Микроорганизмы: ..Vibrio – C12R 1/63

Изобретение относится к области микробиологии и биотехнологии. Предварительно отбирают материал, подлежащий исследованию, - чистую культуру палочковидных, грамотрицательных, ферментирующих глюкозу, оксидазоположительных или оксидазоотрицательных бактерий. Проводят посев исследуемой суточной культуры бактерий на поверхность неселективного питательного агара (ГРМ-агар) с 1% хлорида натрия. Размещают на засеянной поверхности бумажный диск, содержащий вибриостатическое вещество никлозамид (2,5-dichloro-4-nitrosalicylanilide) в количестве 10 мкг или 16 мкг на диск. Инкубируют посевы в аэробных условиях при 35°С в течение 24 ч. Определяют принадлежность бактерий к роду Vibrio по наличию вокруг диска зоны подавления роста бактерий. Изобретение позволяет повысить диагностическую чувствительность способа идентификации вибрионов. 2 табл., 4 пр.

Изобретение раскрывает способ получения основного протективного антигена холерного вибриона В-субъединицы холерного токсина. Способ включает в себя осаждение белковой фракции из фильтрата бульонной культуры рекомбинантного штамма не 01 серогруппы Vibrio cholerae KM93 (ГК «Микроб»). Из осажденной белковой фракции выделяют В-субъединицу и очищают ее с помощью трех ступеней колоночной гель-проникающей хроматографии на геле TSK HW-60. Очищенный препарат В-субъединицы применяют для получения антитоксических сывороток, высокоспецифических иммуноглобулинов и диагностических тест-систем, а также в качестве компонента, добавляемого к вакцинным препаратам. Использование изобретения позволит повысить выход высокоочищенного нативного иммуногенного препарата В-субъединицы холерного токсина. 2 ил., 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и предназначено для производства химических вакцин против возбудителя холеры и получения очищенного препарата O1 антигена Огава для приготовления диагностической сыворотки. Авирулентный штамм Vibrio cholerae биовара эльтор серовара Огава - продуцент основного протективного O1 антигена серовара Огава получен в модельном эксперименте из вирулентного природного штамма V.cholerae M 569 Огава путем спонтанной потери профага СТХ при длительном пребывании возбудителя холеры в стерильной речной воде. Штамм депонирован в ГК патогенных бактерий «Микроб» под номером КМ 262. Особенностью штамма является отсутствие генов коровой области профага СТХ . Штамм авирулентен для кроликов сосунков, агглютинируется холерными сыворотками O1 и Огава в разведениях выше диагностического титра. Использование изобретения позволяет получить вакцину на основе O1 протективного антигена серовара Огава, обеспечивающую формирование антибактериального иммунитета при холере.

Авирулентный штамм Vibrio cholerae KM 263 биовара эльтор серовара Инаба - продуцент протективного O1 антигена получен в модельном эксперименте из вирулентного природного штамма Vibrio cholerae M569 Инаба путем спонтанной потери профага СТХ при длительном пребывании возбудителя холеры в стерильной речной воде. Штамм характеризуется высоким уровнем продукции основного протективного O1 антигена серовара Инаба. Изобретение предназначено для производства химических вакцин против возбудителя холеры, обеспечивающих формирование антибактериального иммунитета при холере, и получения очищенного препарата O1 антигена серовара Инаба для приготовления диагностической сыворотки.

Изобретение относится к биотехнологии и касается оптимизации питательной среды для глубинного культивирования холерного вибриона. Питательная среда содержит ферментативный гидролизат фибрина - отхода производства иммуноглобулина антирабического, получаемый в результате гидролиза препаратом нативной поджелудочной железы КРС, Na₂HPO₄×12H₂ O, NaCl и дистиллированную воду. Изобретение позволяет расширить ассортимент питательных сред и снизить загрязнение окружающей среды. 3 табл.

