Ферменты, например лигазы (6.), проферменты, композиции их, способы получения, активирования, ингибирования, разделения или очистки ферментов: ..действующие на CHOH группы как доноры, например глюкозооксидаза, лактат дегидрогеназа (1.1) – C12N 9/04

Изобретение относится к биотехнологии. Представлены ферменты: гидрогеназа и дегидрогеназа, выделенные из Thermococcus onnurineus NA1 и имеющие последовательности, приведенные в описании, а также кодирующие их гены. Описан вектор, содержащий указанные гены, объединенные в кластер FDH2-MFH2-MNH2. Описана клетка-хозяин, содержащая указанный вектор. Предложены способы получения водорода, включающие следующие стадии: приготовления среды в сосуде для культивирования; подачи формиата в газовую фазу, присутствующую в сосуде для культивирования; культивирования рекомбинантной клетки-хозяина или штамма T. onnurineus в сосуде для культивирования; извлечения водорода из сосуда для культивирования. Изобретение позволяет наиболее эффективно получать водород микробиологическим способом в среде, содержащей формиат в газовой фазе. 8 н. и 5 з.п. ф-лы, 14 ил., 7 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Представлен выделенный полипептид, имеющий NADH-зависимую HMF-редуктазную активность, где указанный полипептид на 80% гомологичен аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2, имеющейся в описании, который имеет замены в положениях, соответствующих положениям a) Y295C, б) Y295C и S117L, в) Y295C и S110P, или г) Y295C и S110P и S117L в SEQ ID NO: 2. Описаны нуклеиновая кислота, кодирующая указанный полипептид, экспрессионный вектор, содержащий указанную нуклеиновую кислоту, и клетка-хозяин, содержащая указанный вектор и предназначенная для экспрессии полипептида с NADH-зависимой HMF-редуктазной активностью. Предложено применение указанных полипептида, нуклеиновой кислоты, вектора или клетки-хозяина в производстве крупнотоннажных химикатов из лигноцеллюлозного сырья и фурансодержащего материала. Изобретение позволяет получить NADH-зависимую HMF-редуктазу с увеличенной специфичной активностью. 5 н. и 13 з.п. ф-лы, 6 табл., 4 ил., 7 пр.

Изобретение относится к ферментному электроду, включающему частицы углерода, несущие глюкозодегидрогеназу (GDH) с флавинадениндинуклеотидом (FAD) в качестве кофермента; и электродный слой, контактирующий с указанными частицами углерода, причем частицы углерода и электродный слой состоят из частиц углерода с диаметром частицы не более 100 нм и удельной поверхностью по меньшей мере 200 м² /г. Также изобретение относится к способу получения указанного электрода, а также датчику глюкозы и ферментной топливной батарее, использующим данный электрод. Электрод не требует использования медиатора электронов, позволяя получать высокую величину тока отклика и широкий динамический спектр при использовании в качестве датчика глюкозы. 4 н. и 8 з.п. ф-лы, 9 пр., 14 ил.

