производные пиридина в качестве ингибиторов рецепторов фактора роста эндотелия сосудов 2 подтипа (vegfr-2) и протеинтирозинкиназы

Формула изобретения

1. Соединение общей формулы I

,

где R₁, R₂ и R ₃ представляют собой водород;

D, E, G, J и L представляют собой CH;

n равен целому числу 1 или 2;

W представляет собой кислород;

R₄ представляет собой C _1-6алкил, C_3-6циклоалкил, C_3-6циклоалкенил, где указанный C_1-6алкил возможно замещен одним заместителем, независимо выбранным из группы, состоящей из водорода, C _1-4алкила, C_3-6циклоалкила и C_3-6 циклоалкенила;

Y представляет собой карбонил;

R₅ представляет собой C_1-6алкил, C _1-6алкокси или C_3-4гетероарил, который представляет собой гетероциклическое ароматическое кольцо, содержащее 1-2 гетероатома, выбранных из азота и кислорода;

и его фармацевтически приемлемые соли.

2. Соединение по п.1, где n равен 1.

3. Соединение по п.1, где W представляет собой кислород, Y представляет собой -C(O)-, R₁, R₂ и R ₃ представляют собой водород, и n равен 1.

4. Соединение по п.1, где R₄ представляет собой изобутил, изопентил, метилбутил, этилбутил, трет-бутил, трет-бутилметил, циклопропил, циклопропилметил, циклобутил, циклобутилметил, циклобутилэтил, циклопентил, циклопентилметил, циклопентилэтил, циклогексил, циклогексилметил, циклогексенилметил.

5. Соединение по п.1, где R₅ представляет собой метил, этил, пропил, метокси, этокси или C_3-4гетероарил, который представляет собой гетероциклическое ароматическое кольцо, содержащее 1-2 гетероатома, выбранных из азота и кислорода.

6. Соединение по п.1, где R₅ представляет собой метил, метокси, этокси, фурил, изоксазолил, оксазолил.

7. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из

метилового эфира (4-{[2-(3,3-диметил-бутилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-карбаминовой кислоты (соединение 101);

2-[(2-ацетиламино-пиридин-4-илметил)-амино]-N-(2-циклопентил-этил)-бензамида (соединение 102);

2-[(2-ацетиламино-пиридин-4-илметил)-амино]-N-(3-этил-пентил)-бензамида (соединение 103);

(4-{[2-(3-этил-пентилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-амида оксазол-5-карбоновой кислоты (соединение 104);

(4-{[2-(2-циклопентил-этилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-амида фуран-2-карбоновой кислоты (соединение 105);

(4-{[2-(4-метил-пентилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-амида фуран-2-карбоновой кислоты (соединение 106);

(4-{[2-(3,3-диметил-бутилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-амида фуран-2-карбоновой кислоты (соединение 107);

(4-{[2-(2-циклогекс-1-енил-этилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-амида фуран-2-карбоновой кислоты (соединение 108);

(4-{[2-(3-этил-пентилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-амида фуран-2-карбоновой кислоты (соединение 109).

8. Фармацевтическая композиция для лечения или облегчения глазных или кожных заболеваний, ассоциированных с нерегулируемым ангиогенезом, содержащая соединение по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемую соль вместе с фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом.

9. Соединение по любому из пп.1-7 для применения в лечении или облегчении глазных или кожных заболеваний, ассоциированных с нерегулируемым ангиогенезом.

10. Применение соединения по любому из пп.1-7 для изготовления лекарственного средства для профилактики, лечения или облегчения кожного заболевания или состояния, ассоциированного с нерегулируемым ангиогенезом.

11. Соединение по любому из пп.1-7 для применения в качестве противовоспалительного агента, способного к модулированию активности протеинтирозинкиназы Src-семейства протеинтирозинкиназ.

12. Соединение по любому из пп.1-7 для применения в качестве противовоспалительного агента, способного к модулированию активности протеинтирозинкиназ JAK-2, или Raf-1, или cKit, или Fma/CSF-1R.

13. Способ предупреждения, лечения или облегчения заболевания или состояния, ассоциированного с аномальным ангиогенезом, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения по любому из пп.1-7.

Описание изобретения к патенту

Область изобретения

Изобретение относится к новым ингибиторам рецепторов фактора роста эндотелия сосудов 2 подтипа (VEGFR-2) и протеинтирозинкиназы, к указанным соединениям для применения в терапии, к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, к способам лечения заболеваний, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества указанного соединения и к применению указанных соединений в изготовлении лекарственных средств.

Предшествующий уровень техники

Изобретение относится к новым соединениям, которые могут ингибировать ангиогенез, а именно которые могут ингибировать образование или развитие новых кровеносных сосудов. Полагают, что указанные соединения могут быть полезными в лечении ряда заболеваний, таких как атеросклероз, воспалительные состояния, такие как дерматит, псориаз, розацеа и ревматоидный артрит, глазных заболеваний, таких как диабетическая ретинопатия и дегенерация желтого пятна, а также рак.

В настоящее время широко принято, что блокирование ангиогенеза в окружении опухолей может представлять собой практически осуществимый путь лечения рака, возможно как адъювантное лечение. Это также отражено в огромном количестве проектов-разработок и клинических испытаний с использованием ингибиторов ангиогенеза с различными механизмами ингибирования. Имеется 5 лекарственных средств, выпущенных на рынок, и более 30 агентов, находящихся в стадии разработки, которые направлены на ограничение ангиогенеза путем ингибирования передачи сигнала VEGF/VEGFR.

Этот путь блокирования ангиогенеза представляет особый интерес в контексте настоящего изобретения, которое относится к ингибиторам VEGF-рецептора, более конкретно ингибиторам рецептора VEGFR-2 (KDR). Сорафениб и сунитиниб были выпущены на рынок в 2006 году, и оба имеют своей мишенью, среди прочих, VEGFR-2. Сунитиниб ингибирует VEGFR-2 и PDGFR- (рецептор фактора роста , выделенного из тромбоцитов) с значениями IC₅₀ 9 и 8 нМ, соответственно. Хотя разработчики сорафениба сконцентрировались на улучшении его активности против Raf-1 киназы, он также проявляет значение IC_50, равное 22 нМ в отношении VEGFR-2. Kiselyov et al. подготовили обзор по таким ингибиторам в клинических испытаниях в Expert Opin. Investig. Drugs (2007) 16(1)-.83-107.

Ряд исследований был осуществлен для изучения роли VEGF и его рецепторов VEGF-R1 и VEGF-R2 при кожных заболеваниях, таких как розацеа. Розацеа представляет собой распространенное хроническое состояние, поражающее главным образом кожу лица и характеризующееся видимыми кровеносными сосудами, центральной лицевой эритемой и часто папулами и пустулами. Патогенез этого заболевания полностью не объяснен, однако связь с VEGF, особенно в случае неузелковой формы розацеа, была доказана Smith J R et al. [Br J Opthalmol 2007:91:226-229] и Gomaa A H A et al. [J Cutan Pathol 2007; 34:748-753].

Также имеются ясные доказательства в подтверждение того, что повышенная экспрессия ангиогенных факторов, в частности VEGF, является основной причиной пролиферативной диабетической ретинопатии (PDR). В этой связи, и другие, такие как ретинопатия беременных, серповидноклеточная ретинопатия, возрастная дегенерация желтого пятна, окклюзия глазной вены и болезнь Илза, преретинальная васкуляризация, являются основной причиной, приводящей к слепоте. Новые кровеносные сосуды прорастают из сосудистой сети с внутренней границы сетчатки в стекловидное тело. Это может вызывать потерю зрения из-за кровоизлияния в стекловидное тело и/или тракционное отслоение сетчатки из-за сокращения фиброзной ткани, связанной с новыми кровеносными сосудами. В настоящее время фармацевтические кампании проводят исследования лекарств-кандидатов, направленных на ингибирование путей ангиогенеза, причем TG100801, которое ингибирует обе киназы VEGFR-2 и Src, в настоящее время проходит клинические испытания для лечения возрастной дегенерации желтого пятна. Другие ингибиторы VEGF-пути, предназначенные для лечения глазных заболеваний, обсуждаются Slevin et al. в Expert Орт.Investig. Drugs (2008) 17(9):1301-1314.

В WO 01/29009 и WO 01/58899 описаны производные пиридина в качестве ингибиторов VEGF-рецепторной тирозинкиназы и VEGF-зависимой клеточной пролиферации.

В WO 02/090346 описаны производные фталазина в качестве ингибиторов VEGF-рецепторной тирозинкиназы с ангиогенез-ингибирующей активностью.

В WO 04/056806 раскрыты соединения 2-(1-Н-индазол-6-иламино)-бензамида в качестве ингибиторов протеинкиназ, которые могут быть полезны для лечения офтальмологических заболеваний.

Публикации международных заявок WO 00/27819, WO 00/27820, WO 01/55114, WO 01/81311, WO 01/85671, WO 01/85691, WO 01/85715, WO 02/055501, WO 02/066470, WO 02/090349, WO 02/090352, WO 03/000678, WO 02/068406, WO 03/040101 и WO 03/040102 все относятся к амидным производным антраниловой кислоты, которые включают соединения общей структуры А, их получению и их применению в качестве VEGF-рецепторных тирозинкиназных ингибиторов для лечения заболеваний, ассоциированных с VEGF-зависимой клеточной пролиферацией.

Применение амидных производных антраниловой кислоты по другим терапевтическим показаниям ранее было раскрыто, например, в US 3409688 (анальгетическое, противовоспалительное, противоязвенное) и в ЕР 564356 (антагонист ангиотензина II).

В публикациях международных заявок WO 02/06213 и WO 99/01426 раскрыты производные замещенных фениламино бензогидроксамовых кислот, которые включают соединения общей структуры В, в качестве ингибиторов МЕК (митоген-активируемая ERK-киназа), фармацевтические композиции и способы их использования.

В US 5155110 раскрыты производные гидроксамовой кислоты, обладающие ингибирующими свойствами в отношении циклооксигеназы и 5-липоксигеназы, и фармацевтические композиции для лечения состояний, благоприятно реагирующих на такое ингибирование. В указанном документе нигде не описана ингибирующая активность раскрытых сложноэфирных производных гидроксамовой кислоты в отношении тирозинкиназ.

В WO 05/054179 описаны сложноэфирные производные гидроксамовой кислоты, имеющие общую структуру С, в качестве ингибиторов ангиогенеза, которые действуют путем ингибирования VEGF-рецепторов, в частности рецепторов VEGFR-2 (KDR).

[С]

Кроме того, рассмотрено, что соединения по настоящему изобретению могут быть полезны в качестве ингибиторов других киназ, таких как протеинтирозинкиназы семейства Src, такие как протеинтирозинкиназы Src, Yes, Fyn, Lyn, Fgr, Lck и/или Hck, и/или JAK-2, и/или Raf-1, и/или cKit, и/или Fma/CSF-IR, и как таковые полезны в лечении воспалительных и неинфекционных аутоиммунных заболеваний, в которые эти киназы вовлечены.

Протеинтирозинкиназы представляют собой семейство ферментов, катализирующих перенос концевого фосфата аденозинтрифосфата на остатки тирозина в белковых субстратах. Фосфорилирование остатков тирозина на белковых субстратах приводит к передаче внутриклеточных сигналов, которые регулируют широкое разнообразие внутриклеточных процессов, таких как рост и активация клеток иммунной системы, например Т-клетки. Так как активация Т-клеток вовлечена в ряд воспалительных состояний и других расстройств иммунной системы (например, аутоиммунных заболеваний), модулирование активности протеинтирозинкиназ, по-видимому, представляет привлекательный путь для терапии воспалительных заболеваний. Было идентифицировано огромное количество протеинтирозинкиназ, которые могут представлять собой рецепторные протеинтирозинкиназы, например рецептор инсулина, или нерецепторные протеинтирозинкиназы.

