Пептиды, содержащие более 20 аминокислот, гастрины, соматостатины, меланотропины, их производные: ...Escherichia (G) – C07K 14/245

Изобретения относятся к области биотехнологии и касаются слитого белка для специфического ингибирования свертывания крови, экспрессионной плазмидной ДНК, кодирующей такой слитый белок, бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, трансформированной такой ДНК, и способу получения слитого белка. Представленный слитый белок включает тиоредоксин I E.coli и инфестин-4 и характеризуется последовательностью SEQ ID NO:2. Плазмидная ДНК содержит последовательность SEQ ID NO:1, кодирующую представленный слитый белок, находящуюся под контролем промотора, функционирующего в бактериальной клетке. Способ получения упомянутого слитого белка включает культивирование упомянутых бактерий в питательной среде, разрушение бактериальных клеток и очистку указанного слитого белка с использованием металлохелатной хроматографии и анионообменной хроматографии. Охарактеризованные решения позволяют получить белок, обеспечивающий указанную специфичность, с последующим его использованием в блокировании контактной активации свертывания крови за счет ингибирования XIIa фактора и отсутствии ингибирования Ха фактора. 4 н.п. ф-лы, 10 ил., 7 пр.

Изобретение относится к области биохимии и молекулярной биологии и касается способа анализа процесса Арг-Х протеолиза в положительно заряженных фракциях белков супрамолекулярных структур в растущей популяции Escherichia coli. Представленный способ включает следующие стадии: консервация клеток в присутствии забуференного 80-90% глицерина, снятие клеточных оболочек 3% тритоном Х-100, экстракция возрастающими концентрациями солей: 0,14 М, 0,35 М; 2 М NaCl, 6 М гуанидин гидрохлоридом с 0,1% -меркаптоэтанолом, выделение из вышеперечисленных фракций положительно заряженных белков с помощью ионообменной хроматографии с амберлитом ИРЦ-50 в прерывистом градиенте гуанидин гидрохлорида: 6%, 8,9%, 10,6%, 13% на 0,1 М калий-фосфатном буфере рН 6,8 и определение в них сайтов чувствительности к Арг-Х протеолизу. Представленное изобретение может быть использовано при анализе молекулярно-генетических механизмов формирования структуры клетки прокариот и роли белковых компонентов в их организации, а также при изучении особенностей ремоделирования генома, что является необходимым для раскрытия путей регулирования механизмов воздействия макро- и микроорганизмов. 9 ил., 1 пр.

Изобретение относится к биохимии и молекулярной биологии. Предложен способ препаративного выделения основных белков из надмолекулярных структур растущей популяции Escherichia coli. Проводят консервацию клеток Escherichia coli в забуференном 80-90% глицерине при -25°С. Затем осадок клеток промывают 3% тритоном Х-100. Далее осуществляют экстракцию осадка возрастающими концентрациями солей: 0,14 М, 0,35 М; 2 М NaCl, 6 М гуанидин гидрохлоридом с 0,1% -меркаптоэтанолом. Выделяют из полученных фракций основные белки с помощью ионообменной хроматографии с амберлитом ИРЦ-50 в прерывистом градиенте гуанидин гидрохлорида: 6%, 8,9%, 10,6%, 13% на 0,1 М калий-фосфатном буфере рН 6,8. Способ позволяет получать фракции, обогащенные основными белками, при использовании микроколичества белка клеточных супраструктур Escherichia coli. 7 ил., 1 пр.

Изобретение раскрывает выделенный полипептид, включающий мутантную А субъединицу термолабильного энтеротоксина E.coli (LT), которая имеет только один мутированный остаток, представляющий собой K, R, Н или Y, по сравнению с термолабильным энтеротоксином дикого типа, содержащим определенную аминокислотную последовательность (приведена в описании). Мутантная А субъединица содержит замену аминокислоты в положении, соответствующем положению 61 LT дикого типа. LT, содержащий такую мутантную А субъединицу, проявляет сниженную токсичность по сравнению с его аналогом дикого типа. Полипептид по изобретению может быть использован в качестве адъюванта. Описана вакцина для индукции иммунного ответа, включающая бактериальный или вирусный антиген, и полипептид в качестве адъюванта. В изобретении раскрыта нуклеиновая кислота, кодирующая мутантную А субъединицу LT E.coli, вектор экспрессии и трансформированная клетка, включающая указанный вектор. Использование изобретения обеспечивает получение вакцин с использованием высокоиммунногенного и нетоксигенного адъюванта. 5 н. и 11 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения предшественника гирудина. Методом ПЦР скрининга сигнальных последовательностей подбирают подходящую для эффективной экспрессии Leu-гирудина в E.coli. Конструируют белок-предшественник гирудина на основе подобранной сигнальной последовательности поверхностного мембранного белка Serratia marcescens, белка oprF Pseudomonas fluorescens или фумаратредуктазы Shewanella putrifaciens, с присоединением к С-концу выбранной сигнальной последовательности аминокислотной последовательности Leu-гирудина. Полученный предшественник Leu-гирудина используют в способе получения Leu-гирудина. Изобретение позволяет получить Leu-гирудин прямой секрецией в E.coli с высоким выходом. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл.

(56) (продолжение):

CLASS="b560m"aeruginosa and P. syringae. Molecular and General Genetics. 1992, 231, 3, р.489-93. PEALING S.L. et al. Sequence of the gene encoding flavocytochrome с from Shewanella putrefaciens: a tetraheme flavoenzyme that is a soluble fumarate reductase related to the membrane-bound enzymes from other bacteria. Biochemistry. 1992, 8, 31(48), р.12132-12140. RU 2118365 C1, 27.08.1998.