Способ по изобретению предусматривает выделение ДНК исследуемого штамма, проведение полимеразной цепной реакции (ПНР) с использованием олигонуклеотидных праймеров, представленных в формуле изобретения, с последующим определением нуклеотадной последовательности амплифицированных фрагментов генов rjg, gmhD и orf2 и сравнением их с аналогичными генами штаммов холерных вибрионов других серогрупп. Определение генетического родства штаммов холерных вибрионов различного происхождения проводят по количеству единичных нуклеотидных замен в генах rjg, gmhD и orf2, фланкирующих кластер генов биосинтеза O-антигена, в сравнении с аналогичными генами холерных вибрионов других серогрупп, представленных в базе данных GenBank. Использование изобретения позволяет быстро, эффективно и надежно устанавливать родственные связи штаммов холерных вибрионов различного происхождения с другими холерными вибрионами, в том числе и с вирулентными и эпидемически значимыми вибрионами O1 и O139 серогрупп. 2 табл.

Сущность изобретения заключается в том, что атоксигенные штаммы холерных вибрионов O1 и O139 серогрупп дифференцируют от токсигенных штаммов по наличию гидролазной активности. В качестве субстрата используют глицерин, который вводят в расплавленный агар Мартена из расчета 2,5/100 мл среды с pH 7,8±0,1 и индикатор Нильский голубой сульфат 1,5 мг/100 мл среды, которую разливают в чаши Петри. Подросшие в термостате в течение 4-х часов исследуемые бульонные культуры наносят в объеме 20 мкл на сектора сконструированного агара и проводят в течение 36-48 часов инкубирование посевов при 37°С. По результатам гидролазной активности штаммов проводят их дифференциацию: если на среде выросшие колонии имеют вид нежных полупрозрачных пленок, сливающихся с цветом среды, то исследуемый штамм холерного вибриона является токсигенным и эпидемически значимым. Если колонии представляют собой плотный желтоватый или белесоватый налет, то выросший штамм нетоксигенный гемолитический и не эпидемически значимый. 3 табл.

Способ детекции и определения биотипа, серогруппы и токсигенности возбудителя холеры с использованием метода мультилокусной полимеразной цепной реакции (ПЦР) включает: выделение ДНК из исследуемого объекта, постановку ПЦР в один этап с использованием трех пар синтезированных праймеров к участку wbeN гена wbf кластера, кодирующего синтез 01-антигена, к участку ctxA гена, кодирующего синтез субъединицы А холерного энтеротоксина и к участку специфичного для холерных вибрионов биовара эльтор hlyA гена, кодирующего синтез гемолизина; отжиг праймеров при температуре 95°-60°C в течение 13,5 мин при числе циклов амплификации 35; проведение гель-электрофореза; анализ результатов ПЦР на электрофореграмме и оценкой результатов детектирования и определения искомых характеристик холерного вибриона по наличию или отсутствию специфических полос амплифицированной ДНК. Используемый для осуществления способа набор состоит из комплекта реагентов для выделения ДНК из материала, комплекта для амплификации, содержащего праймеры, специфичные к wbeN гену, hlyA гену и ctxA гену холерных вибрионов, положительный и отрицательный контрольные образцы, комплект для анализа продуктов. Способ с использованием набора обеспечивает быстрое, простое, точное выявление возбудителя холеры и определение трех основных его свойств. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 5 ил., 3 табл.

Предлагаемое изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при проведении эколого-токсических исследований, при мониторинге водных экосистем. Штамм Vibrio fischeri ВКПМ В-9579, обладающий высокой чувствительностью к действию токсических веществ разнообразной химической природы, может быть использован для тестирования токсичности донных отложений. Изобретение позволяет повысить чувствительность тест-культур к действию токсических веществ самой разной химической природы. 4 табл.