Было обнаружено, что протеинтирозинкиназы семейства Src являются особенно важными для внутриклеточной передачи сигнала, относящегося к воспалительным ответам (см. D. Okutani et al., Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 291, 2006, pp.L129-L141; C.A.Loweil, Mol. Immunol. 41, 2004, pp.631-643). В то время как некоторые протеинтирозинкиназы семейства Src, например Src, Yes и Fyn, экспрессируются в разных типах клеток и тканей, экспрессия других ограничена конкретными типами клеток, например гематопоэтическими клетками. Так, протеинтирозинкиназа Lck экспрессируется почти исключительно в Т-клетках как первая сигнализирующая молекула, предназначенная для активации по ходу транскрипции Т-клеточного рецептора, и ее активность является существенной для передачи сигнала Т-клеток. Экспрессия Hck, Lyn и Fgr возрастает при воспалительной стимуляции, например, липополисахаридом (LPS) в зрелых моноцитах и макрофагах. Кроме того, если генная экспрессия основных В-клеточных киназ семейства Src, a именно Lyn, Fyn и BIk, прерывается, развитие незрелых В-клеток в зрелые В-клетки предотвращается. Киназы семейства Src также были идентифицированы как существенные для рекрутинга и активации моноцитов, макрофагов и нейтрофилов, а также они вовлечены в воспалительный ответ клеток тканей. Например, было обнаружено, что экспрессия Hck, Lyn и Fgr возрастает при воспалительной стимуляции, например липополисахаридом (LPS), в зрелых моноцитах и макрофагах.

В значительное число аутоиммунных и воспалительных заболеваний вовлечена активация Т-клеток и В-клеток, а также других клеток иммунной системы, таких как моноциты и макрофаги. Соединения, которые способны ингибировать активацию этих типов клеток, таким образом, рассматриваются в качестве полезных терапевтических агентов в лечении таких заболеваний.

Краткое изложение сущности изобретения

Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что новый класс амидов и тиоамидов проявляет высокую ингибирующую активность рецепторных протеинтирозинкиназ в отношении конкретного VEGF-рецептора, а именно VEGFR-2, часто называемого KDR-рецептором.

Также предусмотрено, что новые амиды антраниловой кислоты по настоящему изобретению могут проявлять высокую ингибирующую активность протеинтирозинкиназ в отношении семейств Src, и/или JAK-2, и/или Raf-1, и/или cKit, и/или Fma/CSF-IR протеинтирозинкиназ.

Новые амиды антраниловой кислоты по настоящему изобретению могут иметь ряд преимуществ по сравнению с известными структурно родственными амидами антраниловой кислоты и относительно сложноэфирных производных гидроксамовой кислоты из WO 05/054179.

Соединения по настоящему изобретению могут иметь улучшенные фармакокинетические свойства, такие как улучшенная растворимость и всасывание, сниженные неблагоприятные побочные эффекты и пониженная метаболическая стабильность по сравнению с известными структурно родственными амидами антраниловой кислоты. Конкретным преимуществом соединений по настоящему изобретению по сравнению с соединениями из WO 05/054179 является то, что они намного легче метаболизируются.

Кроме того, относительно сложноэфирных производных гидроксамовой кислоты из WO 05/054179 соединения по настоящему изобретению проявляют улучшенную светостабильность в дополнение к увеличенной или подобной рецепторной аффинности. Светостабильность является желаемым свойством для любого соединения, предназначенного для фармацевтического применения, но особенно важно для соединений, предназначенных для лечения, помимо других состояний, кожных болезней, таких как псориаз, дерматит и розацеа, или офтальмологических болезней, ассоциированных с нерегулируемым ангиогенезом.

Таким образом, изобретение относится к соединениям общей формулы 1

где R₁, R₂ и R ₃ представляют собой водород или прямой либо разветвленный насыщенный или ненасыщенный C_1-6углеводородный радикал;

D представляет собой азот или СН;

Е представляет собой азот или СН;

G представляет собой азот или СН;

J представляет собой азот или СН;

L представляет собой азот или СН;

n равен целому числу 1 или 2;

W представляет собой кислород или серу;

R₄ представляет собой водород, С_1-10алкил, С_2-10алкенил, С_2-10алкинил, C_1-6гидроксиалкил, С _3-8циклоалкил, С_3-8циклоалкенил, С_2-7 гетероциклоалкил, С₆-₁₂арил, С_3-12 гетероарил или С_2-7гетероциклоалкенил, где указанные C_1-10алкил, С_2-10алкенил, С_2-10 алкинил, C_1-6гидроксиалкил, С_3-8циклоалкил, С_3-8циклоалкенил, С_2-7гетероциклоалкил, С_6-12арил, С_3-12гетероарил или С_2-7 гетероциклоалкенил возможно замещены одним или более одинаковыми или разными заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из водорода, галогена, оксо, гидрокси, трифторметила, карбокси, циано, C₁-₆алкила, С_2-6алкенила, C_1-6алкокси, C_1-6алкоксикарбонила, C _1-6алкилтио, трифторметила, С_3-8циклоалкила, С_3-8цикпоалкенила, С_2-7гетероциклоалкила, С_2-7гетероциклоалкенила, С_6-12арила, С _3-12гетероарила и С_1-3алкиламино, где указанные С_1-6алкил, С_2-6алкенил, C_1-6 алкокси, C_1-6алкоксикарбонил, C₁-₆ алкилтио, трифторметил, С_3-8циклоалкил, С_3-8 циклоалкенил, С_2-7гетероциклоалкил, С_2-7 гетероциклоалкенил, С_6-12арил, С_3-12гетероарил и C_1-3алкиламино возможно замещены одним или более одинаковыми или разными заместителями, независимо выбранными из гидрокси, С_1-4алкила, C_1-4алкилоксикарбонила;

или R₃ и R₄ вместе образуют часть С_3-8циклоалкила;

Y представляет собой карбонил или тиоксо;

R₅ представляет собой водород, C_1-6алкил, C_1-6алкиламино, C_1-6алкокси, С_3-8циклоалкил, С_3-8 циклоалкенил, С_2-7гетероциклоалкил или С_2-7 гетероарил, где указанные C_1-6алкил, C_1-6 алкиламино, С_1-6алкокси, С_3-8циклоалкил, С_2-7гетероциклоалкил или С_2-7гетероарил возможно замещены одним или более чем одним заместителем, независимо выбранным из группы, состоящей из циано, C_1-6алкила, С_1-6алкоксикарбонила или C_1-6алкилкарбонилокси;

и его фармацевтически приемлемым солям, гидратам или сольватам.

В другом аспекте изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединение формулы 1 или его фармацевтически приемлемые соль, гидрат или сольват вместе с фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом.

В дополнительном аспекте изобретение относится к способу предупреждения, лечения или облегчения заболеваний или состояний, ассоциированных с аномальным ангиогенезом, включающему введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения формулы I.

В еще одном аспекте изобретение относится к соединениям формулы I для применения в терапии.

В еще одном аспекте изобретение относится к соединениям формулы I для применения в лечении или облегчении глазных или кожных заболеваний, ассоциированных с нерегулируемым ангиогенезом.

В еще одном аспекте изобретение относится к применению соединений формулы I для изготовления лекарственного средства для профилактики, лечения или облегчения глазных заболеваний или состояний, ассоциированных с нерегулируемым ангиогенезом, таких как острая дегенерация желтого пятна, возрастная дегенерация желтого пятна, хороидальная неоваскуляризация, ретинит, цитомегаловирусный ретинит, макулярный отек, ретинопатия, диабетическая ретинопатия, неоваскулярная глаукома и ишемическая ретинопатия.

В еще одном аспекте изобретение относится к применению соединений формулы I для изготовления лекарственного средства для профилактики, лечения или облегчения кожных заболеваний или состояний, ассоциированных с нерегулируемым ангиогенезом, таких как розацеа, псориаз, дерматит, плоскоклеточный рак, базальноклеточный рак, злокачественная меланома, злокачественная кожная лимфома, ангиосаркома, саркома Калоши, пролиферирующая гемангиома, буллезный пемфигоид, мультиформная эритема, обыкновенные бородавки, повреждения, вызванные УФ-излучением, и состояния, связанные с ростом и циклом развития волос и с заживлением ран, возможно включая другое терапевтически активное соединение.

В еще одном аспекте изобретение относится к применению соединений формулы 1 для изготовления лекарственного средства для профилактики, лечения или облегчения заболеваний или состояний, ассоциированных с нерегулируемым ангиогенезом, таких как атеросклероз, гемангиома, гемангиоэндотелиома, пиогенная гранулема, келлоидные рубцы, аллергический отек, дисфункциональное маточное кровотечение, фолликулярные кисты, гиперстимуляция яичника, эндометриоз, ожирение, артрит, ревматоидный артрит, синовит, разрушение кости и хряща, остеомиелит, развитие паннуса, образование остеофита, воспалительные и инфекционные заболевания (гепатит, пневмония, гломерулонефрит), астма, носовые полипы, трансплантация, перерождение печени, лимфопролиферативные расстройства, тиреоидит, увеличение щитовидной железы, обструктивное заболевание легких, церебральное ишемическое реперфузионное повреждение или болезнь Альцгеймера.

В еще одном аспекте изобретение относится к применению соединений формулы I в качестве противовоспалительного агента, способного к модулированию активности протеинтирозинкиназы Src-семейства протеинтирозинкиназ.

В еще одном аспекте изобретение относится к применению соединений формулы 1 в качестве противовоспалительного агента, способного к модулированию активности протеинтирозинкиназ JAK-2, или Raf-1, или cKit, или Fma/CSF-IR.

В еще одном аспекте изобретение относится к соединению формулы 1 для применения в лечении, облегчении или профилактики неинфекционных воспалительных или аутоиммунных заболеваний или состояний, выбранных из группы, состоящей из острых воспалительных заболеваний, таких как острое повреждение легкого, острый респираторный дистресс-синдром, аллергия, анафилактический шок, сепсис или реакция «трансплантат против хозяина», или хронических воспалительных заболеваний, таких как атопический дерматит, болезнь Крона, неспецифический язвенный колит, остеоартрит, подагра, псориатический артрит, цирроз печени, рассеянный склероз, или глазных заболеваний или состояний, таких как неинфекционный (например, аллергический) конъюнктивит, увеит, ирит, кератит, склерит, эписклерит, симпатический офтальмит, блефарит, сухой кератоконъюнктивит или иммунологическое отторжение трансплантата роговицы, и аутоиммунных заболеваний или состояний, выбранных из группы, состоящей из аутоиммунного гастрита, болезни Аддисона, аутоиммунной гемолитической анемии, аутоиммунного тиреоидита, хронической идиопатической крапивницы, хронической иммунной полинефропатии, диабета, диабетической нефропатии, тяжелой псевдопаралитической миастении, обыкновенной пузырчатки, пернициозной анемии, первичного билиарного цирроза печени, системной красной волчанки и глазного заболевания, связанного с щитовидной железой.

В еще одном аспекте изобретение относится к промежуточным соединениям для получения соединений формулы I, выбранным из группы, состоящей из

N-[4-(2,4-диоксо-4Н-бензо[с1][1,3]оксазин-1-илметил)-пиридин-2-ил]-ацетамида (соединение 501);

метилового эфира [4-(2,4-диоксо-4Н-бензо[d][1,3]оксазин-1-илметил)-пиридин-2-ил]-карбаминовой кислоты (соединение 502);

[4-(2,4-диоксо-4Н-бензо[d][1,3]оксазин-1-илметил)-пиридин-2-ил]-амида оксазол-5-карбоновой кислоты (соединение 503);

[4-(2,4-диоксо-4Н-бензо[d][1,3]оксазин-1-илметил)-пиридин-2-ил]-амида фуран-2-карбоновой кислоты (соединение 504).

