Ферменты, например лигазы (6.), проферменты, композиции их, способы получения, активирования, ингибирования, разделения или очистки ферментов: ..переносящие фосфорсодержащие группы, например киназы (2.7) – C12N 9/12

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в медицине, в частности в онкологии. Предложен способ создания библиотеки рекомбинантных белков, представленных мутантными по src-петле и RT-петле формами домена SH3 киназы Fyn, с помощью которого получена библиотека фагового дисплея, содержащая более 1 млрд мутантных производных природной последовательности SH3-домена данного фермента. В результате скрининга полученной библиотеки на наличие связывающих интересующий лиганд рекомбинантных белков получен белок, характеризующийся высокой афинностью связывания с доменом В фибронектина (ED-B). На основе нового белка сконструированы слитые белки, а также химические производные, которые, наряду со связывающим белком по изобретению, содержат фармацевтически и/или диагностически активные компоненты. Предлагаются различные варианты применения нового связывающего белка и его производных в качестве диагностических и лекарственных средств, в частности предназначенных для диагностики и лечения раковых заболеваний. 17 н. и 11 з.п.ф-лы, 1 табл., 19 ил., 6 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способам in vitro определения стадии или тяжести заболевания раком у больного или контролирования эффекта терапии, назначаемой больному раком, и может быть использовано в медицине. Способ определения прогноза развития заболевания у больного раком предусматривает оценку уровня экспрессии гена холинкиназы альфа в образце раковой ткани, выделенном у больного, и сравнение полученной величины с величиной, соответствующей одному или более образцам нормальной нераковой ткани. По повышенным уровням экспрессии гена холинкиназы альфа дифференцируют больных с худшим прогнозом развития заболевания. Способ in vitro мониторинга эффекта противораковой терапии осуществляют путем оценки уровня экспрессии гена холинкиназы альфа в образце раковой ткани, выделенном у больного, которому вводится противоопухолевый агент, и сравнения полученной величины с величиной, соответствующей одному или более образцам нормальной нераковой ткани. При этом эффективная терапия снижает уровни экспрессии гена холинкиназы альфа или вызывает реверсирование эффектов высокой экспрессии указанного гена. Изобретение позволяет эффективно определять прогноз развития заболевания у больного раком или проводить мониторинг эффекта противораковой терапии у пациента. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 27 ил., 3 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается рекомбинантной плазмидной ДНК, содержащаей последовательность гена зрелой стафилокиназы Staphylococcus aureus с заменами кодонов К74, Е75 и R77 на триплеты, кодирующие Ala, штамма Escherichia coli MZ09 и способа получения рекомбинантного белка, содержащего последовательность гена зрелой стафилокиназы с заменами кодонов К74, Е75 и R77 на триплеты, кодирующие Ala. Сущность изобретения включает рекомбинантную плазмидную ДНК, кодирующую последовательность гена зрелого белка стафилокиназы из Staphylococcus aureus с заменами кодонов К74, Е75 и R77 на триплеты, кодирующие Ala, имеющая нуклеотидную последовательность, приведенную на фиг.1. Изобретение также включает штамм Esherichia coli MZ09, продуцент рекомбинантной стафилокиназы, с последовательностью, приведенной на фиг.1, а также способ ее получения. Преимущество изобретения заключается в получении белка стафилокиназы, обладающего высокой фибринолитической активностью, с выходом рекомбинантного белка до 20% от общего количества. 3 н.п. ф-лы, 2 ил.

