Получение мутаций или генная инженерия, ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка, использование их хозяев: .....действующие на гликозилсодержащие соединения (3.2), например амилаза, галактозидаза, лизоцим – C12N 15/56

Изобретение относится к области биохимии. Описана альфа-D-галактозидаза, обладающая измененной региоспецифичностью по отношению к 1,4-связи и содержащая мутацию либо Pro402Asp, либо Phe328Ala в соответствующем положении аминокислотной последовательности исходного фермента дикого типа, выделенного из штамма Thermotoga maritima MSB8. Предложен способ получения указанной альфа-D-галактозидазы, заключающийся в том, что осуществляют выбор позиций для сайт-направленного мутагенеза аминокислотной последовательности фермента дикого типа следующим образом: а) проводят пространственное наложение активных центров ферментов, обладающих высокой гомологией их аминокислотных последовательностей и сходством трехмерных структур, и кристаллическая структура которых содержит остаток D-галактозы, на основании проведенного наложения структур устанавливают возможное расположение D-галактозы в активном центре -галактозидазы из Thermotoga maritima MSB8, б) уточняют методами молекулярной динамики возможное расположение D-галактозы в активном центре -галактозидазы, определяют общие аминокислотные остатки ферментативного центра, образующие водородные связи с D-галактозой, и выявляют возможные положения D-галактозы относительно пары каталитических аминокислотных остатков фермента, в) проводят in silico мутации -галактозидазы дикого типа, при этом отбирают позиции аминокислотных остатков для сайт-направленного мутагенеза, после выбора позиций один из отобранных на этапе в) аминокислотных остатков замещают другим аминокислотным остатком, а именно либо Pro402Asp, либо Phe328Ala. Изобретение позволяет получить региоспецифичные по отношению к 1,4-связи альфа-D-галактозидазы. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл., 1 пр.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в производстве композиций, предназначенных для удаления крахмалсодержащих загрязнений. Предложены композиции, содержащие активные варианты альфа-амилазы, которые проявляют повышенную термостабильность относительно родительской формы AmyS-подобной альфа-амилазы, из которой они получены путем замены S/Q в положении, соответствующем положению 242 альфа-амилазы с SEQ ID NO: 1. Помимо нового варианта альфа-амилазы композиции по изобретению обычно содержат, по меньшей мере, один дополнительный фермент, детергент, одно поверхностно-активное вещество, один комплексообразователь, окислитель, подкислитель, подщелачивающий агент, источник пероксида, источник жесткости, соль, детергентный комплексообразующий агент, полимер, стабилизирующий агент или кондиционер. Описаны также способы применения этих композиций для расшлихтовки тканого материала, для мойки или очистки изделий, таких как посуда или белье, загрязненных крахмалсодержащими веществами. 5 н. и 5 з.п. ф-лы, 13 табл., 24 ил., 14 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к клетке-хозяину Trichoderma reesei для получения целлюлолитической белковой композиции, целлюлолитической белковой композиции, способам получения и применения композиции. Клетка-хозяин Trichoderma reesei содержит полинуклеотиды, кодирующие гетерологичный полипептид GH61, слитый белок бета-глюкозидазы, целлюлолитические ферменты. Способ получения композиции включает культивирование клетки-хозяина Trichoderma reesei и выделение композиции. Композиция содержит полипептид GH61, слитый белок бета-глюкозидазы и один или более целлюлолитических ферментов. Способ разложения материала, содержащего целлюлозу, характеризуется обработкой материала целлюлолитической белковой композицией. Способ получения продукта ферментации включает осахаривание материала, ферментацию осахаренного материала сбраживающими микроорганизмами и выделение продуктов ферментации. Представленные изобретения могут быть использованы для разложения или преобразования материала, содержащего целлюлозу. 5 н. и 7 з.п. ф-лы, 14 ил., 23 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Описан вариант альфа-амилазы Bacillus licheniformis, имеющий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична последовательности SEQ ID NO: 4 и включает замену S239Q, соответствующую SEQ ID NO:4, содержащейся в описании. Представлены: нуклеиновая кислота, кодирующая указанный вариант; экспрессионный вектор, содержащий указанную нуклеиновую кислоту; и клетка-хозяин, содержащая указанные вектор или нуклеиновую кислоту. Описаны композиции, содержащие альфа-амилазу по настоящему изобретению и применяющиеся для разжижения крахмала, осахаривания крахмала, переработки крахмала, расшлихтовки текстильного изделия, выпекания, а также детергентные моющие композиция и добавка. Предложен способ получения этанола, включающий стадии: а) применение композиции для разжижения крахмала по отношению к молотой кукурузе или крахмальной суспензии; b) осахаривание крахмала; с) брожение осахаренного крахмала; d) получение этанола. Изобретение позволяет получить композиции, содержащие альфа-амилазу, имеющую повышенную термостабильность и температуру плавления. 20 н. и 23 з.п. ф-лы, 3 табл., 9 ил., 6 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Представлен белок, включающий каталитический фрагмент сиалидазы и обладающий сиалидазной активностью, который выбран из белка, последовательность которого включает аминокислоты 274-666, или 274-681, или 290-666, или 290-681 SEQ ID NO:12, или включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14, приведенные в настоящем описании. Описан слитый белок, включающий указанный выше белок и якорный домен. Также имеются сведения о молекулах нуклеиновых кислот, кодирующих указанные белки, экспрессирующих векторах, содержащих указанные нуклеиновые кислоты, и фармацевтических композициях, содержащих указанные белок или слитый белок. Предложен способ лечения или предупреждения вирусной инфекции, вызванной вирусом гриппа или парагриппа, включающий применение терапевтически эффективного количества указанной композиции к эпителиальным клеткам субъекта. Изобретение позволяет расширить арсенал средств против инфекции, вызванной вирусом гриппа или парагриппа. 10 н. и 15 з.п. ф-лы, 2 табл., 13 ил., 17 пр.