Сущность способа заключается в том, что в качестве субстрата, к которому прикрепляются холерные вибрионы, используют II группу крови человека, последнюю дефибринируют, трижды отмывают, центрифугируя при 3000 об/мин в течение 15 минут с 0,9% NaCl pH 7,2. Полученные эритроциты разводят физиологическим раствором в соотношении 1:8, затем ставят реакцию на стекле, нанося по одной капле 1 млрд взвеси агаровой культуры холерных вибрионов и одну каплю 8% эритроцитов. Мазки помещают на 20 минут во влажную камеру и проводят инкубирование последних при 37°С с последующим приготовлением для микроскопических исследований. По результатам реакции осуществляют дифференциацию: если средний показатель адгезии - СПА>1,5, то исследуемый штамм холерного вибриона токсигенен - эпидемически значимый, а если СПА<1,5, то эритроциты лизированы, имеют красный цвет и штамм атоксигенен, гемолитичен и не имеет эпидемической значимости. Изобретение может быть использовано в лабораторной диагностике для экспрессного исследования штаммов холерных вибрионов Vibrio eltor и Vibrio cholerae О139 (Бенгал) для обнаружения эпидемически значимых, токсигенных и атоксигенных, гемолитичных штаммов. 3 табл.

Штамм бактерий Vibrio metschnikovii KM-185 выделен из воды при исследовании на вибриофлору. Штамм обладает чувствительностью к специфическому фагу ФК-85, выделенному из штамма бактерий Vibrio metschnikovii 15818, и обеспечивает в качестве штамма-ментора его размножение. Титр фага равен 10⁸-10 ⁹ частиц/мл. 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения холерных химических вакцин, применяемых для профилактики холеры, вызванной холерным вибрионом как классического, так и эльтор биовара, а также для создания иммунодиагностической тест-системы, позволяющей выявлять токсигенные клоны Vibrio cholerae. Штамм бактерий Vibrio cholerae, депонированный в Государственной коллекции патогенных бактерий ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб» под номером КМ234, продуцирует холерный токсин II типа. Штамм V.cholerae обладает высокой продукцией холерного токсина II типа, формирующего антитоксический иммунитет при холере.

Изобретение относится к биотехнологии. Получают клеточную массу холерного вибриона, удаляют с поверхности клеток белки орбитальным вращением бактериальной массы со скоростью 2500 об/мин в течение 2 минут на вортексе. Фракционируют клеточную массу низкоскоростным центрифугированием при 3-4 тыс. об/мин. Надосадок фракционируют высокоскоростным центрифугированием при 18-20 тыс. об/мин. Избирательно экстрагируют осадок для получения супернатанта, содержащего очищенные белки ТКПА и OmpU, раствором 125 мМ этаноламина (рН 10,5) при 4°С на шейкере. Выделяют белки токсин-корегулируемых пилей адгезии и OmpU из супернатанта. 1 н. и 2 з.п. ф-лы, 3 ил.

Изобретение описывает новые ослабленные живые штаммы холерного вибриона, предназначенные для производства оральных противохолерных вакцин и представленные в лиофилизированных формах с длительным сроком хранения. Штаммы имеют два основных свойства, присущие живым противохолерным вакцинам, - это хорошая переносимость пациентами и достигается за счет мутаций, известных из уровня техники, и повышенная экологическая безопасность, обусловленная отсутствием в генотипе штаммов ДНК фага VGJф и нулевыми мутациями гена mshA либо другими спонтанными мутациями, выражающимися в отсутствии фимбрии MSHA IV типа на поверхности бактерий. Изобретение учитывает тот факт, что VGJф является филаментозным фагом, способным к рекомбинации с СТХф и распространению генов холерных токсинов, и аналогично рекомбинантам VGJф::СТХф использует фимбрии MSHA в качестве реципиентов. Вакцины, лишенные фимбрии MSHA, защищены от приобретения СТХф от рекомбинантного гибрида VGJф::СТХф. Вакцины, лишенные VGJф, защищены от распространения фага СТХф в процессе, опосредованном VGJф. Использование вакцин по изобретению обеспечивает высокую экологическую безопасность и устойчивый иммунитет. 7 з.п. ф-лы, 4 ил., 4 табл.

