способ определения антибиотикочувствительности возбудителя чумы

Классы МПК:C12Q1/04 установление присутствия и(или) вида микроорганизма; использование селективных сред для испытания антибиотиков или бактерицидов; составы, содержащие химический индикатор для этих целей
Автор(ы):, ,
Патентообладатель(и):Щедрин Виталий Иванович,
Лямкин Геннадий Иванович,
Базиков Игорь Александрович
Приоритеты:
подача заявки:
1991-05-06
публикация патента:

Использование: медицина, микробиология. Сущность изобретения: опытных белых мышей обрабатывают испытуемым антибиотиком в лечебной дозе. Контрольным мышам антибиотик не вводят. Затем всем мышам вводят подкожно в область спины 0,5 1 мл суспензии исследуемого нативного материала в физиологическом растворе, предварительно смешанной с желтком куриного яйца в объемном соотношении 1 1,4, с 25 мг поливинилпирролидона и с 7 мг циклофосфана. С места введения готовят мазки отпечатки, фиксируют их и подвергают иммунофлуоресцентному анализу. Антибиотикочувствительность определяют по отсутствию возбудителя чумы в мазках-отпечатках опытных мышей при обнаружении его у контрольных. Способ позволяет проводить определение антибиотикочувствительности при концентрации возбудителя чумы 102-101 микр. кл/мл. 1 табл.
Рисунок 1

Формула изобретения

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЧУМЫ, включающий исследование нативного материала, изготовление и фиксацию мазков-отпечатков с последующим их иммунофлуоресцентным анализом, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, исследование нативного материала осуществляют путем введения опытным белым мышам, обработанным испытуемым антибиотиком в лечебной дозе, и контрольным мышам подкожно в область спины 0,5 1,0 мл суспензии исследуемого материала в физиологическом растворе, причем суспензию предварительно смешивают с желтком куриного яйца в объемном соотношении 1 1,4 с 25 мг поливинилпирролидона и с 7 мг циклофосфана, мазки-отпечатки готовят с места введения, а антибиотикочувствительность определяют по отсутствию возбудителя чумы в мазках-отпечатках опытных мышей при обнаружении его у контрольных.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии.

Известен дискодиффузионный способ определения антибиотикочувствительности возбудителя чумы, который не позволяет получить результаты при исследовании проб с небольшой концентрацией возбудителя и обсемененных посторонней микрофлорой.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению является иммунофлуоресцентный способ экспрессного определения чувствительности к антибиотикам и химио-препаратaм возбудителей опасных инфекционных заболеваний, включающий посев первичного исследуемого материала на пластинки твердой питательной среды, содержащие (опытные) и не содержащие (контрольные) испытуемые антибиотики с последующим термостатированием и изготовлением препаратов-отпечатков для иммунофлуоресцентного исследования.

Недостатками прототипа являются необходимость для его проведения высокой концентрации микробных клеток в исследуемой пробе (для возбудителя чумы 107 микробных клеток в 1 мл); возможность несовпадения данных по чувствительности микробов к антибиотикам с клиническими наблюдениями, поскольку исследования проводят ин витро; невозможность определения антибиотикочувствительности возбудителей генетически измененных или покрытых оболочкой (инкапсулированных), поскольку они могут не давать роста на искусственных питательных средах.

Целью предлагаемого изобретения является повышение чувствительности способа.

Сущность изобретения состоит в том, что исследование нативного материала осуществляют путем введения опытным белым мышам, обработанным испытуемым антибиотикам в лечебной дозе, и контрольным мышам подкожно в область спины 0,5-1 мл суспензии исследуемого материала в физиологическом растворе, причем суспензию предварительно смешивают с желтком куриного яйца в объемном соотношении 1:1,4 с 25 мг поливинилпирролидона и с 7 мг циклофосфана, мазки-отпечатки готовят с места введения, а антибиотикочувствительность определяют по отсутствию возбудителя чумы в мазках-отпечатках опытных мышей при обнаружении его у контрольных.

Отличительные признаки заключаются в том, что исследование нативного материала осуществляют путем введения опытным белым мышам, обработанным испытуемым антибиотикам в лечебной дозе, и контрольным мышам подкожно в область спины 0,5-1 мл суспензии исследуемого материала в физиологическом растворе, причем суспензию предварительно смешивают с желтком куриного яйца в объемном соотношении 1: 1,4 с 25 мг поливинилпирролидона и с 7 мг циклофосфана, мазки-отпечатки готовят с места введения, а антибиотикочувствительность определяют по отсутствию возбудителя чумы в мазках-отпечатках опытных мышей при обнаружении его у контрольных.

