Ферменты, например лигазы (6.), проферменты, композиции их, способы получения, активирования, ингибирования, разделения или очистки ферментов: ..действующие на сложноэфирные связи (3.1) – C12N 9/16

Изобретение относится к области молекулярной биологии, биохимии и генной инженерии. Предложены нуклеиновая кислота, характеризующаяся нуклеотидной последовательностью, кодирующей белок, который состоит из аминокислотной последовательности с делецией, заменой или добавлением одной или более аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 7 и обладает активностью фосфатазы фосфатидной кислоты, соответствующий белок, рекомбинантный вектор, клетка для экспрессии белка и способ получения композиции жирной кислоты. Изобретение может быть использовано для получения полиненасыщенных жирных кислот в пищевой промышленности. 8 н. и 1 з.п. ф-лы, 6 табл., 7 ил., 8 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен ферментный биокатализатор в виде наноразмерных частиц для детоксификации фосфорорганических соединений in vivo. Биокатализатор представляет собой нековалентные полиэлектролитные комплексы. Данные комплексы состоят из полигистидин-содержащего полипептида со свойствами органофосфатгидролазы и блок-сополимера полиэтиленгликоля и полиглутаминовой кислоты в зарядовом соотношении фермент:блок-сополимер в диапазоне от 2:1 до 1:5. Изобретение обеспечивает существенное упрощение технологии получения биокатализатора, увеличение его каталитической эффективности, снижение вводимой дозы, уменьшение иммунотоксичного эффекта, а также повышение активности в реакциях гидролиза пестицидов и отравляющих веществ. 3 з.п. ф-лы, 6 пр.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в пищевой промышленности. Из Mortierella alpina получен новый ген, который кодирует фосфатазу фосфатидной кислоты (ЕС 3.1.3.4), определена открытая рамка считывания и выведена аминокислотная последовательность фермента, названного MaPAP1. Описано получение рекомбинантного белка путем трансформации клеток-хозяев, где при использовании в этом качестве дрожжевых клеток или клеток липидпродуцирующих грибков обеспечивается не только увеличение общего содержания жирных кислот (ЖК), но и изменение жирнокислотного состава клетки, выражающееся, в частности, в повышении отношения количества арахидоновой кислоты к общему количеству ЖК. 8 н.п. ф-лы, 7 табл., 2 ил., 8 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой штамм бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-11270 - продуцент фермента фосфолипазы C. При ферментации полученного штамма в 3 л лабораторном ферментере в минимальной среде при температуре 30°C, активность фермента в культуральной жидкости достигает уровня 210 ЕД/мл. Изобретение позволяет получать фосфолипазу C с высокой степенью эффективности. 3 ил., 5 пр.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения плацентарной щелочной фосфатазы. Способ получения плацентарной щелочной фосфатазы заключается в том, что гомогенизируют отмытую от крови плаценту человека, экстрагируют гомогенат в растворе хлорида калия, центрифугируют полученный экстракт, прогревают, центрифугируют, полученный надосадок после первичного прогревания экстракта повторно прогревают в присутствии сульфата кадмия с последующим быстрым охлаждением колбы, добавляют сульфат аммония, отделяют осадок центрифугированием, надосадочную жидкость подвергают гидрофобной хроматографии на колонке, а ферментсодержащий элюат подвергают очистке препаративным электрофорезом в полиакриламидном геле, окрашивают гель, содержащий фермент, и под визуальным контролем, вырезают окрашенные фракции щелочной фосфатазы. Вышеописанный способ позволяет упростить технологический процесс получения и очистки фермента плацентарной щелочной фосфатазы с существенным увеличением выхода целевого продукта. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Описан пергидролазный фермент, который способен гидролизовать n-нитрофенилкапроат (pNC6) или n-нитрофенилоктаноат (pNC8) в присутствии перекиси, где указанный фермент включает одну из следующих комбинаций аминокислотных замен: Ala в положении 154 и Met в положении 194; Gly в положении 154 и Val в положении 194; или Gly в положении 12 и Met в положении 194, где указанные положения аминокислот позиционно эквивалентны положениям 12, 154 и 194 в последовательности SEQ ID NO: 2 пергидролазы М. smegmatis и где указанный фермент продуцирует перкислоту. Раскрыты: выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая указанный пергидролазный фермент; рекомбинантная нуклеиновая кислота, экспрессирующая пергидролазный фермент, включающая промотор и указанную выделенную нуклеиновую кислоту; вектор экспрессии, включающий указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту; клетка-хозяин, содержащая рекомбинантную нуклеиновую кислоту и продуцирующая пергидролазный фермент. Описаны композиции для мойки, отбеливания и дезинфекции, включающие эффективное количество пергидролазного фермента и источник перекиси водорода. Предложены способы мойки, отбеливания и дезинфекции, включающие поддержание субстрата в присутствии указанных композиций для мойки, отбеливания или дезинфекции указанного субстрата, соответственно. Кроме того, предложено применение указанного выделенного пергидролазного фермента для гидролиза ацильного эфирного субстрата, содержащего до 8 атомов углерода, в присутствии перекиси водорода. Изобретение позволяет осуществлять реакцию гидролиза n-нитрофенилкапроат (pNC6) или n-нитрофенилоктаноат (pNC8) в присутствии перекиси водорода с образованием перкислот. 13 н. и 6 з.п. ф-лы, 5 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Представлен слитый пептид для нейтрализации или разрушения фосфорорганических соединений, содержащий сигнальный пептид ТАТ3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 5, представленной в описании, функционально связанный с последовательностью органофосфатгидролазы SEQ ID NO: 18, классифицируемую как белок ЕС 3.1.8. Описаны выделенный полинуклеотид, кодирующий указанный слитый белок; вектор, содержащий указанный полинуклеотид; и прокариотическая клетка-хозяин, содержащая указанный вектор и экспрессирующая указанный слитый белок. Предложен способ получения фермента, разрушающего фосфорорганические соединения, включающий экспрессию указанного полинуклеотида в прокариотической клетке-хозяине, и продукцию указанного фермента. Изобретение позволяет повысить экспрессию органофосфатгидролазы в клетке-хозяине. 5 н. и 8 з.п. ф-лы, 1 табл., 9 ил., 2 пр.