Подробное описание изобретения

Определения

Термин "углеводородный радикал" предназначен для обозначения радикала, содержащего только атомы водорода и углерода, он может содержать одну или более двойных и/или тройных углерод-углеродных связей, и он может содержать циклические группировки в сочетании с разветвленными или линейными группировками. Указанный углеводород содержит 1-20 атомов углерода и предпочтительно содержит 1-12 или 1-10, например 1-6, например 1-4, например 1-3, например 1-2, атомов углерода. Этот термин включает алкил, алкенил, циклоалкил, циклоалкенил, алкинил и арил, как указано ниже.

В контексте настоящего изобретения термин "алкил" предназначен для обозначения радикала, получаемого удалением одного атома водорода из углеводорода. Указанный алкил содержит 1-20, предпочтительно 1-12, например 2-6, например 3-4, атомов углерода. Этот термин включает подклассы нормального алкила (н-алкил), вторичного и третичного алкила, такие как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изопентил, гексил и изогексил.

Термин "циклоалкил" предназначен для обозначения насыщенного циклоалканового радикала, включая полициклические радикалы, такие как бициклические или трициклические радикалы, содержащего 3-20 атомов углерода, предпочтительно 3-10 атомов углерода, в частности 3-8 атомов углерода, например 3-6 атомов углерода, например 4-5 атомов углерода, например, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и циклооктил.

Термин "алкенил" предназначен для обозначения моно-, ди-, три-, тетра- или пентаненасыщенного углеводородного радикала, содержащего 2-10 атомов углерода, в частности 2-6 атомов углерода, например 2-4 атома углерода, например, этенил, аллил, пропенил, бутенил, пентенил, ноненил или гексенил.

Термин "циклоалкенил" предназначен для обозначения моно-, ди-, три- или тетраненасыщенных неароматических циклических углеводородных радикалов, включая полициклические радикалы, содержащих 3-20 атомов углерода, типично содержащих 3-10 атомов углерода, например 3-6 атомов углерода, например 4-5 атомов углерода, например, циклопропенил, циклобутенил, циклопентенил или циклогексенил.

Термин "алкинил" предназначен для обозначения углеводородного радикала, содержащего 1-5 С-С тройных связей и 2-20 атомов углерода, причем алкановая цепь типично содержит 2-10 атомов углерода, в частности 2-6 атомов углерода, например 2-4 атома углерода, например, этинил, пропинил, бутинил, пентинил или гексинил.

Термин "гетероциклоалкил" предназначен для обозначения циклоалкильного радикала, как определено выше, включая полициклические радикалы, возможно конденсированные с карбоциклическими кольцами, содержащего 1-6 гетероатомов, предпочтительно 1-3 гетероатома, выбранных из О, N или S, например, тетрагидрофуранил, пирролидинил, диоксоланил, морфолин, имидазолидинил или пиперидинил.

Термин "гетероциклоалкенил" предназначен для обозначения циклоалкенильного радикала, как определено выше, включая полициклические радикалы, возможно конденсированного с карбоциклическими кольцами, содержащего 1-6 гетероатомов, предпочтительно 1-3 гетероатома, выбранных из О, N или S, например тетрагидропиранол.

Термин "арил" предназначен для обозначения радикала ароматических карбоциклических колец, содержащих 6-20 атомов углерода, например 6-14 атомов углерода, предпочтительно 6-10 атомов углерода, в частности 5- или 6-членных колец, возможно конденсированных карбоциклических колец с по меньшей мере одним ароматическим кольцом, таким как фенил, нафтил, антраценил, инденил или инданил.

Термин "гетероарил" предназначен для обозначения радикалов гетероциклических ароматических колец, возможно конденсированных с карбоциклическими кольцами или гетероциклическими кольцами, содержащих 1-6 гетероатомов (выбранных из О, S и N) и 1-20 атомов углерода, например 1-5 гетероатомов и 1-10 атомов углерода, например 1-5 гетероатомов и 1-6 атомов углерода, например 1-5 гетероатомов и 1-3 атомов углерода, в частности 5- или 6-членных колец с 1-4 гетероатомами или 1-2 гетероатомами, выбранными из О, S и N, или возможно конденсированных бициклических колец с 1-4 гетероатомами, и где по меньшей мере одно кольцо является ароматическим, например, пиридил, хинолил, изохинолил, индолил, тетразолил, фурил, тиазолил, имидазолил, имидазо[1,2-а]пиримидинил, пиразолил, оксазолил, оксадиазолил, тиофенил, 1,2,4-триазолил, изоксазолил, тиенил, пиразинил, пиримидинил, [1,2,3]триазолил, изотиазолил, имидазо[2,1-b]тиазолил, бензимидазолил, бензофуранил или бензофуранил.

Термин "карбоциклический" включает арил, циклоалканил и циклоалкенил, как указано выше.

Термин "гетероциклический" включает гетероарил, гетероциклоалкил и гетероциклоалкенил, как указано выше.

Термин "галоген" предназначен для обозначения заместителя, образующего главную подгруппу седьмой группы таблицы Менделеева, предпочтительно фторо, хлоро и бромо.

Термин "алкиламино" предназначен для обозначения радикала формулы -NR₂ , где каждый R независимо представляет собой алкил, алкенил или циклоалкил, как указано выше, например, метиламино, этиламино, диэтиламино, циклогексиламино или трет-буиламино.

Термин "ариламино" предназначен для обозначения радикала формулы -NR₂, где R представляет собой арил, как указано выше, например фениламино.

Термин "алкокси" предназначен для обозначения радикала формулы -OR, где R представляет собой алкил или алкенил, как указано выше, например метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, бутокси и так далее.

Термин "алкилтио" предназначен для обозначения радикала формулы -S-R, где R представляет собой алкил, как указано выше.

Термин "алкоксикарбонил" предназначен для обозначения радикала формулы -C(O)-O-R, где R представляет собой алкил, как указано выше, например метоксикарбонил, этоксикарбонил, н-пропоксикарбонил, изопропоксикарбонил и так далее.

Термин "алкилкарбонилокси" предназначен для обозначения радикала формулы -O-C(O)-R, где R представляет собой алкил, как указано выше, например метилкарбонилокси или этилкарбонилокси.

Термин "алкилкарбонил" предназначен для обозначения радикала формулы -C(O)-R, где R представляет собой алкил, как указано выше, например ацетил.

Термин "гидроксиалкил" предназначен для обозначения радикала формулы -R-OH, где R представляет собой алкил, как указано выше, например гидроксиметил или гидроксиэтил.

Термин "фармацевтически приемлемая соль" предназначен для обозначения солей, получаемых путем взаимодействия соединения формулы 1 с подходящей неорганической или органической кислотой, такой как соляная, бромистоводородная, иодистоводородная, серная, азотная, фосфорная, муравьиная, уксусная, 2,2-дихлоуксусная, адипиновая, аскорбиновая, L-аспарагиновая, L-глута ми новая, галактаровая, молочная, малеиновая, L-яблочная, фталевая, лимонная, пропионовая, бензойная, глутаровая, глюконовая, D-глюкуроновая, метансульфоновая, салициловая, янтарная, малоновая, винная, бензолсульфоновая, этан-1,2-дисульфоновая, 2-гидроксиэтансульфоновая кислота, толуолсульфоновая, сульфамовая или фумаровая кислота. Фармацевтически приемлемые соли соединений формулы I могут также быть получены путем взаимодействия с подходящим основанием, таким как гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид магния, гидроксид кальция, гидроксид серебра, аммония или тому подобное.

Термин "сольват" предназначен для обозначения веществ, образуемых путем взаимодействия между соединением, например соединением формулы I, и растворителем, например спиртом, глицерином или водой, где указанные вещества находятся в твердой форме. Когда растворителем является вода, на указанные вещества ссылаются как на гидраты.

Термин "Src" используют для обозначения протеинтирозинкиназы семейства Src, экспрессирующейся в широком разнообразии клеток и индуцибельно экспрессирующейся в макрофагах. Src вовлечена в пути передачи сигнала экспрессии воспалительных генов, например опосредование экспрессии фактора некроза опухоли альфа (TNF-альфа) в макрофагах, стимулированных липополисахаридом (LPS).

Термин "Yes" используют для обозначения протеинтирозинкиназы семейства Src, экспрессирующейся в широком разнообразии клеток. Yes вовлечена в передачу сигнала по ходу транскрипции цитокиновой передачи сигнала в иммунных и воспалительных клетках.

Термин "Fyn" используют для обозначения протеинтирозинкиназы семейства Src, экспрессирующейся среди прочего в Т-клетках, В-клетках, NK-клетках и тучных клетках, где она вовлечена в передачу сигнала через Т-клеточный рецептор, опосредованную адгезией передачу сигнала. Она играет существенную роль в дегрануляции тучных клеток и продуцировании цитокинов.

Термин "Lck" используют для обозначения протеинтирозинкиназы семейства Src, экспрессирующейся среди прочего в Т-клетках и МК-клетках, где она играет центральную роль в активации и дифференцировке Т-клеток.

Термин "Lyn" используют для обозначения протеинтирозинкиназы семейства Src, повсеместно экспрессирующейся в гематопоэтических клетках, таких как Т-клетки, В-клетки, NK-клетки, нейтрофилы, эозинофилы, макрофаги, моноциты, тучные клетки и дендритные клетки, где она вовлечена среди прочего в модулирование В-клеточных ответов.

Термин "Hck" используют для обозначения протеинтирозинкиназы семейства Src, экспрессирующейся среди прочего в нейтрофилах, эозинофилах, моноцитах, макрофагах и дендритных клетках, где она вовлечена в передачу ряда внеклеточных сигналов, которые в итоге влияют на клеточные процессы, включая пролиферацию, дифференцировку и миграцию.

Термин "Fgr" используют для обозначения протеинтирозинкиназы семейства Src, экспрессирующейся среди прочего в нейтрофилах, эозинофилах, моноцитах, макрофагах и дендритных клетках, где она вовлечена в каскадную передачу сигналов от В-клеточного рецептора, FcR и рецепторов семейства интегринов.

Термин "Jak-2" используют для обозначения протеинтирозинкиназы семейства JAK (Янус протеинтирозинкиназы), в высокой степени экспрессирующейся в иммунных клетках, где она является существенной для передачи сигналов по ходу транскрипции от многих цитокинов и факторов роста, включая провоспалительные цитокины интерлейкин-6 (IL-6), интерферон-гамма (IFN-y), IL-3, IL-5 и гранулоцитарно-макрофагеальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF).

Термин "cKit" используют для обозначения рецепторной тйрозинкиназы, которая представляет собой рецептор для фактора стволовых клеток (SCF) и необходима для нормального кроветворения. Ckit играет существенную роль в функции тучных клеток, так как SCF необходим для развития, пролиферации и выживания тучных клеток. SCF является существенным для оптимальной lgE/антиген-индуцируемой дегрануляции тучных клеток и продуцирования цитокинов. Активация c-kit индуцирует активацию и дегрануляцию эозинофилов.

Термин "Fms/CSF-IR" используют для обозначения рецепторной тирозинкиназы, которая представляет собой рецептор для CSF-1 и исходно экспрессируется моноцитами и макрофагами. CSF-1 играет центральную роль в эффекторных функциях макрофагов во время воспаления и регулирует дифференцировку, выживание и функцию макрофагов.

Термин "Raf-1" используют для обозначения тирозинкиназоподобной серин/треонинкиназы семейства RAF, члены которого являются основными эффекторами, привлекаемыми GTP-связанной (GTF - гуанозинтрифосфат) формой Ras для активации пути МЕК-МАР-киназы. Этот путь вовлечен в экспрессию провоспалительного цитокина GM-CSF и в развитие хронического воспаления, препятствуя долгожительству нейтрофилов.

Предпочтительные воплощения соединений формулы I

В настоящем предпочтительном воплощении изобретения W представляет собой кислород.

В другом предпочтительном воплощении изобретения Y представляет собой С(O).