Изобретение осуществляется следующим образом.

Испытуемый антибиотик вводят по схеме лечения больных бубонной формой чумы 3 опытным белым мышам в лечебной дозе, рассчитанной для этих животных. Трем контрольным мышам антибиотик не вводят. Исследуемый материал в количестве 0,5-1 мл смешивают с желтком куриного яйца в соотношении 1:1,4. К полученной смеси добавляют поливинилпирролидон и циклофосфан из расчета 25 и 7 мг соответственно на одно животное. Полученную суспензию набирают в шприц и вводят подкожно в область спины 6 указанным белым мышам, начиная с контрольных.

По одному животному из контрольной и опытных групп вскрывают через 8,24,48 ч после введения исследуемого материала. Грызунов умерщвляют одним из известных способов и прикрепляют к вскрывочной доске спиной кверху. Отсепаровывают кожу спины и кожный лоскут отбрасывают на голову грызуна. При этом легко обнаруживают место введения, мазки-отпечатки которого фиксируют в хлороформе в течение 10-20 мин и окрашивают по Граму и чумной люминесцирующей сывороткой.

Обнаружение возбудителя чумы в какой-либо из указанных сроков у контрольных животных при отсутствии его у опытных свидетельствует об эффективности испытуемого антибиотика. При неэффективности антибиотика возбудитель чумы обнаруживают как в контроле, так и в опыте.

Результаты приведены в таблице.

При определении чувствительности возбудителя чумы в дозе от 101 до 109 м.кл./мл к каждому из испытанных антибиотиков установлено, что для известного способа пороговая концентрация составляет 107 м.кл./мл, предлагаемым же методом эффективность антибиотиков можно установить при всех указанных концентрациях (101-109), при этом сроки выдачи результатов могут колебаться от 8 до 48 ч (в зависимости от дозы возбудителя в 1 мл).

Использование предлагаемого способа, в частности введение исследуемого материала биопробным мышам вместе с желтком куриного яйца, поливинилпирролидоном и циклофосфаном вызывает задержку, размножение и накопление микробных клеток чумы в первые двое суток только на месте введения, что облегчает поиск возбудителя. При этом создаются оптимальные условия для размножения возбудителя чумы и интенсивного синтеза видоспецифического антигена-фракции I, резко повышается чувствительность биологического метода. Так, иммунофлуоресцентным методом чумной микроб при его концентрации 109-107 в 1 мл может быть обнаружен через 6-8 ч, а при концентрации 106-102 и 101 соответственно через 24 и 48 ч. Такая высокая чувствительность помимо того, что дает возможность проводить индикацию, позволяет определять антибиотикочувствительность возбудителя чумы в живом организме (ин виво). При этом при больших концентрациях (109-107) результат можно получить уже через 6-8 ч (экспрессное определение). Применение предлагаемого способа позволяет проводить экспрессное определение антибиотикочувствительности возбудителя чумы при его минимальной (102-101 м.кл./мл) концентрации в исследуемом нативном материале; исключает несовпадение данных по чувствительности микробов чумы к антибиотикам с клиническими наблюдениями, поскольку исследования проводят ин виво; дает возможность определения антибиотикочувствительности возбудителей генетически измененных или покрытых оболочкой (инкапсулированных), которые могут не расти на искусственных питательных средах и поэтому их чувствительность к антибиотикам не может быть определена в опытах ин витро.

Класс C12Q1/04 установление присутствия и(или) вида микроорганизма; использование селективных сред для испытания антибиотиков или бактерицидов; составы, содержащие химический индикатор для этих целей

способ определения чувствительности патогенных бактерий к комплексным антибактериальным препаратам -  патент 2529711 (27.09.2014)
бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба -  патент 2529364 (27.09.2014)
способ оценки выживаемости бифидо- и лактобактерий в желудочно-кишечном тракте экспериментальных животных -  патент 2528867 (20.09.2014)
способ и набор для детекции микроорганизмов -  патент 2527897 (10.09.2014)
способ видовой и штаммовой идентификации бифидобактерий филотипа bifidobacterium longum -  патент 2527069 (27.08.2014)
способ идентификации лактобацилл -  патент 2526576 (27.08.2014)
способ видовой дифференциации жизнеспособных родококков, иммобилизованных в гелевом носителе -  патент 2525934 (20.08.2014)
способ выявления внутрибольничных штаммов микроорганизмов -  патент 2525695 (20.08.2014)
питательная среда плотная для культивирования возбудителя листериоза -  патент 2525637 (20.08.2014)
способы разделения, характеристики и(или) идентификации микроорганизмов с помощью масс-спектрометрии -  патент 2519650 (20.06.2014)