Изобретение относится к биотехнологии. Описана фармацевтическая композиция, обладающая тимидинкиназной активностью, содержащая в качестве активного начала выделенный фермент растительную тимидинкиназу или полинуклеотид, кодирующий ее. Раскрыт способ сенсибилизации клетки к пролекарству. Предложен способ фосфорилирования нуклеозидного аналога-монофосфата. Раскрыт способ ингибирования патогенного агента в организме теплокровного животного. Описан способ контроля или модификации роста растения. Предложено средство, включающее нуклеозидный аналог и тимидинкиназу, или ген, кодирующий указанную полученную из растения тимидинкиназу, или вектор, включающий указанный ген, кодирующий указанную полученную из растения тимидинкиназу, в виде комбинации для одновременного, раздельного или последовательного введения при лечении рака. Описаны новые тимидинкиназы, полученные из сосны или резушки Таля. Данное изобретение позволяет получить новые растительные тимидинкиназы, полезные для превращения нуклеозидных аналогов в токсичные вещества и полезные для превращения нуклеозидных аналогов в монофосфаты и монофосфатов нуклеозидных аналогов в соответствующие дифосфаты. 11 н. и 22 з.п. ф-лы, 9 табл., 2 ил.

Изобретение относится к биотехнологии. Описаны выделенные молекулы нуклеиновых кислот Corynebacterium glutamicum, которые кодируют полипептиды, обладающие активностью сахароза-специфического компонента II ABC. Изобретение относится также к рекомбинантным экспрессирующим векторам, содержащим описанные молекулы нуклеиновых кислот. Раскрыт способ получения клетки-хозяина, содержащей описанные экспрессирующие векторы. Данное изобретение касается также способа получения описанного полипептида при помощи культивирования указанной клетки-хозяина. Раскрыт способ диагностики Corynebacterium glutamicum у пациента, включающий обнаружение описанных молекул нуклеиновых кислот. Изобретение позволяет расширить ассортимент молекул нуклеиновых кислот, кодирующих белки системы фосфоенолпируват-сахар-фосфотрансферазы. 23 н. и 4 з.п. ф-лы, 4 табл.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложены: способ амплификации ДНК, способ клонирования второй кДНК и обратной транскрипции ДНК. Каждый из способов отличается тем, что используют термостабильную ДНК-полимеразу, которая кодируется SEQ ID NO:7, происходит из Anaerocellum thermophilum или рекомбинантного штамма E.coli, трансформированного вектором, содержащим SEQ ID NO:7, ДНК-полимераза катализирует матрично-направленную полимеризацию ДНК, обладает 5'-3'-полимеразной активностью и обратно-транскриптазной активностью и не обладает 3'-5'-экзонуклеазной активностью в присутствии ионов магния и отсутствия ионов марганца. ДНК-полимераза сохраняет, по крайней мере, 90% своей активности после инкубации в течение 30 минут при 80°С в отсутствие стабилизирующих детергентов и обладает кажущейся молекулярной массой между приблизительно 96 кДа и приблизительно 100 кДа. Магний-зависимая обратно-транскриптазная активность ДНК-полимеразы составляет более чем 30% от ДНК-полимеразной активности, тогда как марганец - зависимая обратно-транскриптазная активность указанного полипептида составляет более чем 60% от ДНК-полимеразной активности. Использование ДНК-полимеразы обеспечивает увеличение точности транскрибирования матричной РНК при высоких температурах. 3 н. и 4 з.п. ф-лы, 5 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в медицине. Предложены новые мутантные формы мультисубстратной дезоксирибонуклеозидкиназы Drosophila melanogaster (Dm-dNK) с измененными по сравнению с ферментом дикого типа кинетическими свойствами, экспрессия которых в клетке обеспечивает возможность снижения летальной для клетки дозы (LD₁₀₀ ) по меньшей мере одного используемого в качестве пролекарства нуклеозидного аналога, выбранного из группы: AZT, ara-A, ara-C, ddC, ddA и 2 CdA. Описаны кодирующие варианты Dm-dNK нуклеотидные последовательности; раскрыты включающие их векторные конструкции, способ получения мутантных форм фермента и применение новых белков и полинуклеотидов в составе фармкомпозиций. Использование настоящего изобретения позволяет повысить эффективность и избирательность действия целого ряда известных цитотоксических и противовирусных препаратов. 6 с. и 1 з.п.ф-лы, 2 ил., 2 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к новым NOS-вариантам или мутантам, которые содержат структурные модификации в сайте Akt-зависимого фосфорилирования. Модифицированные NOS-белки или пептиды, а в частности человеческие белки или пептиды eNOS, имеющие замену аминокислотного остатка, соответствующего S/T в мотиве консенсус-последовательности RXRXXS/T полипептида NOS дикого типа, и кодирующие их молекулы нуклеиновых кислот могут быть использованы в генной терапии, а белки и пептиды NOS могут быть также использованы в методах скрининга агентов, модулирующих активность NOS. Преимущество изобретения заключается в создании новых NOS-вариантов или мутантов, которые могут быть использованы в генной терапии, 7 н. и 18 з.п. ф-лы, 1 табл., 9 ил.