Изобретение относится к области биохимии и молекулярной биологии и касается способа анализа процесса Арг-Х протеолиза в положительно заряженных фракциях белков супрамолекулярных структур в растущей популяции Escherichia coli. Представленный способ включает следующие стадии: консервация клеток в присутствии забуференного 80-90% глицерина, снятие клеточных оболочек 3% тритоном Х-100, экстракция возрастающими концентрациями солей: 0,14 М, 0,35 М; 2 М NaCl, 6 М гуанидин гидрохлоридом с 0,1% -меркаптоэтанолом, выделение из вышеперечисленных фракций положительно заряженных белков с помощью ионообменной хроматографии с амберлитом ИРЦ-50 в прерывистом градиенте гуанидин гидрохлорида: 6%, 8,9%, 10,6%, 13% на 0,1 М калий-фосфатном буфере рН 6,8 и определение в них сайтов чувствительности к Арг-Х протеолизу. Представленное изобретение может быть использовано при анализе молекулярно-генетических механизмов формирования структуры клетки прокариот и роли белковых компонентов в их организации, а также при изучении особенностей ремоделирования генома, что является необходимым для раскрытия путей регулирования механизмов воздействия макро- и микроорганизмов. 9 ил., 1 пр.

Изобретение относится к ферментативным способам удаления фосфолипидов из растительных масел. Способ обессмоливания масляной композиции предусматривает контактирование масляной композиции, содержащей фосфолипиды, одновременно с одним или несколькими ферментами фосфолипазы A (PLA) в количестве приблизительно 2 ч./млн активного фермента или менее и одним или несколькими ферментами фосфолипазы С (PLC) в количестве приблизительно 30 ч./млн активного фермента или менее. Взаимодействие ферментов с фосфолипидами происходит при рН приблизительно 3-7, при температуре приблизительно 40-80°С, продолжительность реакции составляет менее одного часа. Продукты реакции с фосфолипидами отделяют от масляной композиции. Предложен также способ обессмоливания масла. Полученная обессмоленная масляная композиция имеет содержание фосфолипида, измеренное в частях на миллион фосфора, приблизительно 20 ч./млн или менее. 2 н. и 21 з.п. ф-лы, 7 ил., 7 табл., 38 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложены варианты мутантных рекомбинантных фитаз PhyA-Cf из бактерий Citrobacter freundii: 1) вариант, содержащий аминокислотную замену D144N или D144R, или D144Q, или D144K; 2) вариант, содержащий аминокислотную замену V226A или V226G; 3) вариант, содержащий аминокислотную замену G343D или G343E, или G343K, или G343R, или G343N; 4) вариант, содержащий аминокислотные замены в положении D 144 на N, R, Q или K, и в положении V226 на А или G; 5) вариант, содержащий аминокислотные замены в положении D 144 на N, R, Q или K, и в положении G343 на D, Е, K, R или N; 6) вариант, содержащий аминокислотные замены в положении V226 на А или G, и в положении G343 на D, Е, K, R или N; 7) вариант, содержащий аминокислотные замены в положении D 144 на N, R, Q или K, и в положении V226 на А или G, и в положении G343 на D, Е, K, R или N. Представлены фрагменты ДНК, кодирующие указанные рекомбинанатные фитазы. Описаны штаммы-продуценты рекомбинанатных фитаз Pichia pastoris PhyA-CfDVG и Pichia pastoris PhyA-CfDV, депонированные во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) под номерами ВКПМ Y-3495 и ВКПМ Y-3494 соответственно. Изобретение позволяет получить фитазы, обладающие термостабильными свойствами. 11 н. и 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 10 пр.