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения R₁ представляет собой водород или метил.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения R₂ представляет собой водород или метил.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения R₃ представляет собой водород или метил.

В другом предпочтительном воплощении изобретения R₁ представляет собой водород.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения R₂ представляет собой водород.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения R₃ представляет собой водород.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения каждый из R₁, R₂ и R₃ представляет собой водород.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения D представляет собой СН.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения Е представляет собой СН.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения G представляет собой СН.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения J представляет собой СН.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения L представляет собой СН.

В другом воплощении изобретения n равен 1.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения W представляет собой кислород, Y представляет собой С(O), каждый из R₁, R₂ и R₃ представляет собой водород, СН, и n равен 1.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения D представляет собой СН, Е представляет собой СН, G представляет собой СН, и J представляет собой СН.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения D представляет собой азот, Е представляет собой СН, G представляет собой СН, и J представляет собой СН.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения R₄ представляет собой С_1-6алкил, С_2-6алкенил, С_2-6 алкинил, С_1-4гидроксиалкил, С_3-6циклоалкил, С_3-6циклоалкенил, С_2-5гетероциклоалкил, С_2-5гетероциклоалкенил, С_6-12арил или С _6-12гетероарил, где указанные С_1-6алкил, С _2-6алкенил, С_2-6алкинил, С_1-4гидроксиалкил, С_3-6циклоалкил, С_3-6циклоалкенил, C _2-5гетероциклоалкил, С_2-5гетероциклоалкенил, С_6-12арил или С_6-12гетероарил возможно замещены одним или более одинаковыми или разными заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из водорода, фторо, гидрокси, трифторметила, циано, С_1-4алкила, С _2-4алкенила, С_2-4алкокси, С_1-4алкилтио, С_3-6циклоалкила, С_3-6циклоалкенила, С _2-5гетероциклоалкила, С_2-6гетероциклоалкенила и C_1-3алкиламино, где указанные С_1-4алкил, С_2-4алкенил, С_1-4алкокси, С_1-4 алкилтио, С_3-6циклоалкил, С_3-6циклоалкенил, С_2-5гетероциклоалкил, С_2-5гетероциклоалкенил и C_1-3алкиламино возможно замещены одним или более одинаковыми или разными заместителями, независимо выбранными из гидрокси, метила, этила, метоксикарбонила, этоксикарбонила.

Предпочтительно, группа, представленная R₄ , содержит от 1 до 10 атомов углерода. Более предпочтительно, группа, представленная R₄, содержит от 3 до 8 атомов углерода.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения R₄ представляет собой C_1-6алкил, С_2-6алкенил, С_3-6циклоалкил, С_3-6 циклоалкенил, С_2-5гетероциклоалкил, С_2-5 гетероциклоалкенил, где указанные C_1-6алкил, С _2-6алкенил, С_3-6циклоалкил, С_3-6циклоалкенил, С_2-5гетероциклоалкил, С_2-5гетероциклоалкенил возможно замещены одним или более одинаковыми или разными заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из водорода, С _1-4алкила, С_2-4алкенила, С_3-6циклоалкила и С_3-6циклоалкенила, где указанные С_1-4 алкил, С_2-4алкенил, С_3-6циклоалкил и С _3-6циклоалкенил возможно замещены одним или более одинаковыми или разными заместителями, независимо выбранными из метила и этила.

В еще одном предпочтительном воплощении R₄ содержит не более 3 гетероатомов, более предпочтительно не более 1 гетероатома и наиболее предпочтительно состоит только из атомов углерода и водорода.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения R₄ представляет собой изобутил, изопентил, метилбутил, этилбутил, трет-бутил, тpeт-бутил метил, гидроксиэтил, гидроксиизобутил, этилгидроксибутил, метоксиметил, метоксиэтил, этилтиометил, фторметил, трифторэтил, цианометил, диэтиламинометил, циклопропил, циклопропилметил, этоксикарбонилциклопропил, циклобутил, циклобутилметил, циклобутилэтил, циклопентил, циклопентилметил, циклопентилгидроксиметил, циклопентилэтил, циклогексил, циклогексилметил, циклогексенилметил, тетрагидрофуранилметил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, тетрагидропиранилметил, диметилдиоксоланил, пирролидинилметил, фурфурил, тиенил, тиенилметил, фенил, бензил, фенилэтил, фенилгидроксиметил, пиридилметил.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения R₄ представляет собой циклопентилметил, 2-этил-бутил, 3-метил-бутил, трет-бутил-метил или циклогекс-1-енилметил.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения R₃ и R₄ образуют часть циклопропильного, циклобутильного, цикпопентильного или циклогексильного кольца.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения R₅ представляет собой водород, метил, этил, пропил, C_1-3 алкиламино, метокси, этокси, С_3-6циклоалкил, С _4-6циклоалкенил, С_2-5гетероциклоалкил или С _2-5гетероарил, где указанные метил, этил, пропил, C _1-3алкиламино, метокси, этокси, С_3-6циклоалкил, С_4-6циклоалкенил, С_2-5гетероциклоалкил или Сз-5 гетероарил возможно замещены одним или более одинаковыми или разными заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из циано, метила, этила, пропила, метоксикарбонила, этоксикарбонила, пропоксикарбонила, метилкарбонилокси или этилкарбонилокси.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения R₅ представляет собой водород, метил, метиламино, этиламино, метокси, этокси, цианометил, циклопропил, метоксикарбонилэтил, метилкарбонилоксиметил, тетрагидрофуранил, фурил, тиенил, изоксазолил, оксазолил, тиазолил, оксадиазолил, тиадиазолил или триазолил, все из которых возможно замещены метилом.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения R₅ имеет молекулярную массу не более 100 Дальтон.

В еще одном предпочтительном воплощении R₅ содержит не более 5 атомов углерода.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения R₅ представляет собой метил, фурил, метокси или оксазолил.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретения соединение формулы I выбрано из группы, состоящей из

метилового эфира (4-{[2-(3,3-диметил-бутилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-карбаминовой кислоты (соединение 101);

2-[(2-ацетиламино-пиридин-4-илметил)-амино]-N-(2-циклопентил-этил)-бензамида (соединение 102);

2-[(2-ацетиламино-пиридин-4-илметил)-амино]-N-(3-этил-пентил)-бензамида (соединение 103);

(4-{[2-(3-этил-пентилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-амида оксазол-5-карбоновой кислоты (соединение 104);

(4-{[2-(2-циклопентил-этилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-амида фуран-2-карбоновой кислоты (соединение 105);

(4-{[2-(4-метил-пентилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-амида фуран-2-карбоновой кислоты (соединение 106);

(4-{[2-(3,3-диметил-бутилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-амида фуран-2-карбоновой кислоты (соединение 107);

(4-{[2-(2-циклогекс-1-енил-этилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-амида фуран-2-карбоновой кислоты (соединение 108);

(4-{[2-(3-этил-пентилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-амида фуран-2-карбоновой кислоты (соединение 109).

В еще одном предпочтительном воплощении настоящего изобретения соединения общей формулы I имеют молекулярную массу ниже 1300 Дальтон, например ниже 900 Дальтон, например ниже 800 Дальтон, например ниже 700 Дальтон, например ниже 600 Дальтон, например ниже 500 Дальтон.

В еще одном предпочтительном воплощении фармацевтические композиции могут дополнительно содержать другое терапевтически активное соединение.

Соединения формулы I могут быть получены в кристаллической форме либо непосредственно концентрированием из органического растворителя, либо кристаллизацией или перекристаллизацией из органического растворителя или смеси указанного растворителя и сорастворителя, который может быть органическим или неорганическим, таким как вода. Кристаллы могут быть выделены в, по существу, свободной от растворителя форме или в виде сольвата, такого как гидрат. Изобретение охватывает все кристаллические модификации и формы, а также их смеси.

Соединения формулы 1 могут содержать асимметрически замещенные (хиральные) атомы углерода и углерод-углеродные двойные связи, которые могут приводить к существованию изомерных форм, например энантиомеров, диастереомеров и геометрических изомеров. Настоящее изобретение относится ко всем таким изомерам, либо в чистой форме, либо в виде их смесей. Изобретение также относится ко всем возможным таутомерам соединений формулы I.

Образование новых кровеносных сосудов происходит при балансе между факторами, работающими за и против этого образования, то есть при балансе между проангиогенными и антиангиогенными соединениями. На начальной стадии при развитии, пролиферации и дифференцировке эндотелиальные клетки образуют сосуды в ткани, изначально лишенной сосудов. Эта первая стадия дает неплотную сеть, которая должна быть ремоделирована, чтобы достичь зрелого сосуда. Этот процесс называют васкулогенезом. Образование нового кровеносного сосуда также может происходить из уже существующего сосуда в процессе, называемом ангиогенным разрастанием. Здесь "старый" сосуд означает исходно дестабилизированный в установленном сайте, а новый сосуд образуется из него и затем созревает.

В описанный выше распространенный процесс вовлечен сосудистый эндотелий, который является конкретным типом эндотелия, составляющего единый слой гладкомышечных клеток, который покрывает просвет кровеносных сосудов. Был идентифицирован ряд специфических факторов роста, действующих на указанный эндотелий, и они включают пять членов семейства факторов роста эндотелия сосудов (VEGF), четыре члена семейства ангиопоэтинов и один член большого семейства эфринов. Тем не менее, VEGF сохраняет позицию как наиболее ключевого оператора образования сосудов, так как он необходим для инициирования образования незрелых сосудов как путем васкулогенеза, так и путем ангиогенного разрастания [Yancopoulos, Nature, 407, 242-248, 2000]. VEGF, изначально названный "фактором проницаемости сосудов" (VPF), представляет собой ангиогенный фактор, который находится в центре сети, регулирующей рост и дифференцировку сосудистой системы и ее компонентов во время эмбрионального развития, нормального роста и в широком ряде патологических аномалий наряду с его клеточными рецепторами [G. Breier et al., Trends in Cell Biology 6, 454-6, 1996].

VEGF представляет собой связанный дисульфидными мостиками димерный гликопротеин массой 46 кДа, названный "фактором роста тромбоцитов" (PDGF); он продуцируется нормальными клеточными линиями и опухолевыми клеточными линиями; он является митогеном, специфичным к эндотелиальным клеткам; проявляет ангиогенную активность в тест-системах in vivo (например роговице кролика); является хемотаксическим для эндотелиальных клеток и моноцитов; и индуцирует активаторы плазминогена в эндотелиальных клетках, которые вовлечены в протеолитическое разложение внеклеточного матрикса во время образования капилляров. Известен ряд изоформ VEGF, которые демонстрируют сравнимую биологическую активность, но отличаются по типу клеток, которые их секретируют, и по их гепарин-связывающей способности. В дополнение, существуют другие члены семейства VEGF, такие как "фактор роста плаценты" (PIGF) и VEGF-C.

VEGF уникальны в том, что они являются единственными ангиогенными факторами роста, про которые известно, что они вносят вклад в сверхпроницаемость сосудов и образование отека. Фактически, сверхпроницаемость сосудов и отек, которые ассоциированы с экспрессией или введением многих других факторов роста, по-видимому, опосредованы продуцированием VEGF.

Воспалительные цитокины стимулируют продуцирование VEGF. Гипоксия приводит в результате к заметной позитивной регуляции VEGF в различных тканях; следовательно, ситуации, включая инфаркт, окклюзию, ишемию, анемию или нарушение кровообращения, обычно запускают VEGF/VPF-опосредованные ответы. Сверхпроницаемость сосудов, ассоциированный отек, измененный трансэндотелиальный обмен и макромолекулярная транссудация, которая часто сопровождается диапедезом, могут привести в результате к избыточному отложению матрикса, аберрантной стромальной пролиферации, фиброзу и так далее. Следовательно, VEGF-опосредованная сверхпроницаемость может вносить значительный вклад в заболевания с этими этиологическими факторами. Как таковые, регуляторы ангиогенеза становятся важными терапевтическими агентами.