Изобретение относится к биохимии и представляет собой различные варианты модифицированной ксиланазы Семейства 11. В одном из вариантов модифицированная ксиланаза Семейства 11 содержит цистеиновые остатки в положениях 99 и 118 с образованием внутримолекулярной дисульфидной связи, причем указанная внутримолекулярная дисульфидная связь образована замещением аминокислоты в положениях 99 и 118 цистеином, причем указанные положения определяют с помощью выравнивания последовательности указанной модифицированной ксиланазы Семейства 11 с аминокислотной последовательностью ксиланазы II из Trichoderma reesei SEQ ID NO: 16, представленной в описании. Другие варианты включают аминокислотные замены в положениях 99 и 118 на Cys с образованием дисульфидной связи и 40 на Arg, Cys, Phe, Tyr, His или основную аминокислоту, в положениях 10, 58, 105, 144 и 161 на основную аминокислоту в любом из положений, 27 и 29 на гидрофобную аминокислоту в любом из положений, 75 и 125 на неполярную аминокислоту в любом из положений, 11 и 129 на кислую аминокислоту в любом из положений, 131 на Asn, 52 на Cys. Еще одним вариантом настоящего изобретения является модифицированная ксиланаза Семейства 11, содержащая замену на гистидин в положении 40, причем указанное положение определяют с помощью выравнивания аминокислотных последовательностей указанной модифицированной ксиланазы и ксиланазы II Trichoderma reesei с последовательностью SEQ ID NO: 16. Изобретение позволяет получить клиланазу с повышенной термофильностью, алкалофильностью, термостойкостью. 9 н. и 8 з.п. ф-лы, 22 табл., 17 ил., 16 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается целлюлазных слитых белков. Представленные слитые белки содержат аминокислотную последовательность эндоглюканазного ядра, имеющую, по крайней мере, 95%-ную идентичность с SEQ ID NO:2, слитую с аминокислотной последовательностью, содержащей линкер и целлюлозосвязывающий домен (CBD), имеющую, по крайней мере 95%-ную идентичность с SEQ ID NO:15. Такие слитые белки могут быть получены с помощью рекомбинантной технологии при использовании подходящих полинуклеотидов, экспрессирующих векторов и клеток-хозяев. Представленное изобретение обеспечивает целлюлазу, обладающую низкой активностью в отношении восстановления окраски, и может быть использовано для обработки целлюлозного материала, например, текстильного материала и для биологической абразивной обработки денима. Кроме того, представленные слитые белки и ферментные препараты на их основе могут использоваться для приготовления детергентных композиций или для улучшения качества кормов для животных. 12 н. и 14 з.п. ф-лы, 8 ил., 10 табл., 10 пр.

