволяет получать рекомбинантный антиген G2 хантавируса Добрава в клетках Е.coli с увеличенным выходом. 6 ил., 1 пр.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения белков с новыми свойствами, которые определяются включением в заранее заданное положение не встречающихся в природе аминокислот. В изобретении раскрывается композиция для коэкспрессии в эубактериальной клетке-хозяине ортогональной тРНК (О-тРНК) и ортогональной аминоацил-тРНК синтетазы (О-РС), которая предпочтительно аминоацилирует указанную О-тРНК интересующей неприродной аминокислотой. Композиция по изобретению состоит из двух конструкций нуклеиновой кислоты: первая конструкция содержит последовательности промотора и терминатора из гена пролин-тРНК Е coli. и происходящую из архей экспрессируемую последовательность, которая кодирует одну О-тРНК или представляет собой полицистронный оперон, а вторая конструкция содержит модифицированный промотор glnS E.coli и экспрессируемую нуклеотидную последовательность, кодирующую соответствующую О-РС. Описаны система трансляции, включающая векторные конструкции по изобретению, и способ получения представляющего интерес полипептида, содержащего не встречающуюся в природе аминокислоту в генетически определенном положении. 6 н. и 48 з.п. ф-лы, 8 ил., 7 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарной вирусологии. Предложен штамм E.coli продуцент рекомбинантного белка р30 вируса Африканской чумы свиней (АЧС). Штамм однороден, стабилен при пассировании и культивировании в жидких и твердых питательных средах, устойчив к хлорамфениколу. Изобретение может быть использовано для получения рекомбинантного белка р30 вируса АЧС для диагностических целей. 1 табл., 3 пр.

Рекомбинантная плазмидная ДНК рТВ323 по изобретению, кодирующая гибридный полипептид глутатион-S-трансфераза (GST) и укороченный вариант белка МРТ64 (r МРТ64), имеет среднюю м.м. 3,6 МДа, размер 5574 п.н., состоит из: а) EcoRI-BamHI-фрагмента векторной плазмиды pGEX-2T размером 4938 п.н., содержащего ген -лактамазы, индуцируемый tac-промотор, внутренний ген lacI ^q, кодирующий белок-репрессор лактозного оперона, фрагмент гена глутатион-S-трансферазы из S. japonicum с множественным сайтом для клонирования (МСК) генов в 3'-концевой части этого гена и нуклеотидной последовательностью, кодирующей сайт протеолиза тромбина и располагающейся перед МСК; б) EcoRI-BamHI-фрагмента размером 636 п.н., содержащего фланкированный сайтами для эндонуклеаз рестрикции EcoRI и BamHI укороченный ген МРТ64, полученный амплификацией соответствующего гену фрагмента с геномной ДНК М. tuberculosis; в) генетического маркера - ген -лактамазы, детерминирующий устойчивость трансформированных плазмидой рТВ323 клеток Е. coli к антибиотику ампициллину; г) уникальные сайты рестрикции: BamHI - 930/934, EcoRI - 1566/1570. Рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli BL21/pTB323 - продуцент гибридного полипептида GST- МРТ64 со свойствами микобактериального антигена МРТ64 депонированв Коллекции культур микроорганизмов ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" под № В-1028. Рекомбинантный полипептид GST- MPT64, продуцируемый рекомбинантным штаммом по изобретению, содержит в качестве белка-носителя N-концевой полипептидный фрагмент глутатион-S-трансферазы S.j. (226 а.о., 26,31 кДа) и имеет полную аминокислотную последовательность (431 а.о., 48,76 кДа), приведенную в описании. Использование изобретения позволяет нарабатывать высокоочищенный полипептид в препаративных количествах при сохранении иммуногенных свойств и возможности отделения целевого белка от аминокислотной последовательности белка-носителя для исследования иммуногенных свойств целевого белка. 3 н.п. ф-лы, 4 ил., 4 табл., 6 пр.