Известны три типа рецепторов VEGF: VEGFR-1 (или frns-подобный тирозинкиназный рецептор (Flt-1)), VEGFR-2 и VEGFR-3, и они экспрессируются почти исключительно на эндотелиальных клетках. VEGFR-2 изначально был назван KDR (рецептор, содержащий киназный встроенный домен), и этот рецептор, по-видимому, играет критическую роль в индуцировании клеточной пролиферации посредством VEGF [Ellis, Seminars in Oncology, 28, 94-104, 2001]. VEGF-рецепторы относятся к группе тирозинкиназных рецепторов, и они состоят из семи внеклеточных lg-подобных доменов, прикрывающих сайт связывания VEGF, и внутриклеточного тирозинкиназного домена. Внутри- и внеклеточные домены соединены коротким трансмембранным сегментом [Shawver, DDT, 2, 50-63, 1997]. Подобно другим рецепторным тирозинкиназам, VEGFR-2 димеризуется при связывании с VEGF, и тирозинкиназный домен становится автофосфорилированным. Эта активированная форма, в свою очередь, связывается с другими молекулами, которые активируются, например, посредством еще одного фосфорилирования. Этот каскад в итоге запускает пролиферацию эндотелиальных клеток и тем самым образование новых кровеносных сосудов.

Хотя кровеносные сосуды у здоровых взрослых субъектов находятся в значительной степени в состоянии покоя, кожа взрослых субъектов сохраняет способность быстрого инициирования ангиогенеза во время восстановления тканей и при различных заболеваниях, включая воспалительные кожные заболевания, такие как псориаз, многие типы дерматита, кожно-нарывные заболевания, кожные неоплазии, включая плоскоклеточный рак, злокачественные меланомы и саркому Капоши и пролиферативные гемангиомы у детей. Ангиогенез в коже также вовлечен в ряд других заболеваний, которые характеризуются макроскопически видимыми, выступающими кровеносными сосудами, включая розацеа и базальноклеточный рак. Соединения по настоящему изобретению будут особенно полезны в лечении каждого из этих заболеваний.

Исследования подтвердили, что в нормальной коже состояние покоя сосудов поддерживается влиянием эндогенных ингибиторов ангиогенеза, которое превосходит влияние ангиогенных стимулов. Таким образом, ангиогенез может быть вызван повышенной секрецией ангиогенных факторов или негативной регуляцией ингибиторов ангиогенеза.

Фактор роста эндотелия сосудов представляет собой ключевой ангиогенный фактор, вовлеченный в заболевания, связанные с повышенным ангиогенезом в коже. Было обнаружено, что в нормальной коже VEGF экспрессируется в низких уровнях, в то время как при кожных заболеваниях, ассоциированных с ангиогенезом, включая псориаз, контактный дерматит, тяжелые буллезные заболевания, вирусные папилломы и плоскоклеточный рак, имеется заметная позитивная регуляция экспрессии VEGF эпидермальными кератиноцитами.

Более подробное обсуждение роли VEGF в кожном ангиогенезе представлено Detmar в Journal of Dermatological Science 24 Suppl. 1 (2000); 78-84.

Особый интерес в настоящем изобретении представляет розацеа. Розацеа является распространенным состоянием, характеризующимся воспалением и сосудистыми аномалиями кожи лица и глаз. Эритема и гиперемия могут развиваться от временной формы до постоянной и часто сопровождаются телеангиэктазией или папулами и пустулами. В некоторых случаях может возникать утолщение носовой ткани как результат постоянного отека. В большинстве случаев присутствуют только некоторые из этих признаков, и это приводит к необходимости разделять широкий обобщенный термин «розацеа» в подклассы. Это особенно важно, так как часто виды лечения, которые очень эффективны для пациентов, страдающих одним типом розацеа, могут быть намного менее эффективны для других. Розацеа разделяют на четыре подтипа: эритематозно-телеангиэктатический тип, папулопустулезный, фиматозный и окулярный типы (см. Crawford G H et al. J Am Acad Dermatol 2004; 51: 327-41).

Роль VEGF в розацеа была изучена Gomaa A H A et al. (J Cutan Pathol 2007; 34: 748-753) и Smith J R et al. (Br J Opthalmol 2007; 91: 226-229), причем последние обнаружили повышенную экспрессию дермального VEGF в образцах поврежденной кожи пациентов с нефиматозным типом розацеа и подтвердили, что VEGF может быть причиной, связанной с повышенным ангиогенезом при нефиматозном типе розацеа.

Таким образом, соединения по настоящему изобретению полезны для лечения розацеа, в частности нефиматозного типа розацеа.

Как обсуждалось выше, большинство видов рака человека характеризуется сверхэкспрессией VEGF опухолевыми клетками и сверхэкспрессией VEGF-рецепторов на кровеносных сосудах, ассоциированных с опухолью. VEGF также, по-видимому, влияет на очень раннее развитие опухоли при плоскоклеточном раке кожи. VEGF-C также действует на VEGFR-2, а также на VEGFR-3, и его экспрессия, как полагают, является ключевой при саркоме Капоши.

Опухолевым клеткам требуется кислород для роста и метастазирования. Кислород имеет очень ограниченный диапазон диффузии, поэтому для того чтобы опухоль росла за пределами очень ограниченного размера, они не могут основываться только на пассивном транспорте кислорода, и скорее они вынуждены установить активный транспорт кислорода, то есть они вынуждены привлекать кровеносные сосуды организма хозяина. Питательные вещества, требуемые опухоли, также поставляются через эти кровеносные сосуды. Опухоль будет расти или в итоге распространяться во внесосудистую область, приводя к низким значениям pO₂ и рН, и эти факторы запускают позитивную регуляцию, например, VEGF в опухолевых клетках. В отсутствие достаточного запаса кислорода и питательных веществ опухолевые клетки подвергаются некрозу или апоптозу, и опухоль таким образом прекращает расти и может даже регрессировать. Ангиогенез считается абсолютно необходимым условием для опухолей, которые растут выходя за пределы диаметра приблизительно 1-2-мм; вплоть до этого ограничения кислород и питательные вещества могут поставляться опухолевым клеткам путем диффузии. Каждая опухоль, независимо от ее природы и ее причины, становится таким образом зависимой от ангиогенеза для ее роста, после того как она достигнет определенного размера. Большое количество человеческих опухолей, особенно глиомы и карциномы, экспрессируют высокие уровни VEGF. Это привело к гипотезе о том, что VEGF, высвобождаемый опухолевыми клетками, стимулирует рост кровеносных капилляров и пролиферацию опухолевого эндотелия паракринным образом и посредством увеличенной доставки через кровь ускоряет рост опухоли. Повышенная экспрессия VEGF может объяснить возникновение церебрального отека у пациентов с глиомой. Прямое доказательство роли VEGF как фактора ангиогенеза опухоли показано в исследованиях in vivo, в которых экспрессия VEGF или активность VEGF были ингибированы. Это было достигнуто с использованием антител против VEGF с доминант-негативными VEGFR-2 мутантами, которые ингибировали передачу сигнала, и с помощью технологий антисмысловых-VEGF РНК. Все подходы привели к снижению роста клеточных линий глиомы или других опухолевых клеточных линий in vivo как результат ингибированного ангиогенеза опухоли. Уже в 1971 году Фолкман доказал, что ингибирование ангиогенеза может представлять собой стратегию для лечения видов рака, которые проявляются в виде твердых опухолей [Folkman, в Cancer Medicine, (Eds Holland et al), 132-152, Decker Ontario, Canada, 2000]. Это мнение было основано на еще более ранних наблюдениях, что ангиогенез возникает в окружении опухолей, и на гипотезе о том, что "ангиогенный" принцип вызывается опухолями.

Три основных механизма играют важную роль в активности ингибиторов ангиогенеза против опухолей: 1) ингибирование прорастания сосудов, особенно капилляров, в сосудистые покоящиеся опухоли с тем результатом, чтобы не было сетевого опухолевого роста за счет равновесия, достигаемого между апопотозом и пролиферацией; 2) предотвращение миграции опухолевых клеток благодаря отсутствию кровотока к опухолям и от них; и 3) ингибирование пролиферации эндотелиальных клеток, избегая тем самым паракринного стимулирующего рост действия, влияющего на окружающую ткань, эндотелиальными клетками, которые в норме выстилают сосуды [R. Connell et al., Exp.Opin. Ther. Patents, 11, 77-114, 2001]. Как упомянуто выше, соединения по настоящему изобретению ингибируют VEGFR-2 (KDR) и таким образом предотвращают ангиогенез, то есть образование новых кровеносных сосудов, и, следовательно, они будут способствовать прекращению роста опухоли и возможно даже ее регрессированию.

Соединения по изобретению будут полезны для профилактики, лечения или облегчения заболевания или состояния, ассоциированного с нерегулируемым ангиогенезом, например профилактики, лечения или облегчения опухолевых или неопластических заболеваний, таких как плоскоклеточный рак, базальноклеточный рак, злокачественная меланома злокачественные кожные лимфомы, ангиосаркома, саркома Калоши и пролиферирующие гемангиомы.

Ряд глазных заболеваний также связан с процессом ангиогенеза, например пролиферативная диабетическая ретинопатия, ретинопатия беременных, рубеоз радужной оболочки и вторичная глаукома после окклюзии ответвленной и центральной ретинальной вены, возрастная макулопатия и неоваскуляризация роговицы. В то время как сложная система ангиогенной регуляции все еще полностью не объяснена, повышенные уровни VEGF связаны с рядом этих состояний. Известно, что гипоксия и воспаление ткани могут стимулировать его секрецию, и повышенные уровни мРНК VEGF, возможно регулируемые чувствительными к кислороду гемопротеинами, были обнаружены в гипоксических областях отслоившейся сетчатки. Также при диабетической ретинопатии, гипоксические не снабжаемые области сетчатки секретируют VEGF, который, по-видимому, является наиболее важным фактором при этом состоянии.

Клетки стенки капилляров (эндотелиальные клетки, перициты и гладкомышечные клетки) в сетчатке наряду с мюллеровыми клетками и эпителиальными клетками пигмента сетчатки все могут секретировать VEGF, и VEGF-рецепторы обнаружены в высоких концентрациях на глазных эндотелиальных клетках. VEGF может действовать местно в сетчатке (например, как при пролиферативной диабетической витреоретинопатии) или диффундировать в передний сегмент (где он может вызывать рубеоз радужной оболочки или рубеоз радужно-роговичного угла). Также вызывая ангиогенез, VEGF, кроме того, оказывает эффект повышенной сосудистой проницаемости и поэтому вовлечен в воспалительные заболевания, ассоциированные с ангиогенезом, при которых происходит разрушение гематоретинального барьера.

Существуют четыре потенциальные мишени для ингибирования VEGF. К ним относятся следующие: для ингибирования секреции VEGF, для инактивации VEGF, для блокирования VEGF-рецепторов на глазных эндотелиальных клетках и для ингибирования постсинаптической VEGF-индуцированной клеточной активации. Настоящее изобретение относится к блокированию VEGF-рецепторов, в частности VEGFR-2.

Однако из-за сложной природы ангиогенных путей передачи сигналов и огромного ряда аниогенных факторов, блокирования одного фактора или рецептора может быть недостаточно для достижения снижения ангиогенеза. Таким образом, соединения по настоящему изобретению подходят для применения в сочетании с другими антиангиогенными соединениями, особенно теми, которые нацелены на другие части ангиогенной регулирующей системы.

Роль ангиогенеза и VEGF при глазных заболеваниях обсуждается более подробно Cursiefen и Schonherr в Klin Monatsbl Augenheilkd 1997; 210: 341-351.