Изобретение относится к порошкообразному препарату липазы, предназначенному для трансэтерификации. Препарат представляет собой порошкообразный материал, содержащий липазу, выделенную из Rhizopus oryzae, и/или Rhizopus delemar, и соевый порошок, имеющий содержание жира, составляющее 5 масс.% или более. В указанном препарате 90 масс.% или более частиц имеют диаметр, составляющий 1-100 мкм. Порошкообразный препарат липазы получают распылительной сушкой водного раствора, содержащего растворенные или диспергированные липазу и соевый порошок. Перед сушкой осуществляют регулирование рН водного раствора добавлением 0,5 N раствора NaOH до значений 7,5-8,5. Полученный порошкообразный препарат обладает высокой активностью липазы 209-504%. 3 н. и 3 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Способ получения дрожжевого экстракта включает обработку дрожжевых клеток Saccharomyces cerevisiae очищенной фосфолипазой А и отделение дрожжевого экстракта от обработанных дрожжевых клеток. При этом во время обработки фосфолипазой дрожжевые клетки подвергают гидролизу белка. Обработку фосфолипазой проводят при рН 2-10, а количество фосфолипазы составляет от 0,001 до 1 мг ферментного белка/г сухого вещества. Способ позволяет получить целевой продукт с высоким выходом, содержанием белка и степенью гидролиза. Выход дрожжевого экстракта составляет до 68,8%, выход белка до 67,4%, а степень гидролиза до 71,8%. 5 з.п. ф-лы, 3 табл., 3 пр.

Настоящее изобретение относится к фитазе, полученной из бактерии Buttiauxella sp., и ее модифицированным формам. Данные ферменты обладают улучшенными характеристиками по сравнению с ферментом дикого типа, выбранными из высокой термической стабильности, активности в широком диапазоне рН, высокой специфической активности, широкой субстратной специфичности и протеолитической стабильности. Кроме того, предлагаются нуклеиновые кислоты, кодирующие данные ферменты, вектор, содержащий данные нуклеиновые кислоты, клетка-хозяин, несущая вектор, и способ получения предложенных фитазных ферментов из клеток-хозяев. Настоящее изобретение также относится к пищевому продукту или корму для животных и к способу получения пищевого продукта или корма для животных, который включает в себя добавление фитазного фермента по настоящему изобретению к одному или нескольким ингредиентам приготовляемого продукта или корма. Использование фитазных ферментов по настоящему изобретению в качестве добавок к кормам для животных позволяет улучшить доступность органического фосфора и снизить загрязнение фосфатом окружающей среды. 11 н. и 17 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Описан полипептид, имеющий фитазную активность, выбранный из: полипептида, с аминокислотной последовательностью, приведенной в описании изобретения, фрагмента этого полипептида, и полипептида, проявляющего по меньшей мере 90% идентичности с указанным полипептидом. Также описан полинуклеотид, кодирующий приведенный полипептид. Представлены экспрессионная кассета, экспрессионный вектор, содержащие описанные полинуклеотиды. Представлен организм-хозяин, продуцирующий описанный полипептид. Кроме того, была получена кормовая добавка и корм для животных, содержащие указанные полипептид, организм-хозяин или его метаболиты. Предложено применение обозначенного полипептида для изготовления кормовой добавки или корма для животных и для гидролиза миоинозитгексакисфосфата до неорганического монофосфата, до миоинозита с более низкой степенью фосфорилирования и до свободного миоинозита. Изобретение позволяет получить неорганический монофосфат, миоинозит с более низкой степенью фосфорилирования или свободный миоинозит из сложного соединения миоинозитгексакисфосфата и разнообразить рацион домашних животных. 12 н. и 2 з.п. ф-лы, 11 ил., 9 табл.