Штамм создан на основе промышленного продуцента, мутантного штамма, Aspergillus awamori M-2002 (ВКМ F-3771D) с использованием методов индуцированного мутагенеза и плазмидной трансформации. Штамм A.awamori amyR- Т-19 депонирован в BKM ИБФМ им. Г.К.Скрябина РАН под № 4277D, хранится в лиофильно высушенном состоянии на скошенном сусло-агаре в отделе биотехнологии ферментных препаратов в пищевой промышленности ГНУ ВНИИ пищевой биотехнологии Россельхозакадемии г. Москвы. Изобретение позволяет в значительной степени повысить выход глюкоамилазы с единицы субстрата. 1 табл., 2 пр.

Штамм создан на основе промышленного продуцента, мутантного штамма, Aspergillus awamori M-2002 (ВКМ F-3771D) с использованием методов индуцированного мутагенеза и ДНК-технологий. Штамм A.awamori Xyl Т-15 депонирован в BKM ИБФМ им. Г.К.Скрябина РАН под № 4278D, хранится в лиофильно высушенном состоянии на скошенном сусло-агаре в отделе биотехнологии ферментных препаратов в пищевой промышленности ГНУ ВНИИ пищевой биотехнологии Россельхозакадемии г.Москвы. Изобретение обеспечивает получение высокоактивных комплексных ферментных препаратов глюкоамилазы и ксиланазы с уровнем активности ксиланазы 150-200% относительно исходного штамма для применения в различных отраслях АПК. 3 табл., 3 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, к вариантам глюкоамилазы с измененными свойствами и к способам применения вариантов глюкоамилазы. Применение описанных вариантов глюкоамилазы позволяет добиться снижения образования продуктов конденсации и увеличения выхода глюкозы при конверсии крахмала. 10 н. и 12 з.п. ф-лы, 2 табл.

РЕКОМБИНАНТНАЯ БЕЛКОВАЯ КОНСТРУКЦИЯ ДСД-сп- -ГАЛ, ОБЛАДАЮЩАЯ АКТИВНОСТЬЮ ФЕРМЕНТА ТЕРМОСТАБИЛЬНОЙ -ГАЛАКТОЗИДАЗЫ (ЛАКТАЗЫ) И СПОСОБНОСТЬЮ АФФИННО СВЯЗЫВАТЬСЯ С ДЕКСТРАНОМ, ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pGD-10, ОПРЕДЕЛЯЮЩАЯ БИОСИНТЕЗ ДСД-сп- -ГАЛ, И ШТАММ-ПРОДУЦЕНТ Escherichia coli DH5 /PGD-10

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения белка ДСД-сп- -ГАЛ в клетках Е.соli. Конструируют рекомбинантную плазмидную ДНК pGD-10, кодирующую химерную белковую конструкцию ДСД-сп- -ГАЛ, содержащую декстрансвязывающий домен ДСД из микроорганизма Leuconostoc mesenteroides, который генно-инженерным путем объединен через глицин-сериновый спейсер с термостабильной бета-галактозидазой из термофильного микроорганизма Thermoanaerobacter ethanolicus. Для получения штамма Escherichia coli DH5 /pGD-10 - продуцента рекомбинантной белковой конструкции ДСД-сп- -ГАЛ, клетки родительского штамма Escherichia coli DH5 трансформируют рекомбинантной плазмидной ДНК pGD-10. Изобретение позволяет получить белок ДСД-сп- -ГАЛ, обладающий активностью фермента термостабильной бета-галактозидазы (лактазы) и способностью аффинно связываться с декстраном. 3 н.п. ф-лы, 4 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой PS4-вариантный полипептид, получаемый из исходного полипептида, имеющий немальтогенную экзоамилазную активность, который по меньшей мере на 60% идентичен любой из SEQ ID NO:1-14, причем PS4-вариантный полипептид содержит аминокислотную мутацию в одном или нескольких положениях, выбранных из группы, состоящей из 146, 229, 303, 306, 309, 316, 353, 26, 145, 339, относительно нумерации положений последовательности экзоамилазы Pseudomonas saccharophilia, представленной как SEQ ID NO:1. Изобретение относится также к применению данного полипептида в пищевой промышленности. Изобретение позволяет расширить арсенал используемых в пищевой промышленности немальтогенных экзоамилаз. 22 н. и 20 з.п. ф-лы, 39 табл.

