способ моделирования внутричерепной гипертензии

Формула изобретения

Способ моделирования внутричерепной гипертензии путем интрацеребровентрикулярного введения раствора препарата, отличающийся тем, что интрацеребровентрикулярно вводят 0,03-0,05 мл 1%-ного раствора феракрила.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к способам моделирования.

Известны различные способы моделирования внутричерепной гипертензии у лабораторных животных путем окклюзии сигмовидного синуса, однако данные способы обладают высокой травматичностью и приводят к незначительным диффузным изменениям нервной ткани (см. Kurokawa Y., Hashi К., Okuyama Т., Uede T. Regional ischemia in cerebral venous hypertension due to embolic occlusion of the superior sagittal sinus in the rat. Surg Neurol 1990 Dec; 34(6): 390-5).

Известен способ моделирования внутричерепной гипертензии путем интрацеребровентрикулярного введения 10 мкг нейроаминидазы (см. Grondona J.M., Perez-Martin М. , Cifuentes М., Perez J., Jimenez A.J., Perez-Figares J.M., Fernandez-Llebrez P. Ependymal denudation, aqueductal obliteration and hydrocephalus after a single injection of neuraminidase into the lateral ventricle of adult rats. J. Neuropathol Exp Neurol. 1996 Sep; 55(9):999-1008).

Однако данный способ приводит к высокой летальности лабораторных животных и не вызывает клинику сообщающейся гидроцефалии.

Наиболее близким к предложенному является способ моделирования внутричерепной гипертензии путем интрацеребровентрикулярного введения 0,05 мл 25% раствора каолина (см. Tashiro Y., Drake J.M., Chakrabortty S., Hattori T. Functional injury of cholinergic, GABAergic and dopaminergic systems in the basal ganglia of adult rat with kaolin-induced hydrocephalus. Brain Res 1997, Oct 3; 770 (1-2):45-52).

Однако известный способ моделирования приводит к асептическому воспалению эпендимы желудочков, и, следовательно, к искажению экспериментальных данных. Данный способ приводит к медленному развитию окклюзионной гидроцефалии, что отдаляет его от клиники острой внутричерепной гипертензии. Способ приводит к выраженной летальности лабораторных животных. Токсическое действие каолина на нервную ткань приводит к искажению экспериментальных данных. Известный способ не позволяет контролировать выраженность клинических и морфологических изменений у лабораторных животных.

Техническим результатом предлагаемого способа моделирования является приближение к клинике, малая травматичность, легкость реализации способа и высокая воспроизводимость результата за счет отсутствия воспалительных реакций со стороны эпендимы желудочков и возможности контролировать выраженность клинических и морфологических изменений у экспериментальных животных.

Технический результат достигается путем интрацеребровентрикулярного введения раствора препарата. Новым в достижении поставленного результата является то, что интрацеребровентрикулярно вводят 0,03-0,05 мл 1% раствора феракрила.

Введение феракрила вызывает непродолжительное нарушение ликвородинамики, что приводит к развитию острого приступа внутричерепной гипертензии. Это приводит к высокой воспроизводимости способа и приближению модели к реальным условиям клиники острого повышения внутричерепного давления.

Феракрил не обладает нейротоксическими свойствами (Sufianov А.А., Schapkin A.G., Sufianova G.Z., Raevskaya L.Yu. "Investigating of feracryl action in the intracranial experimental model in rats". EUROPEAN NEUROPSYCHOPHARMACOLOGY, Vol.10 Supplement 2, April 2000, S93 (P.6.22)) и не вызывает воспаления желудочков мозга, что приводит к снижению летальности и предотвращает искажение экспериментальных данных. Изменение объема вводимого препарата позволяет регулировать степень выраженности клинических и морфологических изменений.

Авторами опытным путем установлен оптимальный объем введения феракрила: 0,03-0,05 мл. Введение менее 0,03 мл не приводит к достижению технического результата. Введение более 0,05 мл вызывает значительное увеличение летальности животных.

