Получение стероидов – C12P 33/00

Изобретение относится к биотехнологии. Иммобилизованный биокатализатор для микробной биотрансформации стероидных соединений содержит клетки микроорганизма, обладающего 1,2-дегидрогеназной активностью, включенные в матрицу криогеля поливинилового спирта. В качестве обладающих 1,2-дегидрогеназной активностью клеток иммобилизованный биокатализатор содержит биомассу актинобактерий Pimelobacter simplex. Соотношение компонентов в биокатализаторе составляет (мас.%): клетки актинобактерий Pimelobacter simplex - 1-5 (на сухое вещество), поливиниловый спирт - 7-20, водная фаза - до 100. Изобретение обеспечивает осуществление стерео/региоселективной биотрансформации соответствующих стероидных субстратов при повышенной их исходной концентрации, получение целевого продукта с высоким выходом, а также возможность осуществлять многократное, не менее 30 циклов, использование биокатализатора без потери активности. 1 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения андроста-4,9(11)-диен-3,17-диона из фитостерина. Проводят микробиологическое окислительное элиминирование боковой цепи при атоме С¹⁷ с образованием 9 -гидроксиандрост-4-ен-3,17-диона. Отделяют биомассу. Экстрагируют 9 -гидроксиандрост-4-ен-3,17-дион из осветленной культуральной жидкости апротонным органическим растворителем, выбранным из ароматических углеводородов или хлорорганических углеводородов. Затем проводят реакцию дегидратации 9 -гидроксигруппы 9 -гидроксиандрост-4-ен-3,17-диона в полученном экстракте. В качестве дегидратирующего агента используют минеральную кислоту, содержащую воду и выбранную из группы, включающей ортофосфорную, пирофосфорную и хлорную кислоты. Минеральную кислоту используют в количестве от 1 до 10 моль на 1 моль 9 -гидроксиандрост-4-ен-3,17-диона. В процессе реакции дегидратации проводят удаление избыточной воды либо в присутствии эффективного количества пирофосфорной кислоты, либо азеотропной отгонкой. Изобретение позволяет интенсифицировать процесс дегидратации прииспользовании меньшего количества минеральной кислоты и исключить образование побочного продукта. 10 з.п. ф-лы, 1 табл., 1 пр.

КРИСТАЛЛИЧЕСКИЕ ФОРМЫ КОРТЕКСОЛОН-17 -ПРОПИОНАТА И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложены кристаллическая форма I и III кортексолон-17 -пропионата. Кристаллическая форма I характеризуется ДРЛ, как представлено на фиг.1, и/или ДСК, и/или ИК. Кристаллическая форма III характеризуется ДРЛ, и/или ДСК, и/или ИК. Также предложены способы получения кристаллической формы I и III кортексолон-17 -пропионата. Способ получения кристаллической формы I включают кристаллизацию кортексолон-17 -пропионата из трет-бутилметилового эфира. Способ получения кристаллической формы III кортексолон-17 -пропионата включает кристаллизацию кортексолон-17 -пропионата из растворителя, представляющего собой смесь дихлорметан/н-гексан или смесь ацетон/н-гексан, или смесь этанол/вода. Указанные кристаллические формы в сочетании с по меньшей мере одним физиологически приемлемым наполнителем используют в фармацевтических композициях для лечения патологий мочеполовой системы, эндокринной системы, кожи и/или придатков кожи, в частности, для лечения акне, себорейного дерматита, андрогенетической алопеции, гирсутизма, доброкачественной гиперплазии простаты, форм рака простаты, мужской контрацепции, синдрома поликистоза яичника, синдрома преждевременной половой зрелости и регулирования агрессивного или аберрантного сексуального поведения. 4 н. и 17 з.п. ф-лы, 30 фиг., 3 табл., 9 пр.