Сконструированы полиэпитопные белки, состоящие из двух или более фрагментов белков вируса ящура, в частности серотипа О/Тайвань/99, соединенных линкерными аминокислотными последовательностями. Вакцинный полиэпитопный белок может быть охарактеризован общей формулой VP4(X1-X2)-GRL-VP1(X3-X4)-GRL-VP1(X5-X6)GRL-2C(X7-X8)-GRL-3D(X9-X10)-GRL-3D(X11-X12), где GRL - глицинбогатый линкер, Xn-Xm - целые числа, отражающие номера аминокислотных остатков соответствующего белка вируса ящура, VP4, VP1, 2С, 3D - названия белков ящура. В изобретении раскрыты нуклеотидная последовательность (НП), кодирующая пептиды, входящие в полиэпитопный белок, рекомбинантная плазмида, обеспечивающая синтез гибридного полиэпитопного белка в клетках прокариот (E.coli) и эукариот (растения), состав сольвента для вакцины против вируса ящура на основе полиэпитопного белка. Полиэпитопный белок обладает высокой иммуногенностью и может рассматриваться в качестве кандидата на рекомбинантную вакцину против ящура для сельскохозяйственных животных. 4 н. и 11 з.п. ф-лы, 7 ил., 2 табл., 6 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, генной инженерии и вирусологии. Сконструированная рекомбинантная белковая молекула для получения рекомбинантной вакцины против инфекции, вызванной вирусом «свиного» гриппа (H1N1v-2009). Молекула состоит из остатка метионина, последовательности внеклеточного домена М2 белка от 2 до 24 аминокислоты и последовательности ядерного антигена вируса гепатита В от 4 до 149 аминокислоты. Молекула способна образовывать вирусоподобные частицы. Также раскрыта рекомбинантная нуклеиновая кислота, кодирующая такую молекулу, вектор для ее экспрессии, вирусоподобные частицы, образованные такими молекулами, и вакцина, основанная на полученных вирусоподобных частицах. Полученная вакцина может рассматриваться в качестве кандидата на рекомбинантную вакцину против вируса «свиного» гриппа. 6 н.п. ф-лы, 8 ил., 3 табл., 5 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в биохимии, протеомике и фармакологии для экспрессии и получения сложных трансмембранных белков из бактериальных штаммов-продуцентов. Предложена экспрессирующая конструкция для экспрессии одно- или многопроходных трансмембранных полипептидов в бактериальной клетке-хозяине. Данная конструкция содержит белок-кодирующий полинуклеотид, строго регулируемый промотор, имеющий низкую базальную активность в клетке-хозяине, и лидерную последовательность, содержащую энхансер инициации трансляции. Строго регулируемый промотор содержит, по меньшей мере, один позитивный регуляторный элемент контроля и, по меньшей мере, один негативный регуляторный элемент контроля, причем один или более из позитивных и негативных регуляторных элементов контроля представляет собой гетерологичный регуляторный элемент контроля. Кроме того, предлагается способ получения экспрессированного трансмембранного полипептида и способ его выделения из клетки-хозяина. Предложенные способы обеспечивают получение трансмембранных полипептидов с высокими выходами, с нативной конформацией и/или в растворимой форме. 7 н. и 46 з.п. ф-лы, 28 ил., 6 табл.

В изобретении раскрыта нуклеотидная последовательность (фиг.2), кодирующая иммуногенный полипептид LcrV(G113), на основе которой сконструирована рекомбинантная плазмидная ДНК pETV-I-3455, имеющая размер 6538 п.н., кодирующая иммуногенный полипептид LcrV(G113). Плазмида состоит из репликона плазмиды pBR322, гена -лактамазы, определяющего устойчивость к ампициллину, Т7-промотора, 1ас-оператора, fl-репликона и фрагмента ДНК, фланкированного сайтами для рестриктаз Ndel и HindIII, кодирующего синтез белка LcrV(G113), начинающегося с инициирующего кодона ATG. Описан рекомбинантный штамм бактерий Е. coli BL21(DE3)/pETV-I-3455 - продуцент иммуногенного полипептида LcrV(G113) с аминокислотной последовательностью, представленной на фиг.3, где триптофан в позиции 113 (W113) заменен на глицин. Раскрыт способ получения указанного полипептида путем культивирования штамма Е. coli BL21(DE3)/pETV-I-3455. Клетки разрушают в буферном растворе ультразвуком и выделяют полипептид последовательно гель-проникающей хроматографией с использованием носителя TSK HW-40, анионообменной и гидрофобной хроматографией. Изобретение позволяет получить продукт с высокой иммуногенной и протективной активностью. 5 н.п. ф-лы, 8 ил., 2 табл.