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к лабораторной диагностике холеродизентериеподобных заболеваний, вызываемых парагемолитическими вибрионами гастроэнтеритов. Сущность изобретения заключается в том, что в качестве тест-штаммов используют Vibrio parahaemolyticus KM 97 и Vibrio parahaemolyticus KM 184, которые каждый в отдельности засевают в бульон Мартена с 3% NaCl и помещают в термостат на 4 часа, затем 0,3 мл каждой из выросших на тест-штаммах взвеси смешивают с 4,5 мл расплавленного и охлажденного до 45°С 0,7% агара Мартена с 3% NaCl и выливают вторым слоем на пластинки застывшего 1,5% агара Мартена с 3% NaCI в чаши Петри. После застывания агар подсушивают и в центр каждой чашки наносят каплю исследуемой пробы, затем посевы выдерживают при температуре 37°С в течение 24-48 часов и по выращенным фагам осуществляют их дифференциацию: присутствие лизина на тест-штаммах КМ 97 и КМ 184 соответствует бактериофагам парагемолитических вибрионов III, IV, V морфогрупп, а лизис только на КМ 184 подтверждает его принадлежность к филаментозным фагам I морфогруппы. Использование изобретения позволит повысить эффективность лабораторной диагностики (первичную) за счет простоты и надежности способа. 2 табл.

Изобретение относится к лабораторным исследованиям, касается способа дифференциации аллергических реакций на ППД-туберкулин для млекопитающих, инфицированных бактериями из рода Corynebacterium, и может быть использовано для дифференциальной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота. Для осуществления способа патологический материал от животного с положительной реакцией на ППД-туберкулин для млекопитающих обрабатывают 0,5% раствором препарата «Лесептик» в течение 30-45 минут, засевают на плотную яичную среду. Затем посевы выращивают при температурном оптимуме в течение трех дней с последующей окраской по Цилю-Нильсену и анализом морфологических признаков, по которым проводят идентификацию и дифференциацию коринебактерий. Способ по изобретению прост в осуществлении и эффективен при исследованиях для выяснения причин сенсибилизации животных к туберкулину. 1 табл.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для характеристики патогенности холерных вибрионов. Сущность изобретения заключается в том, что адгезию холерных вибрионов производят в присутствии ингибитора, в качестве которого используют углеводы, последние взаимодействуют с пектиновыми рецепторами холерных вибрионов и тормозят их адгезивные свойства. Для этого готовят 1% раствор углевода в 1 мл 1 млрд. взвеси холерных вибрионов, которые инкубируют при температуре 37°С в течение 30-40 минут во влажной камере с последующим приготовлением микроскопических препаратов. Степень игибирующей способности сахаров на процесс адгезии исследуемой культуры холерных вибрионов определяют по шкале показателей ингибиции адгезии (ПИА): слабый показатель ингибиции в пределах 0,36-0,9, средний показатель 0,176-0,35 и высокий 0,01-0,175. Использование способа позволяет повысить биотехнологические возможности определения. 4 табл.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в лабораторной диагностике холеры. Сущность изобретения заключается в том, что в качестве тест-штаммов используют фагочувствительные штаммы Vibrio cholerae eltor KM-199 и Vibrio cholerae O139 KM-152, а дифференциацию проводят в два этапа, по первому этапу в качестве индикаторного штамма используют Vibrio cholerae eltor КМ-199, инкубируют его с исследуемой культурой в течение 20-24 часов. Затем полученную смесь микроорганизмов при температуре 55-57°С прогревают 40-60 минут и высевают на газоны индикаторного штамма Vibrio cholerae eltor KM-199, который предварительно засевают в слое 0,7% агара на пластинку 1,5% агара Мартена. Через сутки выращивания при 37°С проводят регистрацию фаголизиса, при этом второй этап дифференциации осуществляют, используя фаг, полученный из лизогенного штамма испытуемой культуры путем его нанесения на индикаторный штамм Vibrio cholerae O139 КМ-152, с помощью которого выявляют только филаментозные фаги, проводя прямое фаготипирование. Использование способа позволяет с высокой точностью проводить фаготипирование с получением дополнительных характеристик холерных вибрионов, выделяемых из клинического материала. 1 табл.