Изобретение относится к высокоэффективному микробиологическому способу получения 21-ацетоксипрегна-1,4,9(11),16-тетраен-3,20-диона из 21-ацетоксипрегна-4,9(11),16-триен-3,20-диона. Реакция 1,2-дегидрирования 21-ацетоксипрегна-4,9(11),16-триен-3,20-диона осуществляется с помощью клеток Nocardioides simplex BKM Ac-2033Д при температуре 25°C в среде буферного раствора с pH 5,0-5,5, содержащей метил- -циклодекстрин, полярный растворитель, смешивающийся с водой, и экзогенный акцептор электронов. Использование растущей культуры или осажденных клеток позволяет осуществлять трансформацию при высокой нагрузке субстрата (10-20 г/л) при полном селективном превращении субстрата в 1,2-дегидрированный продукт и высоких скоростях процесса. 6 з.п. ф-лы, 7 прим., 2 табл.

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1,2-ДЕГИДРИРОВАННЫХ ПРОИЗВОДНЫХ 4-3-КЕТОСТЕРОИДОВ РЯДА АНДРОСТАНА В ВОДНО-ОРГАНИЧЕСКИХ СРЕДАХ

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ получения 1,2-дегидрированных производных ⁴-3-кетостероидов ряда андростана. Проводят реакцию 1,2-дегидрирования с помощью клеток микроорганизма, обладающего высокой 3-кетостероид-1-дегидрогеназной активностью, в среде, содержащей от 8 до 40 об.% смешивающегося с водой апротонного растворителя. Изобретение позволяет осуществлять трансформацию ⁴-3-кетостероидов при нагрузках субстратов до 100 г/л и обеспечивает 85-98%-ную селективность образования 1,2-дегидрированных ⁴-3-кетостероидов при высоких скоростях процесса. 3 з.п. ф-лы, 1 табл., 5 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Заявлено применение бактериальных штаммов вида Amycolatopsis mediterranei для микробиологического превращения 9 ,10 -стероидов общей формулы (I) в их соответствующие 11 -гидроксил аналоги. Также предложен новый бактериальный штаммам Amycolatopsis mediterranei DSM 17416 для микробиологического превращения 9 ,10 -стероидов общей формулы (I) в их соответствующие 11 -гидроксил аналоги. Предложен способ превращения 9 ,10 -стероидов в их соответствующие 11 -гидроксил производные. Способ включает контактирование соединений формулы (I) в ферментирующей среде с бактерией вида Amycolatopsis mediterranei. Также заявлены 11 -гидрокси-9 ,10 -стероидные соединения формулы (V). 4 н. и 16 з.п. ф-лы, 3 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ энантиоселективного ферментативного восстановления оксостероидных соединений общей формулы I и формулы II, представленных в описании изобретения. Оксостероидное соединение в реакционной смеси в концентрации 50 г/л восстанавливают гидроксистероидной дегидрогеназой в присутствии кофактора NADH или NADPH. Окисленный кофактор NAD или NADP, образуемый гидроксистероидной дегидрогеназой, непрерывно восстанавливается через окисление вторичного спирта или через окисление С₄-С₆-циклоалканола. Для окисления вторичного спирта или циклоалканола используется дополнительная оксидоредуктаза/спиртовая дегидрогеназа. Также предложен способ энантиоселективного ферментативного окисления гидроксистероидных соединений общей формулы I или гидроксистероидных соединений, являющихся производными желчной кислоты. Гидроксистероидное соединение в реакционной смеси в концентрации 50 г/л окисляют гидроксистероидной дегидрогеназой в присутствии кофактора NAD или NADP. Восстановленный кофактор NADH или NADPH, образуемый гидроксистероидной дегидрогеназой, непрерывно регенерируется через восстановление кетосоединения или через восстановление С₄-С₆-циклоалканона. Для восстановления кетосоединения или циклоалканона используется дополнительная оксидоредуктаза/спиртовая дегидрогеназа. Изобретения позволяют окислять/восстанавливать исходные гидроксистероидные/оксостероидные соединения с выходом более 90% и с высоким TTN кофакторов 10³. 2 н. и 16 з.п. ф-лы.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 14 -ГИДРОКСИПРОИЗВОДНЫХ 4-3,17-ДИКЕТО-АНДРОСТЕНОВ