Изобретение относится к генной инженерии, конкретно, к генам точки контроля клеточного цикла и может быть использовано in vitro или in vivo в системах клеточной культуры для изучения роли ATR в качестве гена точки контроля. Полинуклеотид, кодирующий гомолог ATR полипептида rad3, клонируют в экспрессирующий вектор, функциональный в эукариотических клетках. Полипептид гомолога ATR полипептида rad3 получают путем культивирования эукариотической клеточной культуры, трансформированной вектором. Моноклональное антитело к гомологу ATR полипептида rad3 получают с помощью гибридомных технологий. Путем инокуляции полипептида гомолога ATR полипептида rad3 животному-хозяину получают поликлональные антитела. Присутствие полинуклеотида в образце животной ткани обнаруживают путем контактирования данного образца, содержащего ДНК или РНК, с полинуклеотидом, кодирующим гомолог ATR полипептида rad3, в условиях гибридизации. Полипептид в биологическом образце обнаруживают путем контактирования образца с моноклональными или поликлональными антителами. Проводят отбор веществ - кандидатов как антираковых агентов, судя по уменьшению активности полипептида ATR на субстрате или уменьшению комплексообразования гомолога ATR в присутствии веществ-кандидатов. Изобретение позволяет получить гомологи ATR полипептида rad3 человека или S.pombe. 22 н. и 2 з.п. ф-лы, 1 ил.

Изобретение относится к области генной инженерии и молекулярной биологии и может быть использовано при разработке и осуществлении многих методов анализа ДНК. Предложены модифицированные формы термостабильных ДНК-полимераз, получаемые путем замены остатка глутамата в 4-м положении 11-членного критического мотива, принадлежащего нативной форме фермента бактерий р. Thermus, другим аминокислотным остатком, введение которого имеет результатом понижение уровня дискриминирующей способности фермента по отношению к нуклеотидам, меченным красителем из класса флуоресцеина. Предпочтительной является замена глутамата в указанном положении лизином. Описаны ДНК-последовательности, кодирующие предлагаемые варианты термостабильной ДНК-полимеразы, векторы для экспрессии этих последовательностей в различных типах хозяйских клеток, способ получения рекомбинантных форм модифицированных ДНК-полимераз по изобретению и наборы для осуществления анализов с их использованием, которое существенно упрощает экспериментальную процедуру. 5 с. и 6 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генной инженерии и может быть использовано в различных методах анализа нуклеиновых кислот, связанных с синтезом комплементарных ДНК-последовательностей. Предложена модифицированная форма термостабильной ДНК-полимеразы, получаемая путем замены остатка глутамата в консенсусной последовательности SerGlnIleGluLeuArgVal/Ile природного термостабильного фермента другим аминокислотным остатком и отбора мутеинов, проявляющих повышенную способность к включению в реакцию несвойственных субстратов, предпочтительно рНТФ. Описаны кодирующие модифицированную ДНК-полимеразу нуклеотидные последовательности, содержащие их векторы и штаммы Е.coli, трансформированные указанными векторами и обеспечивающие получение рекомбинантных форм мутантных ферментов. Предлагаемое применение новой термостабильной ДНК-полимеразы, в том числе в составе наборов и композиций, в реакции секвенирования нуклеиновой кислоты позволяет использовать новые подходы при анализе результатов исследования. 9 с. и 11 з.п. ф-лы, 4 табл.