Нерегулируемый ангиогенез вовлечен в большой ряд патологических состояний или заболеваний (см. Р.Carmeliet & R.K.Jain, Nature, Vol.407, 2000, pp.249-257; A.H.Vagnucci & W.W.Li, The Lancet, Vol.361, 2003, 605-608; В. Xuan et al., J. Ocular Pharmacology & Therapeutics, Vol.15(2), 1999, pp.143-152). Соединения по настоящему изобретению полезны для предупреждения, профилактики, лечения или облегчения заболевания или состояния, ассоциированного или связанного с нерегулируемым ангиогенезом, но не ограниченного ими. Эти состояния или заболевания включают состояния или заболевания, характеризующиеся аномальным ангиогенезом или нарушением сосудистой функции, розацеа, атеросклероз, гемангиому, гемангиоэндотелиому, бородавки, пиогенные гранулемы, рост волос, келлоидные рубцы, аллергический отек, дисфункциональное маточное кровотечение, фолликулярные кисты, гиперстимуляцию яичников, эндометриоз, ожирение, артрит, ревматоидный артрит, синовит, разрушение кости и хряща, остеомиелит, рост паннуса, образование остеофитов, воспалительные и инфекционные заболевания (гепатит, пневмония, гломерулонефрит), астму, носовые полипы, трансплантацию, перерождение печени, ретинопатию, диабетическую ретинопатию, неоваскулярную глаукому, эндометриоз, псориаз, лимфопролиферативные расстройства, тиреоидит, увеличение щитовидной железы, обструктивное заболевание легких или церебральное ишемическое реперфузионное повреждение, болезнь Альцгеймера и глазные заболевания, такие как острая дегенерация желтого пятна, возрастная дегенерация желтого пятна, хороидальная неоваскуляризация, ретинит, цитомегаловирусный ретинит, макулярный отек и ишемическая ретинопатия.

Соединения формулы I, как полагают в настоящее время, полезны в качестве ингибиторов других киназ, а также протеинтирозинкиназ семейства Src, таких как Src, Yes, Fyn, Lyn, Fgr, Lck и/или Hck, и/или JAK-2, и/или Raf-1, и/или cKit, и/или Fma/CSF-IR протеинтирозинкиназ, и поэтому считают, что они полезны в лечении, облегчении или профилактике неинфекционных воспалительных или аутоиммунных заболеваний или состояний, в которые эти киназы вовлечены.

Примеры таких неинфекционных воспалительных заболеваний или состояний выбраны из группы, состоящей из острых воспалительных заболеваний, таких как острое поражение легких, острый респираторный дистресс-синдром, аллергия, анафилактический шок, сепсис или реакция трансплантат против хозяина, или хронических воспалительных заболеваний, таких как атопический дерматит, болезнь Крона, неспецифический язвенный колит, остеоартрит, подагра, псориатический артрит, цирроз печени или рассеянный склероз.

Примеры таких аутоиммунных заболеваний выбраны из группы, состоящей из аутоиммунного гастрита, болезни Аддисона, аутоиммунной гемолитической анемии, аутоиммунного тиреоидита, хронической идиопатической крапивницы, хронической иммунной полинефропатии, диабета, диабетической нефропатии, тяжелой псевдопаралитической миастении, обыкновенной пузырчатки, пернициозной анемии, первичного билиарного цирроза печени, системной красной волчанки и глазного заболевания, связанного с щитовидной железой.

В настоящее время считают, что соединения формулы I особенно полезны в лечении неинфекционных воспалительных глазных заболеваний или состояний, таких как неинфекционный (например, аллергический) конъюнктивит, увеит, ирит, кератит, склерит, эписклерит, симпатический офтальмит, блефарит, сухой кератоконъюнктивит или иммунологическое отторжение трансплантата роговицы.

Помимо их полезности для лечения людей, соединения по настоящему изобретению также могут быть полезны для ветеринарного лечения животных, включая млекопитающих, таких как лошади, крупный рогатый скот, овцы, свиньи, собаки и кошки.

Для применения в терапии соединения по настоящему изобретению обычно используют в форме фармацевтической композиции или фармацевтического препарата. Таким образом, изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I, возможно вместе с одним или более чем одним другим терапевтически активным соединением, таким как разнообразные агенты, например производные витамина D и политрансретиноевой кислоты; кортикостероиды, такие как дексаметазон и преднизон, химиотерапевтические агенты, противораковые агенты, цитотоксические агенты, вместе с фармацевтически приемлемым эксципиентом или носителем. Эксципиент должен быть "приемлемым" в том смысле, что он должен быть совместимым с другими ингредиентами композиции и не оказывать вредного воздействия на реципиента.

Если лечение включает введение другого терапевтически активного соединения, рекомендуется принимать во внимание Goodman & Oilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9^th Ed., J.G.Hardman и L.E.Limbird (Eds.), McGraw-Hill 1995, в отношении используемых дозировок указанных соединений.

Подходящим образом содержание активного ингредиента составляет 0,1-99,9% по массе композиции.

Термин "единица дозировки" означает единую, то есть однократную дозу, которая может быть введена пациенту и которую легко можно обрабатывать и упаковывать, сохраняя как физически, так и химически стабильную единую дозу, содержащую либо активное вещество само по себе, либо смесь его с твердыми или жидкими фармацевтическими разбавителями и носителями. В форме единицы дозировки соединение может быть введено один или более раз в сутки через подходящие интервалы, всегда в зависимости, однако, от состояния пациента и в соответствии с предписанием лечащего врача. Также предусмотрено, что при некоторых режимах лечения может быть полезным введение с более длительными интервалами, например через день, раз в неделю, или даже с еще более длительными интервалами.

Подходящим образом единица дозировки препарата содержит от 0,01 мг до 10000 мг, предпочтительно от 100 мг до 3000 мг, например от 200 мг до 1000 мгсоединения формулы I.

Препараты включают, например, те, которые находятся в форме, подходящей для офтальмологического (включая формы с непрерывным высвобождением или высвобождением по времени), перорального (включая формы с непрерывным высвобождением или высвобождением по времени), ректального, парентерального (включая подкожное, внутрибрюшинное, внутримышечное, внутрисуставное и внутривенное), трансдермального, местного, интраназального или трансбуккального введения.

Препараты могут быть удобным образом представлены в стандартной лекарственной форме и могут быть изготовлены любым из способов, хорошо известных в области фармации, например как раскрыто в Remington, The Science и Practice of Pharmacy. 20^th ed., 2000. Все способы включают стадию приведения активного ингредиента в контакт с носителем, который составляет один или более дополнительных ингредиентов. В общем препараты готовят путем однородного и гомогенного приведения активного ингредиента в контакт с жидким носителем или тонкоизмельченным твердым носителем или обоими, и затем, при необходимости, формования продукта в желаемый препарат.

Препараты, подходящие для офтальмологического введения, могут быть представлены в форме стерильного водного препарата активных ингредиентов, которые могут быть в микрокристаллической форме, например, в форме водной микрокристаллической суспензии. Липосомальные препараты или биоразлагаемые полимерные системы, например, как раскрыто в Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, vol.2, 1989, также могут быть использованы для представления активного ингредиента для офтальмологического введения.

Препараты, подходящие для местного или офтальмологического введения, включают жидкие или полужидкие препараты, такие как мази, лосьоны, гели, примочки, эмульсии масло-в-воде или вода-в-масле, например кремы, мази или пасты; или растворы либо суспензии, такие как капли, внутривенные инъекционные системы и лекарственные системы с высвобождением по времени.

Препараты по настоящему изобретению, подходящие для перорального введения, могут быть представлены в форме дискретных единиц, таких как капсулы, саше, таблетки или лепешки, каждая из которых содержит предварительно определенное количество активного ингредиента; в форме порошка или гранул; в форме раствора или суспензии в водной жидкости или неводной жидкости, такой как этанол или глицерин; или в форме эмульсии масло-в-воде или эмульсии вода-в-масле. Такие масла могут представлять собой пищевые масла, такие как, например, хлопковое масло, кунжутное масло, кокосовое масло или арахисовое масло. Подходящие диспергирующие или суспендирующие агенты для водных суспензий включают синтетические или натуральные смолы, такие как трагакантовая камедь, альгинат, аравийская камедь, декстран, натрий-карбоксиметилцеллюлоза, желатин, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, карбомеры и поливинилпирролидон. Активные ингредиенты могут также быть введены в форме болюса, электуария или пасты.

Таблетка может быть изготовлена путем прессования или формования активного ингредиента, возможно с одним или более чем одним вспомогательным ингредиентом. Прессованные таблетки могут быть изготовлены путем прессования на подходящем оборудовании активного(ых) ингредиента(ов) в сыпучей форме, такой как порошок или гранулы, возможно смешанной со связывающим агентом, таким как, например, лактоза, глюкоза, крахмал, желатин, аравийская камедь, трагакантовая камедь, альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, полиэтиленгликоль, воски или тому подобное; смазывающим веществом, таким как, например, олеат натрия, стеарат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия или тому подобное; разрыхлителем, таким как, например, крахмал, метилцеллюлоза, агар, бентонит, натрий-кроскармеллоза, крахмалгликолят натрия, кросповидон или тому подобное, или диспергирующим агентом, таким как полисорбат 80. Формованные таблетки могут быть изготовлены путем формования на подходящем оборудовании смеси порошкообразного активного ингредиента и подходящего носителя, увлажненного инертным жидким разбавителем.

Препараты для ректального введения могут быть представлены в форме суппозиториев, в которых соединение по настоящему изобретению смешано с низкоплавкими водорастворимыми или нерастворимыми в воде твердыми веществами, такими как масло какао, гидрогенированные растительные масла, полиэтиленгликоль или сложные эфиры жирных кислот с полиэтиленгликолями, в то время как эликсиры могут быть изготовлены с использованием миристилпальмитата.

Препараты, подходящие для парентерального введения, соответственно включают стерильный масляный или водный препарат активных ингредиентов, который предпочтительно является изотоническим с кровью реципиента, например, изотонический солевой раствор, изотонический раствор глюкозы или буферный раствор. Препарат может быть подходящим образом стерилизован путем, например, фильтрации через фильтр, задерживающий бактерии, добавления стерилизующего агента к препарату, облучения препарата или термообработки препарата. Липосомальные препараты, как раскрыто, например, в Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, vol.9, 1994, также подходят для парентерального введения.

Альтернативно, соединение формулы I может быть представлено в виде стерильного твердого препарата, например лиофилизированного порошка, который быстро растворяется в стерильном растворителе непосредственно перед использованием.

Трансдермальные препараты могут быть представлены в форме пластыря или накладки.

Препараты, подходящие для интраназального или трансбуккального введения, включают порошковые препараты, препараты с приводным механизмом и аэрозольные препараты, такие как аэрозоли и распылители. Такие препараты раскрыты более подробно, например, в Modern Pharmaceutics, 2^nd ed., G.S. Banker и С.Т.Rhodes (Eds.), стр.427-432, Marcel Dekker, New York; Modern Pharmaceutics. 3^th ed., G.S.Banker и С.Т.Rhodes (Eds.), стр.618-619 и 718-721, Marcel Dekker, New York и Encyclopedia of Pharmaceutical Technology vol.10. J Swarbrick и J.C.Boylan (Eds), стр.191-221, Marcel Dekker, New York.

В дополнение к вышеупомянутым ингредиентам, препараты соединения формулы I могут включать один или более чем один дополнительный ингредиент, такой как разбавитель, буферный агент, корригент, краситель, поверхностно-активный агент, загуститель, консервант, например метилгидроксибензоат (включая антиоксиданты), эмульгатор и тому подобное.

Когда активный ингредиент вводят в форме солей с фармацевтически приемлемыми нетоксичными кислотами или основаниями, предпочтительные соли являются, например, легко растворимыми в воде или слегка растворимыми в воде, с целью получения конкретной и подходящей скорости всасывания.