Настоящее изобретение относится к способу получения (мет)акрилатов N-гидрокси-алкилированных амидов, в котором циклические N-гидроксиалкилированные амиды (С):

где Z¹ означает незамещенный или монозамещенный азот (N-R³); R¹ и R ², в каждом случае независимо друг от друга, означают алкилен с 2-20 атомами углерода, циклоалкилен с 5-12 атомами углерода, арилен с 6-12 атомами углерода; R³ означает водород, алкил с 1-18 атомами углерода, алкенил с 2-18 атомами углерода, арил с 6-12 атомами углерода или циклоалкил с 5-12 атомами углерода; этерифицируют метакриловой кислотой или переэтерифицируют, по меньшей мере, одним эфиром (мет)акриловой кислоты (Д) в присутствии, по меньшей мере, одного гетерогенного катализатора, выбранного из группы, состоящей из неорганических солей (Со), имеющих показатель рКв не выше 7,0 и не ниже 1,0, а ее растворимость в реакционной среде при 25°С не более 1 г/л, и ферментов (Ф), выбранных из группы, содержащей эстеразы (Е.С.3.1. -.-), липазы (Е.С.3.1.1.3), гликозилазы (Е.С.3.2. -.-) и протеазы (Е.С.3.4. -.-), причем гетерогенный катализатор отделяют от реакционной смеси фильтрацией, электрофильтрацией, абсорбцией, центрифугированием или декантацией. 5 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению протеолитических фракций из прокариотических клеток, и может быть использовано при анализе молекулярно-генетических механизмов формирования структуры клетки прокариот и роли белковых компонентов в их организации, что необходимо для получения дополнительной информации в разработках и построении компьютерных моделей организации генных и эпигенных сетей управления. Клетки Escherichia coli консервируют в присутствии забуференного 80-90% глицерина, затем обрабатывают 3% тритоном Х-100, с целью снятия клеточной оболочки, далее полученные цитоплазматические белки экстрагируют возрастающими концентрациями солей: 0,14 М, 0,35 М; 2 М NaCl, 6 М гуанидин гидрохлоридом с 0,1% -меркаптоэтанолом, проводят аффинную хроматографию на сефарозе 4В с иммобилизованным ингибитором трипсина и оценивают протеолитическую активность. Данное изобретение позволяет получить фракцию из клеток прокариот. 3 табл., 4 ил.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложена композиция, включающая комбинацию по меньшей мере двух фитаз, для гидролиза фитиновой кислоты (миоинозитола гексакисфосфата) до неорганических монофосфатов, до миоинозитола фосфата с меньшей степенью фосфорилирования и до свободного миоинозитола. Данные композиции применяются для изготовления кормовой добавки или корма для животных. Также предложен способ гидролиза фитиновый кислоты с использованием комбинации фитаз. Композиции по изобретению катализируют быстрый и полный гидролиз фитиновой кислоты в широком диапазоне рН. Таким образом, увеличивается доступность фосфора фитиновой кислоты и улучшается перевариваемость кормов для животных. 4 н. и 17 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой липолитический фермента, который получен из одного из Streptomyces. Такой липолитический фермент имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID No:4, или аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную ей. Изобретение относится также к применению липолитического фермента в способе получения лизогликолипида, лизофосфолипида, в способе рафинирования масел, в способах обработки фосфолипида, в биоконверсии полярных липидов, в получении пищевых продуктов. Изобретение позволяет получить новый фермент, обладающий гидролизующей гликолипид активностью. 21 н. и 25 з.п. ф-лы, 17 ил, 4 табл.

