способ оценки эффективности лечения ишемической болезни сердца
Классы МПК: | G01N33/92 с использованием жиров, например холестерина |
Автор(ы): | Канская Н.В., Федорова Н.А., Перова Н.В., Гарганеева Н.П., Кожанова А.А., Байков А.Н., Канский А.В., Похряев Е.Н. |
Патентообладатель(и): | Сибирский государственный медицинский университет, Научно-исследовательский институт кардиологии Томского научного центра СО РАМН, Томский политехнический университет |
Приоритеты: |
подача заявки:
2000-09-01 публикация патента:
10.08.2003 |
Способ относится к медицине, а именно к кардиологии. Способ обеспечивает повышение точности оценки эффективности лечения ИБС. Определяют уровень ЛП(а) путем инкубации сыворотки крови больного с раствором судана Б в течение 1 ч в темном термостате при 40oС и внесения пробы в лунку в геле агарозы с площадью основания 4
20 мм для электрофореза и последующей денситометрии. При снижении уровня ЛП(а) после их денситометрии на 50% и более по сравнению с исходным уровнем оценивают лечение ИБС как эффективное. Способ прост в использовании интерпретации полученных результатов. 13 ил.
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13

Формула изобретения
Способ оценки эффективности лечения ишемической болезни сердца путем исследования сыворотки крови до и после лечения, отличающийся тем, что определяют уровень ЛП(а) путем инкубации сыворотки крови больного с раствором судана Б в течение 1 ч в темном термостате при 40oС, и затем внесения пробы в лунку в геле агарозы с площадью основания 4
Описание изобретения к патенту
Способ относится к области медицины и может быть использован в кардиологии и терапии. Известны способы оценки эффективности лечения ИБС путем оценки уровня липопротеинов (ЛП) крови (А.Н. Климов, Н.Г. Никульчева //Липиды, липопротеиды и атеросклероз, 1995, Питерпресс, стр. 98-102) и разделения на фракции ЛП в полиакриламидном геле (Н. Н. Шацкая //Биохимические исследования в оценке состояния сердечно-сосудистой системы. В кн. Методы исследований в профпатологии, М., 1988, стр. 95-97). Описанные способы не позволяют выявить все фракции ЛП крови, включая ХМ, ЛПВП, ЛПНП, ЛПОНП и ЛП(а), а служат для разделения на фракции ХМ, ЛПВП, ЛПНП, ЛПОНП от комплекса альбумина с неэстерифицированными жирными кислотами. Описан также способ разделения на фракции ЛП путем электрофореза в геле агарозы (Лабораторные методы исследования. Под редакцией В.В. Меньшикова. - М.: Медицина, 1987, с. 248-249). Данный способ является наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату (прототипом). Однако указанный способ недостаточно точен, так как не позволяет выявить ЛП (а), кроме ЛПВП, ЛПНП, ЛПОНП и ХМ. Это связано с исследованием малого образца сыворотки крови. Концентрация ЛП (а) в крови очень низкая. В способе-прототипе лунка для внесения исследуемого образца сыворотки крови готовится в объеме металлического (стального) бруска с площадью основания 2х20 мм и высотой 10 мм, что не позволяет внести достаточно большой объем сыворотки крови для исследования. Целью предлагаемого способа является повышение его точности. Указанная цель достигается техническим решением, представляющим собой проведение дополнительной инкубации сыворотки крови с красителем суданом Б при температуре 40oС в темном термостате и исследование образца сыворотки крови, в 2 раза по объему превышающего таковой по сравнению со способом-прототипом и последующей денситометрией фракций ЛП сыворотки крови с их количественной оценкой. Новым в данном способе является дополнительная инкубация пробы сыворотки крови с суданом Б в течение часа в темном термостате при температуре 40oС и заготовка лунки в геле агарозы для внесения исследуемого образца сыворотки крови, в 2 раза по объему превышающего таковой в способе-прототипе. Лунка изготавливается с помощью стального бруска с площадью основания 4





1) приготовление раствора судана Б: 400 мг судана Б растворяют в 20 мг этиленгликоля на кипящей водяной бане в течение 50 минут, фильтруют, хранят в стеклянной посуде;
2) приготовление геля агарозы: 320 мг агарозы А фирмы "Sigma" растворяют в 20 мл воды при кипячении, затем помещают в термостат при 55oС, добавляют 20 мл раствора альбумина (1 г альбумина в 200 мл веронал-мединалового буфера, рН 8,6). 3 мл геля агарозы наносят на обезжиренное горизонтально установленное предметное стекло, помещают металлический стальной стержень-брусок 20х4 мм (высотой 10 мм), который после застывания геля убирают магнитом;
3) к 0,3 мл сыворотки крови добавляют 0,15 мл раствора судана Б, помещают на 1 час в темный термостат при 40oС, затем добавляют 0,2 мл горячего раствора геля агарозы, смешивают, подогревают при 55oС и подогретым вносят в желобок геля агарозы;
4) предметное стекло помещают в камеру для электрофореза слоем агарозы вниз, электрофорез проводят в течение часа в холодильной камере при температуре 4oС при напряжении 100 В и силе тока 40-45 мА;
5) электрофореграмму фиксируют в 5%-ном растворе уксусной кислоты в течение одного часа, затем высушивают между листами фильтровальной бумаги, непрерывно смачивая 96%-ным этиловым спиртом;
6) денситометрию проводят на микрофотометре МФ-4. Количественную оценку фракций при денситометрии проводят следующим образом: определяют площадь каждого пика на хроматограмме по формуле S= h