Изобретениео тносится к биотехнологии и медицине, а именно к онкологи. Предложен способ получения субстанции L-лизин-альфа-оксидазы (ЛО) с использованием штамма-продуцента Trichoderma cf. aureoviride Rifai BKMF-4268D. Проводят ферментацию на содержащей источники азота, фосфата и пшеничные отруби среде. Затем осуществляют выделение и очистку фермента при следующей последовательности операций: диализ культуральной жидкости, обработка адсорбентами, осаждение примесей сульфатом аммония 20% степени насыщения, гидрофобная и ионообменная хроматография. Получают L-лизин-альфа-оксидазу, имеющую молекулярную массу 115-116 кДа, изоэлектрическую точку 4,25, оптимум рН - 7,4. Предлагаемый способ обеспечивает увеличение выхода ЛО до 67%. 5 табл., 5 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Представлены ферменты: гидрогеназа и дегидрогеназа, выделенные из Thermococcus onnurineus NA1 и имеющие последовательности, приведенные в описании, а также кодирующие их гены. Описан вектор, содержащий указанные гены, объединенные в кластер CODH-MCH-MNH3. Создана клетка-хозяин, содержащая указанный вектор. Предложены способы получения водорода, включающие следующие стадии: приготовления среды в сосуде для культивирования, культивирования рекомбинантной клетки-хозяина или штамма Thermococcus onnurineus NA1 в присутствии монооксида углерода, извлечения водорода из сосуда для культивирования. Изобретение позволяет наиболее эффективно получать водород микробиологическим способом. 8 н. и 4 з.п. ф-лы, 10 ил., 5 табл., 4 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению мультиферментных препаратов, и может быть использовано на предприятиях пищевой промышленности в качестве получения препаратов, направленных на снижение токсического действия алкоголя и продуктов его метаболизма. Способ предусматривает культивирование дрожжей в биореакторе на мелассной среде с добавлением молочной сыворотки в количестве 50% от общего объема питательной среды. Клетки дрожжей отделяют от культуральной жидкости центрифугированием и подвергают трансформации на шаровой мельнице при температуре 25±2°С при скорости вращения ротора 10000 об/мин в течение 2,0±0,3 ч. Трансформированные клетки дрожжей экстрагируют 0,06 мМ фосфатным буфером рН 8,5 при температуре 37±2°С с последующим центрифугированием с получением супернатанта. Полученный супернатант подвергают двукратной обработке охлажденным раствором ацетона с получением осадка. Полученный осадок растворяют в дистиллированной воде и подвергают диализу против дистиллированной воды в течение 3 ч при температурем +4±2°С и центрифугируют с получением супернатанта. Полученный супернатант подвергают микрофильтрации на мембранах с размерами пор 0,22 мкм и удаляют балластные белки с помощью ионообменной хроматографии на колонке с КМ- и ДЭАЭ-целлюлозой. Изобретение позволяет получить этанол-окисляющий мультиферментный препарат с высокой степенью чистоты и высокой каталитической активностью и повысить выход биомассы дрожжей.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ энантиоселективного ферментативного восстановления оксостероидных соединений общей формулы I и формулы II, представленных в описании изобретения. Оксостероидное соединение в реакционной смеси в концентрации 50 г/л восстанавливают гидроксистероидной дегидрогеназой в присутствии кофактора NADH или NADPH. Окисленный кофактор NAD или NADP, образуемый гидроксистероидной дегидрогеназой, непрерывно восстанавливается через окисление вторичного спирта или через окисление С₄-С₆-циклоалканола. Для окисления вторичного спирта или циклоалканола используется дополнительная оксидоредуктаза/спиртовая дегидрогеназа. Также предложен способ энантиоселективного ферментативного окисления гидроксистероидных соединений общей формулы I или гидроксистероидных соединений, являющихся производными желчной кислоты. Гидроксистероидное соединение в реакционной смеси в концентрации 50 г/л окисляют гидроксистероидной дегидрогеназой в присутствии кофактора NAD или NADP. Восстановленный кофактор NADH или NADPH, образуемый гидроксистероидной дегидрогеназой, непрерывно регенерируется через восстановление кетосоединения или через восстановление С₄-С₆-циклоалканона. Для восстановления кетосоединения или циклоалканона используется дополнительная оксидоредуктаза/спиртовая дегидрогеназа. Изобретения позволяют окислять/восстанавливать исходные гидроксистероидные/оксостероидные соединения с выходом более 90% и с высоким TTN кофакторов 10³. 2 н. и 16 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в пищевой промышленности. Для получения 6-O- -D-глюкопиранозил-D-сорбита (1,6-GPS) изомальтулозу подают в реакционный раствор, содержащий фермент, обладающий способностью катализировать превращение изомальтулозы в 1,6-GPS, из которого выделяют целевой продукт после инкубации при температуре 20-40°С. До или во время инкубации в реакционный раствор добавляют восстановительные эквиваленты. Фермент выделяют посредством анионообменной и двух аффинных хроматографии из неочищенного экстракта микроорганизма рода Gluconobacter, содержащего ген фермента, обладающего способностью катализировать превращение изомальтулозы в 1,6-GPS. Получена нуклеиновая кислота, кодирующая фермент, обладающий способностью катализировать превращение изомальтулозы в 1,6-GPS. Вектор, содержащий данную нуклеиновую кислоту, предназначен для обеспечения экспрессии этого фермента в клетке-хозяине. Применение изобретения позволяет получить 6-О- -D-глюкопиранозил-D-сорбит из изомальтулозы посредством одной единственной ферментативной реакции. 6 н. и 20 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии. Описан вариант растворимой зависимой от пирролохинолинхинона (PQQ) глюкозодегидрогеназы (s-GDH), содержащей инсерцию аминокислотного остатка между положениями 428 и 429, которые соответствуют аминокислотной последовательности дикого типа, известной для Acinetobacter calcoaceticus, и может содержать одну или несколько дополнительных аминокислотных замен. Представлен полинуклеотид, кодирующий описанный вариант s-GDH. Описан вектор экспрессии, содержащий представленный полинуклеотид. Описана клетка-хозяин E.coli, содержащая описанный вектор. Описан способ получения указанного варианта s-GDH, включающий в себя культивирование клетки-хозяина E.coli в условиях, подходящих для получения варианта фермента. Предложен способ выявления, определения или измерения глюкозы в образце с использованием описанного варианта s-GDH, который включает приведение в контакт образца с указанным вариантом. Изобретение позволяет эффективно определять концентрации сахаров, особенно глюкозы в образце, так как обладает повышенной субстратной специфичностью по отношению к глюкозе. 7 н. и 13 з.п. ф-лы, 4 ил., 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине, и может быть использовано в бактериотерапии и бактериопрофилактике инфекций разнообразной этиологии и локализаций. Штамм Aerococcus viridans B-7069 ИМВ HAH Украины проявляет противомикробную активность и является пригодным для получения лечебных средств, предназначенных для лечения инфекционных заболеваний разной этиологии и локализации. Лекарственное средство содержит терапевтически эффективное количество лиофилизированных вегетативных клеток штамма Aerococcus viridans B-7069 ИМВ НАН Украины и фармацевтически приемлемый носитель. Изобретение обеспечивает проявление у штамма высокой антимикробной активности и является эффективным средством в лечении инфекционных поражений разной локализации. 2 н.п. ф-лы, 4 табл.