Настоящее изобретение относится к модифицированной ксиланазе 11-го Семейства. Предложенная ксиланаза содержит последовательность функционального консенсусного сайта гликозилирования. Неограничивающие примеры вводимых сайтов гликозилирования включают замену аминокислоты в положении (34, 131, 180, 182), или в их комбинации, на аспарагин. Указанное положение аминокислоты в ксиланазе 11-го Семейства определяют выравниванием последовательности, представляющей интерес ксиланазы с аминокислотной последовательностью ксиланазы II Trichoderma reesei. Введенный консенсусный сайт гликозилирования обеспечивает повышенную эффективность экспрессии модифицированной ксиланазы по сравнению с эффективностью экспрессии не модифицированной ксиланазы при использовании аналогичных штаммов-хозяев и условий выращивания. 7 н. и 11 з.п. ф-лы, 7 ил., 4 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой молекулу ДНК, кодирующую фермент, обладающий активностью глюкоамилазы, обладающую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с глюкоамилазой из Trichoderma, обладающей последовательностью SEQ ID NO: 4. Изобретение также относится к векторам и клеткам-хозяевам со встроенными последовательностями ДНК, ферментным композициям и способам применения глюкоамилаз в различных приложениях. Изобретение позволяет расширить арсенал глюкоамилаз. 11 н. и 34 з.п. ф-лы, 20 ил., 10 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой полипептид, обладающий -L-арабинофуранозидазной активностью, выбранный из следующих полипептидов: полипептид с SEQ ID No.2, полипептид, аминокислотная последовательность которого находится между положениями 28 и 507 SEQ ID No.2, фрагмент полипептида с SEQ ID No.2, обладающий активностью -L-арабинофуранозидазы, полипептид, обладающий активностью -L-арабинофуранозидазы В и проявляющий, по меньшей мере, 90% идентичность с полипептидом SEQ ID No.2. Изобретение также относится к полинуклеотиду, кодирующему данный полипептид, экспрессионной кассете и вектору, содержащим полинуклеотид, и организму-хозяину, содержащему данный полипептид. Изобретение позволяет расширить арсенал средств для гидролиза -L-арабинофуранозильных связей в арабинофуранозилолигосахаридных соединениях. 7 н. и 2 з.п. ф-лы, 4 ил., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии. Способ включает культивирование штамма-продуцента Penicillium canescens, выбранного из группы, состоящей из штамма Penicillium canescens Abf6 (BKM № F-3935D), мультикопийного по гену abfA арабиноксилан-арабинофурангидролазы Penicillium canescens, обладающей арабиноксиланазной и -L-арабинофуранозидазной активностью, штамма Penicillium canescens AbfB6 (BKM № F-3937D), мультикопийного по гену abfB2 -L-арабинофуранозидазы Penicillium canescens, штамма Penicillium canescens AgLA33 (BKM № F-3936D), мультикопийного по гену aglA -галактозидазы Penicillium canescens, обладающей и -галактозидазной, и галактоманнаназной активностью, штамма Penicillium canescens AgLC4 (BKM № F-3934D), мультикопийного по гену aglC -галактозидазы Aspergillus awamori, штамма Penicillium canescens FAE9 (BKM № F-3938D), мультикопийного по гену faeA ферулоил-эстеразы Penicillium funiculosum, штамма Penicillium canescens XG9 (BKM № F-3939D), мультикопийного по гену xegA ксилоглюканазы Penicillium canescens. Изобретение позволяет получить целый ряд ферментов для гидролиза некрахмальных полисахаридов растительного сырья и тем самым расширить ассортимент ферментных препаратов. 7 н.п. ф-лы, 1 табл., 21 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой бета-глюканазу, получаемую из гриба Talaromyces emersonii, или композицию, обладающую активностью бета-глюканазы. Данный фермент или композиция используются при обработке растительного материала для разрушения или модификации целлюлозы, а также входят в состав пищевых продуктов и кормов для животных. Заявленное изобретение позволяет расширить ассортимент ферментов, обладающих бета-глюканазной активностью. 9 н. и 8 з.п. ф-лы, 15 табл.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен выделенный полипептид, являющийся кислотостойкой металлопротеазой, выделенной из Thermoascus aurantiacus. Описаны: штамм Thermoascus aurantiacus CGMCC №0670 для получения полипептида и способ получения полипептида с использованием указанного штамма. Раскрыт способ обработки растительных белков с целью повышения их усвояемости с использованием предложенного полипептида. Настоящее изобретение позволяет получить протеазу, которая обладает достаточной кислотостойкостью, чтобы избежать разрушения в желудке и может найти применение в производстве кормов. 4 н. и 2 з.п. ф-лы, 5 ил, 4 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генетической инженерии. Штамм гриба Penicillium canescens ВКПМ F-912 является продуцентом секретируемой эндо-(1-4)-бета-ксиланазы с удаленными генами эндоглюканаз. Данный штамм за 120-144 часов ферментации на средах со свекловичным жомом позволяет накапливать до 800 единиц активности секретируемой эндо-(1-4)-бета-ксиланазы и не более 0.13 единиц целлюлазной активности в 1 мл культуральной жидкости. 2 ил., 1 табл.