ХС общий - 8,1 ммоль/л
Триацилглицериды - 1,8 ммоль/л
ХС ЛПВП - 0,9 ммоль/л,
Результаты электрофоретического исследования ЛП крови по способу-прототипу представлены на фиг.9, а по предлагаемому способу - на фиг.10. Фракция ЛП(а) присутствует. Диагноз при поступлении: ишемическая болезнь сердца, стенокардия напряжения, ФК III-II. После проведенного лечения результаты лабораторного исследования:
ХС общий - 6,0 ммоль/л
Триацилглицериды - 1,4 ммоль/л
ХС ЛПВП-1,3 ммоль/л. Результаты электрофоретического исследования ЛП крови по предлагаемому способу представлены на фиг.11. Фракция ЛП(а) отсутствует. Диагноз при выписке: ишемическая болезнь, стенокардия напряжения, ФК-II. Заключение: лечение эффективное. Пример 2. Больной А, 47 лет, история болезни 41, поступил в отделение ИБС и атеросклероза НИИ кардиологии г. Томска с жалобами на боли в области сердца, иррадиирующие под лопатку. На ЭКГ значительных изменений не выявлено. ВЭМ прекращена при нагрузке 75 Вт по причине возникшей боли за грудиной. На ЭКГ появилась косовосходящая депрессия сегмента ST в отведениях V4-V6. АД 130/90 мм рт.ст., пульс в покое 65 уд. в мин. Боли купируются нитроглицерином. Результаты лабораторного исследования:
ХС общий - 9,4 ммоль/л
Триацилглицериды - 1,5 ммоль/л
ХС ЛПВП- 1,0 ммоль/л. Результаты электрофореза ЛП крови до лечения по предлагаемому способу представлены на фиг. 12. Результаты денснтометрии ЛП: ЛПНП - 58%, ЛПОНП - 21%, ЛПВП - 16%, ЛП(а) - 5%. Диагноз при поступлении: ИБС, стенокардия напряжения, ФК-III. После проведенного лечения результаты лабораторного исследования:
ХС общий - 6,3 ммоль/л
Триацилглицериды - 1,4 ммоль/л
ХС ЛПВП - 1,2 ммоль/л. Результаты электрофоретического исследования ЛП крови по предлагаемому способу после лечения представлены на фиг.13. Результаты денситомегрии ЛП: ЛПНП - 41%, ЛПОНП - 27%, ЛПВП - 30%, ЛП(а)-2%. Диагноз при выписке: ИБС, стенокардия напряжения, ФК-II. Снижение уровня ЛП(а) на 60% по сравнению с исходным свидетельствовало об эффективности лечения ИБС. Итак, при применении способа-прототипа оценка эффективности терапии ИБС проводилась по клинической картине заболевания и уровню липидов крови, что свидетельствовало о недостаточной точности способа (см. фиг.7 и 8). Оценка эффективности терапии по способу-прототипу не превышала 60%. У пациентов II группы (21 человек) ЛП(а) выявлены не были, поэтому оценка эффективности терапии в этой подгруппе пациентов проводилась по клинико-лабораторным данным общепринятым методом. У остальных 16 пациентов фракция ЛП(а) выявлена и точность определения эффективности лечения ИБС составила у них 100%, т.к. после лечения фракция ЛП(а) либо не выявлялась, либо значительно снижалась. Следовательно, после комплексной терапии ИБС с помощью диеты, дозированной физической нагрузки, назначения препаратов, содержащих никотиновую кислоту с витаминами, применения нитратов пролонгированного действия, физиотерапевтического лечения ЛП(а) в сыворотке крови либо значительно снижались, либо достигали исходного значения и не выявлялись при электрофоретическом исследовании ЛП крови. Таким образом, использование предлагаемого способа позволило выявить у больных ИБС с выраженной ГЛП наличие ЛП(а) во фракции ЛП до лечения заболевания и полное отсутствие этой фракции либо снижение ее интенсивности на 50 и более процентов после лечения ИБС, что свидетельствовало о высокой эффективности проведенной терапии. Способ применен у 57 пациентов. Применение предлагаемого способа определения эффективности лечения ИБС в отличие от способа-прототипа позволило выявить дополнительную фракцию ЛП(а), оценить ее снижение после проведенной курсовой терапии заболевания и повысить точность способа. С помощью способа-прототипа такие результаты получить не удалось, т.к. фракцию ЛП(а) выявить было невозможно ни до, ни после лечения ИБС. Ложноположительных случаев оценки эффективности лечения ИБС не наблюдалось. При этом предлагаемый способ прост в использовании и интерпретации полученных результатов и может быть внедрен в клиническую практику.
Класс G01N33/92 с использованием жиров, например холестерина