Изобретение относится к области генной и белковой инженерии и касается рекомбинантной плазмидной ДНК pER-Hir, кодирующей гибридный белок, способный к автокаталитическому расщеплению с образованием [Leu1, Thr2]-63-десульфатогирудина, штамму Escherichia coli ER2566/pER-Hir - продуценту указанного белка и способу получения генно-инженерного [Leu1, Thr2]-63-десульфатогирудина. Представленная рекомбинантная плазмидная ДНК состоит из SapI/BamHI-фрагмента ДНК плазмиды pTWIN-1, содержащей промотор и терминатор транскрипции Т7-РНК-полимеразы, усилитель трансляции гена 10 фага Т7, ген -лактамазы (Ар), ген модифицированного мини-интеина Ssp DnaB, со встроенной в него последовательностью хитин-связывающего домена, и SapI/BamHI-фрагмента ДНК, содержащего последовательность гена рекомбинантного [Leu1, Thr2]-63-десульфато-гирудина-1, содержащую в качестве генетического маркера ген -лактамазы (Ар), и уникальные сайты узнавания рестрикционных эндонуклеаз, расположенные на следующем расстоянии влево от сайта BamHI: NruI - 186 п.о., NdeI - 594 п.о., XbaI - 882 п.о., EcoRV - 2913 п.о., HpaI - 2966 п.о. Изобретения позволяют получить рекомбинантный белок [Leu1, Thr2]-63-десульфатогирудин-1, который используют в качестве лекарственного препарата, применяемого для предотвращения гиперкоагуляции крови. 3 н.п. ф-лы, 1 ил.

Изобретение относится к микробиологической промышленности, медицинской биотехнологии и генной инженерии. Предложен новый способ получения безметионинового интерферона-альфа2b человека. Вначале конструируют рекомбинантные плазмидные ДНК, содержащие ген интерферона-альфа2b человека, перед которым расположен сайт протеолиза энтеропептидазой, и трансформируют ими клетки Escherichia coli. Культивируют клетки и выделяют тельца включения синтезированного предшественника. Затем осуществляют частичную ренатурацию выделенного предшественника в присутствии препятствующего замыканию дисульфидных связей дитиоэритриола. Проводят гидролиз предшественника ферментом энтеропептидазой с образованием безметионинового интерферона-альфа2b человека. После завершения реакции гидролиза предшественника проводят полную ренатурацию интерферона-альфа2b человека в присутствии способствующей замыканию дисульфидных связей пары соединений цистин и цистеин. Очистка полученного белка осуществляется методом хроматографии на КМ-сефарозе. 5 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения рекомбинантного интерлейкина-11 (рИЛ-11) человека. Рекомбинантную плазмидную ДНК pET32M/mTrx-rhIL-11 получают способом, который включает синтез четырех фрагментов гена рекомбинантного интерлейкина-11 человека из олигонуклеотидных праймеров, клонирование каждого фрагмента в рестрицированный эндонуклеазой EcoRV плазмидный вектор pGEM5z, трансформацию каждой из 4-х плазмид клеток E.coli штамма DH5a, отбор кодирующих соответствующие фрагменты гена интерлейкина-11 человека клонов, отбор плазмид с фрагментами гена интерлейкина-11 человека без мутаций, объединение всех фрагментов гена рекомбинантного интерлейкина-11 человека в плазмидном векторе pUC19, конструирование вектора рЕТ32М на основе плазмиды pET32b, переклонирование гена рекомбинантного интерлейкина-11 человека в экспрессионный вектор рЕТ32М, кодирующий тиоредоксин 1 E.coli с заменой Asn84/Gln. Полученной ДНК трансформируют клетки штамма E.coli BL21(DE3) с получением штамма E.coli BL21(DE3)/pET32M/mTrx-rhIL-11 - продуцента рекомбинантного интерлейкина-11 человека в составе растворимого слитного белка mTrx-rhIL-11. Изобретение обеспечивает эффективную продукцию рИЛ-11 в клетках E.coli. 3 н.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генной и белковой инженерии, и может быть использовано для получения делеционного варианта рекомбинантного тканевого фактора человека. Данный полипептид содержит внеклеточный и трансмембранный домены тканевого фактора человека. На основе фрагмента ДНК, кодирующего этот полипептид и плазмиды рЕТ28а(+) была получена генетическая конструкция, обеспечивающая биосинтез рекомбинантного тканевого фактора человека. Также предложен штамм Е. coli BL21[DE3]/p6E-tTF, продуцент рекомбинантного тканевого фактора человека. Использование предложенной генетической конструкции или штамма продуцента Е. coli BL21[DE3]/p6E-tTF позволяет увеличить выход рекомбинантного белка и упростить его выделение и очистку. 2 н.п. ф-лы, 4 ил.