Сопоставительный анализ с прототипом показывает, что предлагаемый способ отличается тем, что интрацеребровентрикулярно вводят 0,03-0,05 мл 1% раствора феракрила, что соответствует критерию "новизна".

Новая совокупность признаков позволяет приблизить модель к клинике, способ обладает высокой воспроизводимостью результатов, малой травматичностью, быстротой и легкостью реализации, позволяет контролировать выраженность клинических и морфологических изменений, что соответствует критерию "промышленная применимость".

При анализе известных способов было выявлено, что в них отсутствуют сведения о влиянии отличительных признаков заявленного способа на достижение технического результата, что соответствует критерию "изобретательский уровень".

Способ поясняется чертежами и диаграммами, где на фиг.1а показаны нормальные боковые желудочки крысы при введении красителя (казеиновая тушь), на фиг. 1б изображены боковые желудочки крысы на 3 сутки после интрацеребровентрикулярного введения 0,05 мл 1% раствора феракрила. На диаграмме 1 (фиг. 2) показана динамика клинических проявлений у крыс в первые 120 минут после интрацеребровентрикулярной инъекции 0,05 мл 1% раствора феракрила. На диаграмме 2 (фиг.3) показана динамика неврологических изменений у крыс в течении 5 суток после моделирования внутричерепной гипертензии.

Способ осуществляют следующим образом.

Под наркозом у крыс производят разрезание мягких тканей головы вдоль сагиттального шва. Надкостницу отделяют от кости и в отмеченном месте (2 мм вправо от места пересечения сагиттального и венечного швов и на 2 мм вниз) бором просверливают теменную кость. Иглу с 1% раствором феракрила вводят на глубину 3 мм. Производят введение 0,03-0,05 мл 1% раствора феракрила и извлекают иглу.

Отмечают время введения феракрила. Раны послойно ушивают.

Для проведения эксперимента берут 14 крыс обоего пола, весом 100-120 г. Первой группе животных (N=8) моделируют внутричерепную гипертензию по предлагаемому способу. Второй группе крыс (N=6) интрацеребровентрикулярно вводят 0,05 мл физиологического раствора. В течение 2 ч каждые 5 мин определяют тонус мышц, выраженность клонического компонента судорог, частоту дыхания и степень расширения зрачка.

Оценку этих параметров производят по предлагаемым шкалам:

Тонус:

0 - норма;

1 - незначительный гипертонус;

2 - умеренно выраженный гипертонус;

3 - выраженный гипертонус.

Судороги:

0 - норма;

1 - периодический мелкоамплитудный тремор или легкие поддергивания головы;

2 - тремор головы и передних конечностей;

3 - генерализованный тремор.

Зрачок:

0 - не расширен, или сужен;

1 - слегка расширен, реагирует на свет;

2 - резко расширен;

3 - мидриаз, экзофтальм.

Дыхание:

0 - норма;

1 - учащенное;

2 - частое, громкое;

3 - судорожное.

В последующие пять суток производят оценку состояния животных по предлагаемой шкале:

0 - норма;

1 - слабо выраженный гипертонус, поведение животного не изменено;

2 - тонус мышц тела повышен, способность к передвижению незначительно ограничена, гиперпатия;

3 - тонус мышц резко повышен, способность к передвижению ограничена, гиперпатия;

4 - гибель животного.

Через 120 ч наблюдения или после гибели животного извлекают головной мозг и фиксируют в формалине. Изучают поперечные срезы головного мозга, окрашенные гематоксилин-эозином.

При гистологическом исследовании мозга у животных первой группы обнаруживалось расширение желудочков, перивентрикулярный и периваскулярный отек, диффузные ишемические изменения нервной ткани.

Таким образом, предлагаемый способ моделирования внутричерепной гипертензии является приближенным к клинике, обладает высокой воспроизводимостью результатов. Модель рекомендуется для изучения изменений нервной ткани при острой внутричерепной гипертензии и изучения активности нейропротекторных и противосудорожных лекарственных препаратов.