Способы получения

Соединения по настоящему изобретению могут быть получены разнообразными способами, хорошо известными специалистам в области органического синтеза. Соединения по настоящему изобретению могут быть синтезированы с использованием изложенных ниже способов вместе со способами, известными в области химии органического синтеза или их модификациями специалистами в данной области техники, как подходит. Предпочтительные способы включают описанные ниже способы, но не ограничены ими.

Новые соединения формулы (I) могут быть получены с использованием реакций и методик, описанных в этом разделе описания. Эти реакции осуществляют в растворителях, соответствующих используемым реагентам и веществам и подходящих для проводимых превращений. Кроме того, следует понимать, что в описанных ниже способах синтеза все предлагаемые реакционные условия, включая выбор растворителя, реакционную атмосферу, температуру реакции, продолжительность эксперимента и методики обработки, выбраны так, чтобы соответствовать стандартным условиям той реакции, которые должны легко распознаваться специалистом в данной области техники. Специалист в области органического синтеза должен понимать, что функциональная группа, присутствующая на разных частях исходной молекулы, в реакции должна быть совместима с предлагаемыми реагентами и реакциями. Не все соединения формулы (I), попадающие в данный класс, могут быть совместимы с некоторыми условиями реакций, необходимыми в некоторых из описанных способов. Такие ограничения к заместителям, которые совместимы с условиями реакций, очевидны специалисту в данной области техники, и могут быть использованы альтернативные способы.

Соединения формулы (I) могут быть получены средствами и способами, легкодоступными специалисту в данной области техники, например, следуя методикам, изложенным в представленных ниже Схемах. Эти Схемы не предназначены ограничивать объем данного изобретения никаким образом.

Все заместители, если не указано иное, являются такими, как определено выше. Реагенты и исходные вещества легко доступны специалисту в данной области техники.

Соединения формулы (I), в общем, получают путем взаимодействия соединения формулы (II) с амином формулы (III), как показано на Схеме 1. Предпочтительные растворители представляют собой апротонные растворители, такие как диметилформамид (DMF) и пиридин.

Эти взаимодействия в общем осуществляют при температуре от приблизительно -78°С до приблизительно 60°С, часто при приблизительно комнатной температуре, и как правило завершают в пределах приблизительно от 2 часов до приблизительно 5 суток. Фильтрование и выпаривание растворителя при пониженном давлении дают продукты, которые могут быть при желании дополнительно очищены стандартными способами, такими как хроматография, кристаллизация или перегонка. Альтернативно, продукты могут быть очищены путем удаления растворителя, используемого для осуществления реакции, например путем выпаривания при пониженном давлении, и дополнительно очищены, как упомянуто выше.

Схема 1: Общий способ получения соединений общей формулы (I) из соединений общей формулы (II).

Соединения общей формулы (II) обычно получают путем взаимодействия амина общей формулы (IV) с соединением формулы (V). Предпочтительные растворители представляют собой апротонные растворители, как пиридин.

Взаимодействия обычно осуществляют при температуре от приблизительно -78°С до приблизительно 60°С, часто при приблизительно комнатной температуре, и обычно завершают в пределах приблизительно от 2 часов до приблизительно 5 суток.

Схема 2: Общий способ получения соединений обшей Формулы (II). Азот-замещенные ангидриды общей формулы [IV] могут быть получены из ангидридов общей формулы [VI], как показано на Схеме 3. Проводят обработку ангидридов общей формулы [VI] спиртами [VII], где LG представляет собой ОН, по реакции типа Мицунобу, например трифенилфосфином и диэтилазодикарбоксилатом (DEAD) или диизопропилазодикарбоксилатом, в подходящем растворителе, таком как тетрагидрофуран или диэтиловый эфир, но не ограниченном ими. Альтернативно, N-алкилированные ангидриды общей формулы [IV] могут быть получены путем обработки [VI] подходящим основанием, таким как карбонат натрия или гидрид натрия, с последующим алкилированием подходящим алкилгалогенидом [VII], где LG представляет собой Cl, Br, I. Неограничивающие примеры таких получений описаны, например, G.M.Coppola: Synthetic Communications (2002), 32, 1009-1013 и в упомянутых там ссылках и в WO 00/27819.

Ангидриды общей формулы [VI] либо имеются в продаже, либо могут быть легко получены с использованием методик, хорошо известных специалисту в данной области техники. Неограничивающие примеры таких получений описаны, например, G.M.Coppola: Synthesis (1980), 505-536; S. Jonsson et.al.: J. Med. Chem. (2004), 47, 2075-2088; J. Clews et al.: Tetrahedron (2000), 56, 8735-8746, и в патенте США 3887550.

Схема 3: Общий способ получения азот-замещенных ангидридов общей формулы ПУ1 из ангидридов общей формулы ГУН

Исходные вещества [III] и [VIII] имеются в продаже или могут быть синтезированы стандартными способами, известными специалистам в области органического синтеза.

Хотя Схемы 1, 2 и 3 выше иллюстрируют один из возможных путей синтеза, следует понимать, что другие пути синтеза также являются возможными. Например, порядок стадий, показанных на Схемах 1 и 2, можно поменять таким образом, чтобы ацилирование и тиоацилирование было конечной стадией, причем образование амида или тиоамида непосредственно предшествовало им.

Общие методики, получения и примеры

Спектры ¹Н ядерного магнитного резонанса (NMR) обычно записывали при 300 МГц, а спектры ¹³С NMR при 75,6 МГц. Значения химических сдвигов (5, в млн^-1) оценивали в конкретном растворителе относительно внутренних стандартов: тетраметилсилана ( =0.00) или хлороформа ( =7.25) или дейтериохлороформа ( =76.81 для ¹³С NMR). Даны значения мультиплета, или определенные (дублет (d), триплет (t), квартет (q)), или нет (m), при приблизительной средней точке, если не определен диапазон, (bs) указывает на широкий синглет. Органические растворители обычно использовали безводными. Хроматографию осуществляли на силикагеле Merck 60 (0,040-0-063 мм). Указанные соотношения растворителей относятся к объемным соотношениям (об:об), если не указано иное.

Следующие сокращения использованы в описании:

АТР	аденозинтрифосфат

BSA	бычий сывороточный альбумин
DCM	дихлорметан
DMF	N,N'-диметилформамид
DMSO	диметилсульфоксид
Et	этил
Eq	эквиваленты)
h	час(ы)
L	литр
LG	уходящая группа
m	милли
M	молярный (моль/л)
Me	метил
MHz	Мегагерц
NMR	ядерный магнитный резонанс
o/n	в течение ночи
rt	комнатная температура
SEB	дополняющий ферментативный буфер
RT	время удерживания
TBS	забуференный трис(гидроксиметил)аминометаном солевой
	раствор
THF	тетрагидрофуран
Tris	трис(гидроксиметил)аминометан
v	объем

Таблица 1:
Соединения общей формулы [1] (W представляет собой кислород; R1, R2 и R3 представляют собой водород, n равен 1)
Сое динение	При мер	D	E	G	J	L	R4	Y	R5
101	1	CH	CH	CH	CH	CH		-C(O)-
102	2	CH	CH	CH	CH	CH		-C(O)-
103	3	CH	CH	CH	CH	CH		-C(O)-
104	4	CH	CH	CH	CH	CH		-C(O)-
105	5	CH	CH	CH	CH	CH		-C(O)-
106	6	CH	CH	CH	CH	CH		-C(O)-
107	7	CH	CH	CH	CH	CH		-C(O)-
108	8	CH	CH	CH	CH	CH		-C(O)-
109	9	CH	CH	CH	CH	CH		-C(O)-

Общая методика получения соединений Формулы X, где R₅ является таким, как указано выше:

1-(2-Амино-пиридин-4-илметил)-1H-бензо[d][1,3]оксазин-2,4-дион (5 ммоль) (полученный согласно методике в WO 2005054179) растворяли в безводном пиридине (20 мл). Добавляли по каплям в течение 10 минут ацилирующий агент (15 ммоль, 3 экв.). Эту реакционную смесь оставляли в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель удаляли под вакуумом. Неочищенный продукт снова растворяли в EtOAc (100 мл) и промывали водой (3×30 мл) и NaCl (насыщ., 30 мл), затем сушили над Na₂SO₄ и упаривали в вакууме. Соединения использовали без дополнительной очистки.

Пример получения 1 (соединение 501)

N-[4-(2,4-Диоксо-4Н-бензо[d][1,3]оксазин-1-илметил)-пиридин-2-ил]-ацетамид

Ацилирующий агент: ацетилхлорид

Соединение 501 получили в виде белых кристаллов и использовали без дополнительной очистки.

¹H NMR (DMSO-d₆) =10.49 (1Н, s), 8.22 (1Н, d), 8.07 (2H, m), 7.75 (1H, m), 7.33 (1Н, t), 7.20 (1Н, d), 7.09 (1Н, m), 5.32 (2H, s), 2.07 (3Н, s).

Пример получения 2 (соединение 502)

Метиловый эфир [4-(2,4-диоксо-4Н-бензо[d][1,3]оксазин-1-илметил)-пиридин-2-ил]-карбаминовой кислоты

Ацилирующий агент: метилхлорформиат

Соединение 502 получили в виде смеси 57:43 исходного вещества и соединения 502, соответственно. Эту смесь использовали без дополнительной очистки.

Пример получения 3 (соединение 503)

[4-(2,4-Диоксо-4Н-бензо[d][1,3]оксазин-1-илметил)-пиридин-2-ил]-амид оксазол-5-карбоновой кислоты

Ацилирующий агент: оксазол-5-карбоноилхлорид, образованный из оксазол-5-карбоновой кислоты путем стандартной обработки 1,5 экв. оксалилхлорида в DCM и каталитических количеств DMF.

Соединение 503 получили в виде смеси 70:30 исходного вещества, примесей и соединения 503, соответственно. Эту смесь использовали без дополнительной очистки.

Пример получения 4 (соединение 504)

[4-(2,4-Диоксо-4Н-бензо[d][1,3]оксазин-1-илметил)-пиридин-2-ил]-амид фуран-2-карбоновой кислоты

Ацилирующий агент: фуран-2-карбоноилхлорид

Соединение 504 получили в виде смеси 71:29 исходного вещества и соединения 504, соответственно. Эту смесь использовали без дополнительной очистки.

Пример получения 5 (соединение 505)

3-Этилпентаннитрил

Смесь 3-хлорметилпентана (25 г, 207 ммоль) и NaCN (15 г, 306,1 ммоль) в DMSO (150 мл) перемешивали при 100°С в течение 18 часов. Эту смесь дважды экстрагировали Et₂ O. Объединенные органические фазы промывали рассолом, сушили над MgSO₄ и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (23 г) в виде желтоватой жидкости.

¹H NMR (DMSO-d₆): (млн^-1)=2.48 (2Н, а), 1.58-1.23 (5Н, ь), 0.87 (6Н, а).

Пример получения 6 (соединение 506)

Гидрохлорид 3-этилпентиламина

К раствору 3-этилпентаннитрила (23 г, 207 ммоль) добавляли Na (15 г, 652,2 ммоль) в течение одночасового периода. Эту смесь кипятили с обратным холодильником в течение 1 часа. Реакционный раствор затем вливали в H₂O и дважды экстрагировали CH₂Cl₂. Объединенные органические фазы сушили над MgSO₄, концентрировали до половины первоначального объема, подкисляли 4 н. HCl в 1,4-диоксане. Этот раствор концентрировали до сухого состояния. Остаток очищали путем кристаллизации из CH₃CN с получением указанного в заголовке соединения (10 г) в виде белого твердого вещества.

¹H NMR (DMSO-d₆): (млн^-1)=8.20-8.00 (3Н, bs), 2.80-2.65 (2Н, m), 1.60-1.50 (2Н, m), 1.32-1.19 (5H, m), 0.83 (6H, t).