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ 14 -гидроксилирования ⁴-3,17-дикетоандростенов с помощью нового штамма гриба Curvularia lunata ВКПМ F-981. Мицелий гриба Curvularia lunata ВКПМ F-981 суспендируют в водной среде, не содержащей компонентов, необходимых для роста гриба. Трансформируемый ⁴-3,17-дикетоандростен вносят в водную среду либо в виде микрокристаллической суспензии, либо в виде водорастворимого комплекса с химически модифицированным -циклодекстрином. Выход 14 -гидроксипроизводых андростендиона (АД) составляет 40-70%. Изобретение позволяет ускорить накопления 14 -гидроксистероидов и упростить метод их выделения. 1 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу 11 -гидроксилирования ⁴-3-кетостероидов с помощью биомассы мицелия штамма Curvularia lunata ВКПМ F-988. Для трансформации используют отмытый от питательной среды мицелий штамма Curvularia lunata ВКПМ F-988, возраст которого не превышает 30 ч. Мицелий берут в количестве, при котором отношение биомассы к трансформируемому стероиду составляет 1.5-2.5:1. Трансформацию ведут в буферном растворе, а стероидный субстрат вносят в виде суспензии микрокристаллов, либо в виде водорастворимого комплекса с метил- -циклодекстрином, отношение стероида к которому составляет 1:1-0,6:1 (моль/моль). 11 -Гидроксипроизводные получают с выходом 50-80%. Предлагаемое изобретение позволяет повысить селективность процесса 11 -гидроксилирования, концентрацию трансформируемого стероидного субстрата до 20 г/л и сократить период реакции до 24-50 час. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

Настоящее изобретение относится к генетически модифицированным дрожжам, автономно продуцирующим холестерин исходя из простого источника углерода. Данные дрожжи экспрессируют ферменты 7-дегидрохолестерин редуктазу и 3 -гидроксистерин 24-редуктазу, а фермент стерол 24-С-метилтрансфераза у них инактивирован. Продукция холестерина у них равна или превышает 20% от всех продуцируемых стеринов. Кроме того, предлагается способ получения холестерина и применение штамма дрожжей по изобретению для получения не меченого и меченого холестерина. Данное изобретение позволяет получать безопасный с санитарной точки зрения холестерин в больших количествах. 5 н. и 7 з.п. ф-лы, 13 ил., 1 табл.

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 7 -ГИДРОКСИАНДРОСТЕНОВ

Изобретение относится к биотехнологии. Способ селективного получения 7 -гидроксиандростенов с помощью грибного мицелия, включает трансформацию ⁵ -андростенов с помощью отделенного и отмытого от среды мицелия Curvularia lunata ВКПМ F-981. Причем субстрат используют в виде микрокристаллов, либо в виде комплекса с циклодекстринами. Изобретение позволяет получить выход целевых 7-гидроксипродуктов - 60-90%. 1 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в фармацевтической промышленности. Штамм Rhodococcus erythropolis ВКПМ Ас-1740, полученный методом селекции актинобактерии, способен вводить 9 -гидроксигруппу в стероиды ряда андростана, прегнана, эстрана и при этом не продуцирует 1,2-дегидрогеназу. Применение изобретения позволяет обеспечить высокую 9 -гидроксилазную активность как на традиционных средах, так и на средах с высоким содержанием ДМФА. 2 табл.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 6 -МЕТИЛГИДРОКОРТИЗОНА ИЛИ ЕГО 11 -АЛКАНОИЛОКСИПРОИЗВОДНЫХ (ВАРИАНТЫ), СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 6 -МЕТИЛПРЕДНИЗОЛОНА ИЛИ ЕГО 11 -АЛКАНОИЛОКСИПРОИЗВОДНЫХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПОЛУЧЕННОГО 6 -МЕТИЛГИДРОКОРТИЗОНА ИЛИ ЕГО 11 -АЛКАНОИЛОКСИПРОИЗВОДНЫХ