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Предлагается способ получения экспрессионного вектора, который стабильно наследуется в клетках E.coli. Повышенная стабильность наследования вектора достигается за счет введения в его состав нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1. Эффект стабильного наследования не зависит от положения и ориентации вставки. Введение данной последовательности существенно сокращает частоту потерь как низкокопийных, так и высококопийных векторов. Данное изобретение может найти применение при селекции штаммов, несущих плазмиду, причем при культивировании данных штаммов нет необходимости использовать селективную среду. 1 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается рекомбинантной плазмидной ДНК, содержащаей последовательность гена зрелой стафилокиназы Staphylococcus aureus с заменами кодонов К74, Е75 и R77 на триплеты, кодирующие Ala, штамма Escherichia coli MZ09 и способа получения рекомбинантного белка, содержащего последовательность гена зрелой стафилокиназы с заменами кодонов К74, Е75 и R77 на триплеты, кодирующие Ala. Сущность изобретения включает рекомбинантную плазмидную ДНК, кодирующую последовательность гена зрелого белка стафилокиназы из Staphylococcus aureus с заменами кодонов К74, Е75 и R77 на триплеты, кодирующие Ala, имеющая нуклеотидную последовательность, приведенную на фиг.1. Изобретение также включает штамм Esherichia coli MZ09, продуцент рекомбинантной стафилокиназы, с последовательностью, приведенной на фиг.1, а также способ ее получения. Преимущество изобретения заключается в получении белка стафилокиназы, обладающего высокой фибринолитической активностью, с выходом рекомбинантного белка до 20% от общего количества. 3 н.п. ф-лы, 2 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к реагенту для определения аденозин-5'-трифосфата. Данный реагент содержит мутантную люциферазу светляков Luciola mingrelica (SEQ ID No:2), выделенную из рекомбинантных клеток E.coli, трансформированных плазмидой pETL7, люциферин, сульфат магния, трис-(оксиметил)-аминометан, уксусную кислоту, этиленаминотетраацетат натрия, дитиотреитол, бычий сывороточный альбумин, сахарозу и воду. Предложенное изобретение позволяет повысить чувствительность определения АТФ, а также снизить расход фермента. 1 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, белковой и генной инженерии. Конструируют рекомбинантную плазмиду pETPHOFus, обеспечивающую синтез субстрата летального фактора сибирской язвы в составе одного полипептида с мутированным репортерным ферментом щелочной фосфатазы Escherichia coli. Данный слитый полипептид представляет собой новый высокочувствительный субстрат летального фактора сибирской язвы. Кроме того, предлагается штамм Escherichia coli BL-PHOFus, продуцент слитого полипептида. Штамм обеспечивает высокий выход синтезируемого белка не менее 30 мг на 1 литр жидкой культуры без ферментации. Получаемый субстрат летального фактора сибирской язвы обладает повышенной чувствительностью и специфичностью к расщеплению LF и способен детектировать протеолитическую активность летального фактора сибирской язвы в концентрации до 1 пМ. Данное изобретение может найти применение при клинической диагностике заболевания сибирской язвой; для обнаружения природных очагов сибирской язвы; для скрининга библиотек химических соединений и поиска ингибиторов активности летального фактора сибирской язвы. 2 н.п. ф-лы, 4 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ продуцирования рекомбинантного антитела или его фрагмента, включающий трансформирование клетки E.coli, у которой отсутствует ген, кодирующий pyrC, или его гомолог, вектором, включающим ген, кодирующий указанные рекомбинантное антитело или его фрагмент, и ген pyrC E.coli дикого типа, выращивание указанной клетки E.coli в условиях ограничения пиримидина и выделение указанного антитела или его фрагмента. Изобретение позволяет получать рекомбинантные антитела с высокой степенью эффективности. 5 н. и 5 з.п. ф-лы, 5 ил., 5 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению антимикробного пептида аурелина сцифоидной медузы Aurelia aurita. Конструируют плазмидный вектор pE-Trx-Aur для экспрессии аурелина в клетках Escherichia coli в составе гибридного белка Trx-Aur, состоящий из двух фрагментов ДНК, нуклеотидная последовательность которых приведена в описании. Трансформируют данным вектором родительский штамм Escherichia coli BL21(DE3), получая штамм-продуцент гибридного белка Trx-Aur. Для получения пептида аурелина проводят культивирование клеток полученного штамма-продуцента, затем осуществляют лизис клеток, аффинную очистку гибридного белка Trx-Aur на металлохелатном носителе, расщепление гибридного белка Trx-Aur бромцианом по остатку метионина, введенному между последовательностями аурелина и тиоредоксина, и очистку целевого пептида методом обращенно-фазовой ВЭЖХ. Изобретение позволяет получить биологически активный аурелин по упрощенной технологии и без использования труднодоступного природного сырья. 