Получение мутаций или генная инженерия, ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка, использование их хозяев: ...общие способы встраивания гена в вектор с образованием рекомбинантного вектора с помощью расщепления и лигирования, использование нефункционирующих линкеров или адаптеров, например линкеры, содержащие последовательность для ограничения эндонуклеазы – C12N 15/66

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генотерапии. Способ предусматривает проведение следующих операций: дизайн кассетной конструкции, синтез олигонуклеотидов; попарный отжиг и достройка частично комплементарных олигонуклеотидов; осаждение и рестрикция фрагментов кассеты подходящими рестриктазами; одновременное лигирование отдельных фрагментов кассеты в одну линейную молекулу; две PCR-амплификации, электрофорез в агарозном мини-геле и электроэлюция; лигирование в вектор pGemT-easy; трансформация и отбор позитивных клонов с помощью colony-гибридизации; секвенирование ДНК плазмидных клонов; переклонирование кассет в вектор для экспрессии. Способ позволяет получить кассетные генетические конструкции, одновременно экспрессирующие несколько shPHK. 8 ил, 1 пр.

Изобретение относится к области генетической инженерии, молекулярной биологии и медицины. Предложен носитель для направленной доставки нуклеиновых кислот в клетки, экспрессирующие рецептор CXCR4, состоящий из последовательности-лиганда к рецептору CXCR4 с последовательностью аминокислот KPVSLSYRSPSRFFESH, линкерного участка из двух молекул -аминогексановой кислоты, соединяющей последовательность-лиганд с последовательностью для компактизации нуклеиновых кислот, последовательности, обеспечивающей компактизацию нуклеиновых кислот и выход комплекса из эндосом CHRRRRRRHC. Изобретение может быть использовано для направленной доставки генетических конструкций в клетки с рецептором CXCR4 на поверхности, таких как злокачественные опухолевые и стволовые клетки, с целью коррекции генных дефектов, воздействия на процессы реализации генетической информации и предотвращения заболеваний. 2 з.п. ф-лы, 7 ил., 4 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу специфического отбора высокоаффинных молекул ДНК (ДНК-аптамеров) к рекомбинантному белку-мишени. Указанный способ включает синтез единой полипептидной цепи рекомбинантного белка, содержащего в своем составе фрагмент глютатион-S-трансферазы, целевой белок-мишень, пептидную последовательность, расщепляемую летальным фактором B. anthracis, и пептид, биотинилирующийся in vivo под действием фермента биотин-лигазы E.coli, связывание полученного рекомбинантного полипептида с библиотекой олигонуклеотидов и иммобилизацию белка на парамагнитных частицах, несущих глютатион, промывку парамагнитных частиц с иммобилизованным полипептидом от несвязавшихся олигонуклеотидов в потоке жидкости, отщепление белка-мишени со связанными ДНК-аптамерами с поверхности парамагнитных частиц летальным фактором B. anthracis, выделение и амплификацию аффинной к рекомбинантному белку-мишени последовательности ДНК в полимеразной цепной реакции и получение набора одноцепочечных ДНК-аптамеров, специфичных к белку-мишени. Изобретение позволяет эффективно получать высокоаффинные специфичные ДНК-аптамеры к рекомбинантным белкам-мишеням. 4 ил., 4 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и генной инженерии. Нетранскрибируемый плазмидный вектор состоит из гена маркера селекции с промотором и терминатором, области инициации репликации и полилинкера, содержащего 15 или более уникальных гексануклеотидных сайтов расщепления эндонуклеазами рестрикции, 3 или более октануклеотидных сайтов расщепления эндонуклеазами рестрикции и два сайта узнавания Xcml, расположенные в центре области полилинкера в противоположной ориентации и образующие при расщеплении указанной рестриктазой непарные выступающие одиночные остатки дезокситимидина на 3 -концах цепей ДНК. Предложена также линеаризованная форма нетранскрибируемого вектора. Предложен также набор, содержащий нетранскрибируемый плазмидный вектор или нетранскрибируемый линейный вектор, лигазу и инструкцию по применению набора. Изобретение позволяет получить векторы, обеспечивающие возможность прямого клонирования ПЦР-продуктов, клонирования GC- AT-богатых последовательностей, модульной сборки генетических конструкций. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 6 ил., 4 табл., 10 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана плазмида, кодирующая эстеразу Psychrobacter cryohalolentis K5 ^T и содержащая NdeI/XhoI - фрагмент ДНК плазмиды рЕТ32а длиной 5,366 т.п.о., включающий промотор бактериофага Т7, усилитель трансляции гена 10 бактериофага Т7, терминатор транскрипции бактериофага Т7, ген bla -лактамазы, определяющий устойчивость трансформированных плазмидой рРС023 клеток к ампициллину, участок ori инициации репликации; и Ndel/Sall - фрагмента ДНК размером 0,869 т.п.о., содержащего ген, кодирующий зрелую форму эстеразы Psychrobacter cryohalolentis K5^T с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2, представленной в описании, с С-концевым гексагистидиновым линкером. Представлен штамм бактерий Escherichia coli, модифицированный указанной плазмидой, - продуцент полипептида с активностью эстеразы Psychrobacter cryohalolentis K5^T. Изобретение позволяет увеличить уровень биосинтеза эстеразы до 20% от суммарного клеточного белка. 2 н.п. ф-лы, 2 ил., 5 пр.

Изобретение относится к генной инженерии и микробиологической промышленности и касается генетической конструкции для экспозиции белка на поверхности клеточной стенки Yarrowia lipolytica. Представленная конструкция содержит промотор, терминатор, сигнальную последовательность, селективный маркер, нуклеотидную последовательность, кодирующую иммобилизируемый белок, и нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы последовательностей, приведенных в списке последовательностей под номером SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:2, или SEQ ID NO:3, или SEQ ID NO:4, или SEQ ID NO:5, или SEQ ID NO:6. Представленное изобретение позволяет упростить процесс очистки продуцируемого клеткой белка и может быть использовано для микробиологического получения белков. 7 ил., 11 пр., 1 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к реагенту для определения аденозин-5'-трифосфата. Данный реагент содержит мутантную люциферазу светляков Luciola mingrelica (SEQ ID No:2), выделенную из рекомбинантных клеток E.coli, трансформированных плазмидой pETL7, люциферин, сульфат магния, трис-(оксиметил)-аминометан, уксусную кислоту, этиленаминотетраацетат натрия, дитиотреитол, бычий сывороточный альбумин, сахарозу и воду. Предложенное изобретение позволяет повысить чувствительность определения АТФ, а также снизить расход фермента. 1 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.