Общая методика получения соединений формулы Z:

Производное N-карбоксиантраниловой кислоты (0,07 ммоль, без учета каких-либо примесей, получено как описано в примерах получения 1-4) растворяли в безводном DMF (0,2 мл). Добавляли амин (0,077 ммоль), растворенный в пиридине (0,2 мл), и эту реакционную смесь активно перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенное вещество снова растворяли в DMF (0,5 мл) и очищали путем препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии (HPLC/MS).

Используя эту методику, были получены следующие соединения по настоящему изобретению:

Пример 1 (соединение 101)

Метиловый эфир (4-{[2-(3,3-диметил-бутйлкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-карбаминовой кислоты Амин: 3,3-диметилбутиламин

Производное N-карбоксиантраниловой кислоты: Соединение 502 из примера 2

LC/MS: (m/z) 385,2 (МН+); RT=6,21 мин; чистота (UV) составляет 100%.

¹H NMR (DMSO-d ₆) =10.11 (1H, s), 8.33 (2H, m), 8.16 (1H, d), 7.82 (1H, d), 7.53 (1H, d), 7.16 (1H, m), 6.98 (1H, m), 6.56 (1H, t), 6.47 (1H, d), 4.41 (2H, d), 3.64 (3H, s), 0.93 (9H, s).

Пример 2 (соединение 102)

2-[(2-Ацетиламино-пиридин-4-илметил)-амино]-N-(2-циклопентил-этил)-бензамид

Амин: 2-циклопентилэтиламин

Производное N-карбоксиантраниловой кислоты: Соединение 501 из примера 1

LC/MS: (m/z) 381,2 (МН+); RT=5,74 мин; чистота (UV) составляет 100%.

¹H NMR (DMSO-d ₆) =10.43 (1H, s), 8.20 (1H, d), 8.07 (1H, s), 7.54 (1H, d), 7.17 (1H, t), 7.01 (1H, d), 6.56 (1H, t), 6.48 (1H, d), 4.40 (2H, d), 3.24 (2H, m), 2.06 (3H, s), 1.78 (3H, m), 1.55 (6H, m), 1.10 (2H, m).

Пример 3 (соединение 103)

2-[(2-Ацетиламино-пиридин-4-илметил)-амино]-N-(3-этил-пентил)-бензамид

Амин: гидрохлорид 3-этилпентиламина, полученный в примере получения 6

Производное N-карбоксиантраниловой кислоты: Соединение 501 из примера 1

¹ H NMR (DMSO-d₆) =10.43 (1H, s), 8.32 (2H, m), 8.20 (1H, d), 8.05 (1H, s), 7.52 (1H, d), 7.17 (1H, t), 7.01 (1H, d), 6.56 (1H, t), 6.48 (1H, d), 4.41 (2H, d), 3.23 (2H, m), 1.49 (2H, m), 1.31 (5H, m), 0.85 (6H, d).

Пример 4 (соединение 104)

(4-{[2-(3-Этил-пентилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-амид оксазол-5-карбоновой кислоты

Амин: гидрохлорид 3-этилпентиламина, полученный в примере получения 6

Производное N-карбоксиантраниловой кислоты: Соединение 503, полученное в примере получения 3

¹Н NMR (DMSO-d ₆) =10.95 (1H, s), 8.63 (1H, s), 8.32 (3H, m), 8.20 (1H, s), 8.11 (1H, s), 7.54 (1H, d), 7.18 (1H, t), 7.12 (1H, d), 6.57 (1H, t), 6.50 (1H, d), 4.48 (2H, d), 3.24 (2H, m), 1.49 (2H, m), 1.29 (5H, m), 0.84 (6H, d).

Пример 5 (соединение 105) (4-{[2-(2-Циклопентил-этилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-амид фуран-2-карбоновой кислоты

Амин: 2-циклопентилэтиламин

Производное N-карбоксиантраниловой кислоты: Соединение 504, полученное в примере получения 4

LC/MS: (m/z) 433,2 (МН+); RT=6,64 мин; чистота (UV) составляет 100%.

Пример 6 (соединение 106)

(4-{[2-(4-Метил-пентилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-амид фуран-2-карбоновой кислоты

Амин: 4-метилпентиламин

Производное N-карбоксиантраниловой кислоты: Соединение 504, полученное в примере получения 4

LC/MS: (m/z) 421,2 (МН+); RT=6,51 мин; чистота (UV) составляет 100%.

Пример 7 (соединение 107)

(4-{[2-(3,3-Диметил-бутилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-амид фуран-2-карбоновой кислоты

Амин: 3,3-диметилбутиламин

Производное N-карбоксиантраниловой кислоты: Соединение 504, полученное в примере получения 4

LC/MS: (m/z) 421,1 (МН+); RT=6,44 мин; чистота (UV) составляет 100%.

Пример 8 (соединение 108)

(4-{[2-(2-Циклогекс-1-енил-этилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-амид фуран-2-карбоновой кислоты

Амин: 2-циклогекс-1-енил-этиламин

Производное N-карбоксиантраниловой кислоты: Соединение 504, полученное в примере получения 4

LC/MS: (m/z) 445,1 (МН+); RT=6,67 мин; чистота (UV) составляет 98%.

Пример 9 (соединение 109)

(4-{[2-(3-Этил-пентилкарбамоил)-фениламино]-метил}-пиридин-2-ил)-амид фуран-2-карбоновой кислоты

Амин: гидрохлорид 3-этилпентиламина, полученный в примере получения 6

Производное N-карбоксиантраниловой кислоты: Соединение 504, полученное в примере получения 4

LC/MS: (m/z) 435,1 (МН+); RT=6,81 мин; чистота (UV) составляет 100%.

Пример 10

Анализ на KDR с использованием набора HTRF KinEase -TK

Соединения, подлежащие тестированию, растворяли в DMSO при 10 мМ, хранили при -20°С и защищали от света. Максимальная концентрация DMSO в анализе in vitro составляла 0,75%. Контрольные образцы получали с той же концентрацией растворителя, как в образцах, обработанных тестируемым соединением.

В этих анализах на киназы использовали набор HTRF KinEase -TK (CisBio (#62TKOPEJ). Все компоненты в наборе HTRF KinEase -TK готовили вручную согласно описанию поставщика. Вкратце, исходный раствор соединений в DMSO (100% DMSO) предварительно разбавляли до 6% DMSO в 50 мМ буфере Hepes +0,05% BSA (Sigma Aldrich (A3294)), а затем 1 мкл переносили в 384-луночный планшет Proxyplate (Perkin Elmer (#6008289) при RT. К планшету Proxyplate с соединением добавляли субстрат для киназ (2 мкл, CisBio). Для начала реакции добавляли ферментативную смесь (5 мкл, Millipore (14-630)) с АТР (100 мкМ, Sigma Aldrich (A7699)), MgCl₂ (5 мМ; Sigma Aldrich M1028) и SEB (50 нМ, CisBio). Планшеты инкубировали в течение 15 минут при комнатной температуре. Анализ останавливали добавлением детектирующей смеси (4 мкл, CisBio) и планшеты герметично закрывали и центрифугировали в течение 1 мин при 1000 об/мин. Планшеты инкубировали в темноте в течение ночи при комнатной температуре. Планшеты считывали на планшет-ридере Envision (Perkin Elmer). Сигнал считывали при двух значениях длины волны (665 и 620 нм) при возбуждении при 340 нм согласно инструкциям производителя. Вкратце, измеряли флуоресценцию для 400 мксек между световыми импульсами после времени задержки 400 мксек. Фоновые значения, измеренные в отсутствие фермента, вычитали из всех образцов. Молярные концентрации, которые ингибировали на 50% максимальной ферментативной активности (IC₅₀ ), рассчитывали с использованием четырехпараметрической сигмоидальной кривой модели подгонки кривой доза-ответ на основе следующего уравнения:

y=((a-d)/(1+(x/c)^d))+d,

где а равно минимальному значению, d равно максимальному значению, с равно значению IC₅₀, и d равно коэффициенту наклона.

Ингибирующие активности KDR in vitro для соединений общей формулы (I) по настоящему изобретению приведены в Таблице 2.

Таблица 2:
Ингибирование KDR in vitro
Соединение	Пример	IC50 VEGFR-2(HM)
101	1	11
102	2	8
103	3	19
104	4	15
105	5	43
106	6	17
107	7	39
108	8	44
109	9	53

Пример 11

Метаболическая стабильность

Метаболическую стабильность тестируют на микросомах печени человека (In Vitro Technologies, смешанные фракции обоих полов, 20 мг/мл); субклеточной фракции, содержащей основные ферменты, метаболизирующие лекарственные средства, фазы I, включая семейство цитохромов Р450 (CYP) и флавинмонооксидаз (FMO). Кажущийся клиренс (мл/мин/кг) рассчитывают как меру элиминации тестируемого соединения из печени.

Методика: Смесь человеческих микросом для инкубации (0,5 мг микросомального белка/мл) в фосфатном буфере (рН 7,4, 100 мМ KH₂PO₄/10 мМ MgCl₂) перемешивали с NADPH (1 мМ). Эту смесь предварительно нагревали (7 мин) до 37°С, добавляли тестируемое соединение (0,5 мкМ) и смесь инкубировали в течение 30 минут. Инкубации осуществляли в двух повторных экспериментах и проводили с использованием Tecan RSP. Образцы извлекали на 0, 5, 10, 20 и 30 минуте и смешивали с метанолсодержащим внутренним стандартом для прекращения всей ферментативной активности и осаждения белков. Осуществляли отрицательный контроль без NADPH (для обнаружения неспецифического связывания белков или термонестабильности) и отрицательный контроль без микросом (для оценки стабильности соединения в отсутствие активных ферментов). Образцы анализировали посредством жидкостной хроматографии с масс-спектроскопией/масс-спектроскопии (LC-MS/MS).

Анализ данных: Наносили на график значения логарифма отношений площади пиков тестируемого соединения к внутреннему стандарту против времени инкубации. Константу скорости элиминации тестируемого соединения (к) рассчитывали из линейной части кривой (уравнение 1), а время полувыведения (t_1/2 ) рассчитывали исходя из наклона (уравнение 2):

Константа скорости (л) (мин^-1)=-наклон уравнение 1

Время полувыведения (t_1/2) (мин)=In2/k уравнение 2

Собственный клиренс (Cl_int ) рассчитывают на основании константы скорости (k) (мин^-1 ) и концентрации белка (0,5 мг/мл) (уравнение 3):

Cl_int(мл/мин/мг белка)=k/концентрация белка уравнение 3

Преобразование в кажущийся клиренс (Cl _app) осуществляли путем умножения Clint на количество микросомального белка в расчете на грамм печени (45 мг/г) и массу печени на 1 кг массы тела (20 г/кг) (уравнение 4)

Cl _app(мл/мин/кг)=C_lint×(мг микросомального белка/г печени)×(г печени/кг массы тела) уравнение 4

Интерпретация: Кажущийся собственный клиренс ниже приблизительно 10 мл/мин/кг (соответствует степени экстракции приблизительно 30%) рассматривали как низкий клиренс (высокая метаболическая стабильность). Кажущийся собственный клиренс выше приблизительно 60 мл/мин/кг (соответствует степени экстракции приблизительно 75%) рассматривали как высокий клиренс (низкая метаболическая стабильность). Приведенные ниже эталонные соединения для HLM-анализа дают следующие показатели собственного клиренса:

Варфарин (Sigma-Aldrich А 2250)-<10 мл/мин/кг (низкий клиренс) Пропранолола гидрохлорид (Sigma-Aldrich P0884)-25-35 мл/мин/кг (средний клиренс)

Мидазолам (Ultrafine Chemicals UC-429)->200 мл/мин/кг (высокий клиренс)

Показатели метаболической стабильности соединений общей формулы [1] по настоящему изобретению представлены в Таблице.

Таблица 3

Метаболическая стабильность:

Соединение	Пример	1HLM (мл/мин/кг)
101	1	135
102	2	>200
103	3	>200
104	4	120
105	5	>200
106	6	>200
107	7	>200
108	8	>200
109	9	>200