3 н.п. ф-лы, 4 ил., 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению водорастворимого домена белка Линкс1 человека, и может быть использовано в медицине. Конструируют рекомбинантную плазмидную ДНК рЕТ22b(+)/вд-Линкс1, кодирующую белок, которая содержит NdeI/BamHI-фрагмент ДНК плазмиды рЕТ22b(+) и искусственную последовательность ДНК, кодирующую NdeI/BamHI фрагмент, включающий синтетический ген водорастворимого домена Линкс1 человека, содержащая уникальные сайты узнавания рестрикционными эндонуклеазами, имеющие следующие координаты: XhoI - 158, HindIII - 173, EcoRI - 192, BamHI - 198, Ndel - 430, BglII - 534, MluI - 1256, PstI - 4495. Получают штамм-продуцент белка путем трансформации компетентных клеток Escherichia coli BL21(DE3) рекомбинантной плазмидой рЕТ22b(+)/вд-Линкс1. Изобретение позволяет получить белок со структурой и свойствами, идентичными структуре и свойствам природного водорастворимого домена белка Линкс 1 человека в достаточном количестве, измеряемом в миллиграммах, с уровнем экспрессии не ниже 10% от суммарного клеточного белка. 2 н.п. ф-лы, 1 табл., 4 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медико-биологической промышленности для получения лекарственных препаратов с противоопухолевой активностью. Сконструирована плазмидная ДНК pFK2, обеспечивающая синтез рекомбинантного аналога фрагмента каппа-казеина человека, в клетках Escherichia coli, и описан способ получения рекомбинантного продукта с ее использованием. Рекомбинантный аналог фрагмента каппа-казеина человека, выделенный из клеток Escherichia coli, трансформированных рекомбинантной плазмидной ДНК pFK2, имеет молекулярную массу около 16 кДа; состоит из остатка метионина, фрагмента каппа-казеина человека с 24 по 134 аминокислотный остаток и С-концевого гистидинового тракта и обладает апоптотической активностью по отношению к раковым клеткам. 3 н.п. ф-лы, 6 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой плазмидную ДНК pD4spGBD, обеспечивающую экспрессию рекомбинантного антигена - домена 4 белка LigA L. interrogans в составе химерного белка D4-GBD с 1,3- -глюкансвязывающим доменом (GBD), и получения на их основе субъединичной генно-инженерной вакцины против лептоспироза. Изобретение позволяет обеспечивать развитие интенсивного иммунного ответа и высокий уровень синтеза антител без применения дополнительных адъювантов. 6 н.п. ф-лы, 1 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой плазмидную ДНК pD5spGBD, обеспечивающую экспрессию рекомбинантного антигена - домена 5 белка LigA L. interrogans в составе химерного белка D5-GBD с 1,3- -глюкансвязывающим доменом (GBD), и может быть использовано для получения на их основе субъединичной генно-инженерной вакцины против лептоспироза. Изобретение позволяет обеспечивать развитие интенсивного иммунного ответа и высокий уровень синтеза антител без применения дополнительных адъювантов. 6 н.п. ф-лы, 1 ил.

Изобретение относится к генетической инженерии и может быть использовано для получения гамма-интерферона человека. Конструируют рекомбинантную плазмидную ДНК pTrcIFdL, кодирующую полипептид с активностью гамма-интерферона человека мол. массой 3,06 Md (4,642 т.п.о.) и имеющую физическую карту, приведенную на фиг.1. С помощью плазмидной ДНК pTrcIFdL получают штамм BL21(DE3)/pTrcIFdL - продуцент полипептида с активностью гамма-интерферона человека. Изобретение позволяет получить полипептид с биологической активностью гамма-интерферона человека и повышенной термоустойчивостью, а также увеличить уровень его биосинтеза до 40% от суммарного клеточного белка. 2 н.п. ф-лы, 2 ил.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, в частности к генетической инженерии, и может быть использовано в микробиологической промышленности при получении полусинтетических цефалоспориновых антибиотиков нового поколения. Получена рекомбинантная ДНК, которая кодирует функционально активный гибридный белок (BrdG17ACA-cbd), состоящий из аминокислотной последовательности ацилазы глутарил-7-аминоцефалоспориновой кислоты штамма Brevundimonas diminuta BKM В-1297 и хитин-связывающего домена хитиназы Al Bacillus circulans. Сконструирована рекомбинантная плазмида pSVH0108 для экспрессии BrdG17ACA-cbd в клетках E.coli, содержащая кодирующую гибридный белок последовательность рекомбинантной ДНК под контролем промотора и терминатора РНК-полимеразы фага Т7. В результате трансформации штамма E.coli данной рекомбинантной плазмидой и селекции трансформированных клонов получен новый штамм E.coli BL21(DE3)/pSVH0108 cbd - продуцент гибридного белка BrdG17ACA-cbd, обеспечивающий высокий выход рекомбинантного фермента.3 н.п.ф-лы, 4 ил., 2 табл.