Изобретение относится к пищевой промышленности и биотехнологии и представляет собой полипептид, обладающий ксиланазной активностью, который может разлагать целлюлозные экстракты и растительные материалы. В другом аспекте изобретение представляет собой полинуклеотид, кодирующий указанный полипептид, а также композицию, содержащую полипептид с активностью ксиланазы. Данный полипептид используют для обработки растительного или ксилансодержащего материала при приготовлении хлеба и корма для животных. Причем полипептид обладает как арабиноксиланазной, так и ксилозидазной активностью. Изобретение позволяет расширить ассортимент ксиланаз, используемых в промышленном производстве. 9 н. и 14 з.п. ф-лы, 12 табл.

Изобретение относится к области генной инженерии и биотехнологии и может быть использовано в пищевой промышленности. Предложен слитый белок бета-галактозидазы и целлюлозосвязывающего домена эндоглюканазы CelD из Anaerocellum thermophilium. Сконструирована рекомбинантная плазмидная ДНК pLACspCBD, обеспечивающая его экспрессию в клетках Е.coli. Получен штамм Е.coli - продуцент указанного слитого белка. Разработан способ получения данного слитого белка в иммобилизованном виде путем обработки целлюлозы гидролизатом указанного штамма Е.coli. Иммобилизованный слитый белок используют для ферментативного расщепления лактозы. Применение изобретения позволяет упростить переработку молочных продуктов. 5 н.п. ф-лы, 1 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой фермент гликозилгидролазу (варианты), продуцируемый гифомицетами, в частности Chrysosporium lucknowense, а также нуклеиновокислотный конструкт для экспрессии гликозилгидролазы. Заявленное изобретение позволяет получать гликозилгидролазу культивированием гриба Chrysosporium в оптимальных условиях, обеспечивающих экспрессию и выделение фермента с высокой степенью эффективности. 15 н. и 4 з.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл.

ВАРИАНТ МАЛЬТОГЕННОЙ -АМИЛАЗЫ

Изобретение относится к области молекулярной биологии и биохимии и может быть использовано в пищевой промышленности, в частности в хлебопечении. На основании анализа результатов определения трехмерной структуры мальтогенной -амилазы Bacillus предложены модификации аминокислотной последовательности нативного фермента, отличающиеся повышенной по сравнению с исходной формой стабильностью. Полученные стабильные варианты ос-амилазы содержат, по крайней мере, одну аминокислотную замену в положении К40, V74, H103, S141, Т142, F188, Н220, N234, К249, D261, L268, V279, N342, Н344, G397, А403, К425, S442, S479, S493, Т494, S495, А496, S497, А498, Q500, К520, А555 и/или N595. Приобретаемая мутантными формами -амилазы устойчивость к внешним воздействиям при сохранении ферментативной активности обеспечивает возможность эффективной замены нативного фермента. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области генной инженерии и биотехнологии и может быть использовано в медико-биологической и фармацевтической промышленности. Из клеток штамма р. Alteromonas, продуцирующего фермент, который расщепляет полисахарид, включающий сульфатированную фукозу, выделен ген, кодирующий указанный фермент. Установлено наличие двух открытых рамок считывания (ORF-1 и ORF-2) и определены их последовательности. Путем экспрессии этих последовательностей в E.coli получены активные рекомбинантные формы фермента, способного эффективно гидролизовать полисахарид, содержащий сульфатированную фукозу, который не расщепляется под действием фукоиданазы, продуцируемой Flavobacterium sp. SA-0082 (FERM ВР-5402). Применение изобретения обеспечивает возможность получения больших количеств качественного сырья для фармацевтических препаратов. 5 с. и 1 з.п.ф-лы, 5 ил., 2 табл.