Изобретение относится к медицине и касается цитозольной изоцитратдегидрогеназы, ее гена и их использования в лечении ожирения, гиперлипидемии и жировой инфильтрации печени. Изобретение включает способ увеличения активности активируемого пролифератором пероксисом рецептора (PPAR), при котором вводят цитозольную НАДФ⁺-зависимую изоцитратдегидрогеназу (IDPc), ген IDPc или НАДФН, а также способ отбора антисмысловой молекулы, которая ингибирует отложение жиров или продуцирование триглицеридов и холестерина, при котором используют ген IDPc, а также способ лечения болезней обмена веществ, таких как ожирение, гиперлипидемия или жировая инфильтрация печени, при котором вводят антисмысловую молекулу гена IDPc или такой ингибитор IDPc, как щавелевояблочная кислота или метилизолимонная кислота. Изобретение позволяет снизить клеточный уровень НАДФ в результате подавления экспрессии гена IDPc, что приводит к ингибированию отложения липидов в клетках. 4 н.п. ф-лы, 10 ил.

(56) (продолжение):

CLASS="b560m"1972, vol.13, p.106-114 (см. р.106). Ingebretsen O.C. Mechanism of the inhibitory effect of glyoxylate plus oxaloacetate and oxalomalate on the NADP-specific isocitrate dehydrogenase // Biochim. Biophys. Acta. 1976 Dec 8; 452(2):302-9, abstr. PubMed на сайте http://www.pubmed.com. Mookhtiar K.A. et al. Yeast squalene synthase. A mechanism for addition of substrates and activation by NADPH// J Biol Chem. 1994 Apr 15; 269(15):11201-7, реферат PubMed. Beach R.L. et al. Identification of D-threo-alpha-methylisocitrate as stereochemically specific substrate for bovine heart aconitase and inhibitor of TPN-linked isocitrate dehydrogenase// J. Biol. Chem. 1977 Apr 25 252(8):2702-9, abstr. PubMed на сайте http://www.pubmed.com. Radisky E.S. et al. Squalene synthase: steady-state, pre-steady-state, and isotope-trapping studies// Biochemistry. 2000 Feb 22; 39(7):1748-60, реферат PubMed.

Изобретение относится к области биохимии и генной инженерии и может быть использовано в производстве амидированных форм гормонов и других пептидов, применяемых в медицине и сельском хозяйстве. На основании результатов определения последовательностей пептидов, полученных при триптическом переваривании пептидилглицин-альфа-амидирующей монооксигеназы (РАМ) из мозговидной карциномы щитовидной железы крыс, синтезированы олигонуклеотидные последовательности, которые использованы для изолирования полноразмерных ДНК, кодирующих РАМ. Экспрессия полученных фрагментов ДНК в гетерогенных системах позволяет получить рекомбинантную форму РАМ, которая может быть использована в реакции амидирования пептидных субстратов с С-концевым глицином с тем же эффектом, что и нативный фермент. 12 ил., 2 табл.