Изобретение относится к улучшенным способам получения 6 -метилгидрокортизона или его 11 -алканоилоксипроизводных и 6 -метилпреднизолона или его 11 -алканоилоксипроизводных с использованием полученного 6 -метилгидрокортизона или его 11 -алканоилоксипроизводных. Получают 6 -метилгидрокортизон и его 11 -алканоилоксипроизводные способом, включающим предварительную защиту 11 ,- 17 - и 21-гидроксильных групп гидрокортизона или его 21-ацилоксипроизводного поэтапно с образованием 17 ,20;20,21-бисметилендиоксипроизводного (БМДО-защита диоксиацетоновой боковой цепи) и последующей этерификацией 11 -гидроксильной группы, метиленированием С₆ положения, восстановлением 6-метиленовой группы в 6 -метильную. Реакцией 1,2-дегидрирования 6 -метилгидрокортизона и его 11 -алканоилоксипроизводных путем микробиологической трансформации с помощью микробных клеток получают 6 -метилпреднизолон или его 11 -алканоилоксипроизводные. 2 н. и 15 з.п. ф-лы.

СПОСОБ ПРОДУЦИРОВАНИЯ 19-НОР-10 -КАРБОНОВЫХ КИСЛОТ ПУТЕМ ГРИБКОВОГО ОКИСЛЕНИЯ 6-ЗАМЕЩЕННЫХ- ⁶-ПРЕГНАНОВ

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для синтеза фармакологически активных 19-норстероидов. Используют гриб рода Nigrospora, способный окислять углерод в 19-ом положении 6-замещенного- ⁶-прегнана. Соединения 6-замещенных- ⁶-прегнанов окисляют в биотрансформационной среде, содержащей от 0,1 мл/л до 4 мл/л неионного детергента и от 5 г/л до 60 г/л источника углерода. Способ позволяет получить 19-нор-10 -карбоновые кислоты с высоким выходом и высокой степенью чистоты. 7 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к микробиологическому получению андроста-1,4-диен-3,17-диона (АДД). Способ основан на способности штамма бактерий Mycobacterium neoaurum ВКПМ AC-1656 селективно отщеплять боковую цепь указанных стеринов и накапливать АДД в присутствии сорбентов продуктов трансформации. В качестве сорбентов используют синтетические полимерные смолы, получаемые сополимеризацией дивинилбензола и этилстирола. Сорбенты добавляют в культуральную жидкость в конце лаг-фазы, АДД образуется в зависимости от строения боковой цепи трансформируемых субстратов с выходом 66-76%. Изобретение может быть использовано в микробиологической, химической и фармацевтической промышленности. 1 з.п. ф-лы.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 3-КЕТО-7-АЛКОКСИКАРБОНИЛЗАМЕЩЕННОГО 4,5-СТЕРОИДА, СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОМЕЖУТОЧНЫХ СОЕДИНЕНИЙ, ПРОМЕЖУТОЧНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ

Описывается способ получения 3-кето-7-алкоксикарбонил замещенного, 4,5-стероида формулы I

где

Изобретение относится к генной инженерии. Клонирование нуклеотидной последовательности в дрожжах позволяет получить белок, обладающий дельта-5,7 стерин, дельта-7 редуктазной активностью. Восстановление стерина в положении С-7 может быть использовано для получения прегненолона и гидрокортизона, а использование соответствующего гибридизационного зонда - для выявления недостаточности в организме человека дельта-5,7 стерин, дельта-7 редуктазы, например его врожденной недостаточности, а также у пациентов, страдающих разнообразными заболеваниями, например с клиническим проявлением синдрома RSH/SLO. 21 н. и 10 з.п. ф-лы, 30 ил., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения эргостерола и его промежуточных продуктов основан на использовании рекомбинантных дрожжей, способных синтезировать увеличенные количества эргостерола, и плазмид для трансформации дрожжей. Предпочтительным видом дрожжей является вид S. cerevisiae. В качестве плазмид используются вектора экспрессии YEpH2, pADL-SAT1 и YDpUHK3, в каждый из которых встроена кассета экспрессии, содержащая средний ADH1-промотор и терминатор TRP. Образующиеся в результате сверхэкспрессии продукты могут быть использованы для различных биотрансформаций. 9 н. и 7 з.п. ф-лы, 4 ил., 5 табл.