Анализируемую пробу помещают на пористую подложку, входящую в состав индикаторных плоских элементов, и после инкубации в присутствии фермента, субстрата и индикатора регистрируют цветовой переход анализируемой пробы и контрольного образца в течение 240±1 с видеоизмерительными средствами для выбираемого наиболее значимого показателя цветности. Проводят расчет процента угнетения ферментативной активности с последующим определением по калибровочному графику концентрации веществ антихолинэстеразного действия. Это позволяет повысить производительность и точность получения результатов, снизить вероятность субъективной ошибки при регистрации аналитического эффекта и уменьшить погрешность выполнения измерений веществ антихолинэстеразного действия в растворах проб. 4 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и может найти применение в производстве медицинских препаратов - рибонуклеазы панкреатической, дезоксирибонуклеазы панкреатической, трипсина, а также холестеролэстеразы. Способ предусматривает измельчение поджелудочной железы крупного рогатого скота, ее гомогенизацию. Полученный гомогенат экстрагируют охлажденным этиловым спиртом при постоянном перемешивании. Центрифугируют. Проводят повторную экстракцию серной кислотой, содержащей сульфат магния, при постоянном перемешивании. Экстракт, содержащий целевые ферменты, отделяют от осадка центрифугированием. Балластные белки осаждают сульфатом аммония при 30-35%-ном насыщении и удаляют центрифугированием из супернатанта. Холестеролэстеразу осаждают сульфатом аммония при 45-50% насыщении экстракта, трипсин осаждают при 60-65% насыщении, дезоксирибонуклеазу (ДНК-аза) осаждают при 80-85% насыщении. Полученный при осаждении ДНК-азы супернатант, содержащий рибонуклеазу, подвергают ультрафильтрации и осаждению сернокислым аммонием при 95-98% насыщении с последующим диализом и хроматографической очисткой на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой. Изобретение позволяет получать четыре фермента из поджелудочной железы в рамках единой технологической схемы, увеличить выход рибонуклеазы панкреатической, увеличить ее удельную активность. 4 з.п. ф-лы, 8 табл., 6 ил.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к кристаллическим структурам фосфодиэстеразы 5 (PDE5) и комплексов "РDЕ5/лиганд PDE5" и к их применениям для идентификации лигандов PDE5, включая соединения-ингибиторы PDE5. Настоящее изобретение также относится к способам идентификации указанных PDE5-ингибирующих соединений. Заявленное изобретение позволяет получить новый кристалл. 11 н. и 13 з.п. ф-лы, 5 ил., 8 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в медицине и фармацевтике. Получен полипептид, обладающий биологической активностью гистидин-протеин-фосфатазы, а также кодирующий его полинуклеотид. На основе полипептида получен фармацевтический препарат, применяемый при патологических состояниях, связанных с нарушением функции гистидин-протеин-фосфатазы. Также получены антитела, специфичные к участкам указанного полипептида. Применение изобретения позволяет изучать процесс N-фосфолирования, диагностировать патологии клеточной регуляции и роста клеток, а также регулировать патологические состояния, связанные с нарушением функции гистидин-протеин-фосфатазы. 7 н. и 4 з.п. ф-лы, 8 ил., 3 табл.

Изобретение относится к области генной инженерии и биотехнологии и может быть использовано в медицине. Представлены полипептид нового семейства фосфодиэстераз и кодирующий его полинуклеотид. Разработаны способы выявления партнеров специфического связывания указанных полипептида и полинуклеотида, включающие стадии их контактирования с соединением, обнаружения связывания и выявления соединения как партнера специфического связывания. Сконструирована экспрессионная конструкция, которая используется в способе получения полипептида нового семейства фосфодиэстераз для получения клетки-продуцента. К полипептиду получены моноклональные и поликлональные антитела. Описан антисмысловой полинуклеотид для регулирования экспрессии полипептида нового семейства фосфодиэстераз. Применение изобретения обеспечит дополнительные фармакологические подходы к лечению состояний, связанных с нарушением путей циклических нуклеотидов. 13 н. и 14 з.п. ф-лы, 3 табл.