Получение мутаций или генная инженерия, ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка, использование их хозяев: ...общие способы усиления экспрессий – C12N 15/67

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Настоящее изобретение обеспечивает синтетические 5'UTR области, содержащие первый полинуклеотидный фрагмент в виде второго интрона гена кальциевой АТФазы саркоплазматического/эндоплазматического ретикулума и второй полинуклеотидный фрагмент, представленный частью 5' нетранслируемой области (5'UTR) гена казеина. Синтетические 5'UTR области применяются для усиления экспрессии трансгена, при этом 5'UTR области расположены между промотором и последовательностью, представляющей интерес в экспрессионном векторе. В настоящем изобретении также предложены векторы, содержащие 5'UTR области, и способ усиления экспрессии трансгена при их применении. 9 н. и 16 з.п. ф-лы, 17 ил., 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу получения иммортализованной клетки человека, стабильно трансфицированной последовательностью нуклеиновой кислоты, стабильно трансфицированной иммортализованной клетке человека, полученной данным способом, способу рекомбинантной продукции целевого белка человека и применению вектора трансфекции. Способ получения иммортализованной клетки человека включает трансфекцию иммортализованной клетки-хозяина человека в бессывороточных условиях вектором трансфекции, содержащим ген, кодирующий целевой белок человека, промотор и сигнал полиаденилирования (полиА) гормона роста быка, где указанный промотор и сигнал полиА связаны с 5'- и 3'-концом гена, кодирующего целевой белок человека соответственно и начало репликации. Указанный вектор трансфекции дополнительно несет, по меньшей мере, один ген маркера селекции. Отбирают стабильно трансфицированные клетки. Предложенное изобретение позволяет получить стабильно трансфицированные иммортализованные клетки человека для получения рекомбинантных белков человека. 4 н. и 12 з.п. ф-лы, 16 ил., 2 табл., 5 пр.

Изобретение относится к генной инженерии и микробиологической промышленности и касается генетической конструкции для экспозиции белка на поверхности клеточной стенки Yarrowia lipolytica. Представленная конструкция содержит промотор, терминатор, сигнальную последовательность, селективный маркер, нуклеотидную последовательность, кодирующую иммобилизируемый белок, и нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы последовательностей, приведенных в списке последовательностей под номером SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:2, или SEQ ID NO:3, или SEQ ID NO:4, или SEQ ID NO:5, или SEQ ID NO:6. Представленное изобретение позволяет упростить процесс очистки продуцируемого клеткой белка и может быть использовано для микробиологического получения белков. 7 ил., 11 пр., 1 табл.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Предлагается способ конструирования штаммов дрожжей - стабильных продуцентов гормона роста человека (соматотропина). Кроме того, предлагаются два штамма ВКПМ Y-3506 и ВКПМ Y-3507 - стабильных продуцента соматотропина человека. Штаммы-продуценты были получены путем последовательной интеграции в геном реципиентного штамма экспрессионных плазмид. Каждая плазмида несет в своем составе ген соматотропина (GH1), слитый с лидерной последовательностью, под контролем промотора GAL1, а также один из генов URA3, LEU2, TRP1 и HIS3, комплементирующих ауксотрофные мутации штамма-реципиента. Продуктивность полученных штаммов составляет 100-130 мг соматотропина на 1 л среды. 3 н.п. ф-лы, 7 ил.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии и представляет собой эукариотическую клетку-хозяина для продуцирования гамма-карбоксилированного белка, содержащую вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую белок, требующий гамма-карбоксилирования, и ассоциированные последовательности контроля экспрессии, и вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую витамин К-эпоксидоредуктазу и ассоциированные последовательности контроля экспрессии. При этом клетка-хозяин дополнительно содержит молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую -глутамилкарбоксилазу и ассоциированные последовательности контроля экспрессии. Данное изобретение относится также к способу получения гамма-карбоксилированного белка и способу получения фармацевтической композиции, пригодной для индукции свертывания крови или стимуляции повышенного или пониженного свертывания крови, на основе полученного гамма-карбоксилированного белка. Изобретение позволяет получать гамма-карбоксилированный белок с высокой степенью эффективности. 3 н. и 17 з.п. ф-лы, 2 ил., 9 табл.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано при производстве различных белковых продуктов с помощью технологии рекомбинантных ДНК. Определены и получены новые последовательности ДНК, относящиеся к областям прикрепления матрикса (MAR), которые характеризуются способностью повышать продуцирование белка в эукариотических клетках. Предложены способы трансфекции эукариотических клеток-хозяев, в том числе новый способ множественной трансфекции, основанные на применении активных последовательностей ДНК MAR по изобретению и обеспечивающие существенное повышение уровня экспрессии рекомбинантного белка по сравнению с аналогичными клетками, трансфицированными традиционными методами. 8 н. и 3 з.п.ф-лы, 20 ил., 9 табл.

Изобретение представляет новые пептиды, которые функционируют in vivo как стимуляторы секреции инсулина бета-клетками поджелудочной железы в глюкозо-зависимом режиме. Показано, что такие пептиды-усилители секреции инсулина стимулируют секрецию инсулина островковыми клетками крыс in vitro и in vivo. Пептиды по настоящему изобретению представляют новый путь лечения больных со сниженной секрецией эндогенного инсулина, в частности в случае диабета 2-го типа. В частности, изобретение представляет полипептид, выбранный из конкретной группы VIP/PACAP - родственных полипептидов или их функциональных эквивалентов. Также заявляются способы получения как рекомбинантных, так и синтетических пептидов. Преимущество изобретения заключается в новых пептидах, которые могут применяться как стимуляторы секреции инсулина. 13 н. и 34 з.п. ф-лы, 4 табл., 10 ил.

Изобретение относится к области генной инженерии и может быть использовано в медико-биологической промышленности для получения белков терапевтического назначения, а также в медицине как средство для генной терапии. Предложены варианты конструкции ДНК, предназначенной для интегрирования в определенный сайт (сайт-мишень) хромосомной ДНК клетки, располагающийся перед интересующим эндогенным геном, за счет гомологичной рекомбинации между последовательностью указанного сайта-мишени и «направляющей» последовательностью, входящей в структуру данной конструкции. ДНК-конструкция также включает экзогенный промотор и экзон с неспаренным донорным сайтом сплайсинга или экзон с донорным сайтом и интрон с акцепторным сайтом сплайсинга. В результате встраивания такой конструкции в геном клетки образуются новые (не существующие в природе) транскрипционные единицы и обеспечивается возможность направленного изменения экспрессии любого эндогенного гена. 59 з.п. ф-лы, 15 ил., 7 табл.

ТРАНСКРИПЦИОННАЯ РЕГУЛЯТОРНАЯ ДНК ГЕНА ХОМЯКА EF-1

Изобретение относится к генной инженерии, конкретно к очищению и выделению полинуклеотидов, регулирующих транскрипцию генов млекопитающих, и может быть использовано для регуляции экспрессии гетерологичных полинуклеотидов, получения трансгенных животных и для идентификации родственных регуляторных последовательностей ДНК. ДНК, содержащую транскрипционную регуляторную ДНК гена хомяка EF-1, выделяли путем скрининга геномной библиотеки к ДНК яичника китайского хомячка (СНО-К1). Конструируют химерный полинуклеотид, включающий выделенную регуляторную ДНК гена хомяка EF-1, оперативно связанную с генной последовательностью, кодирующей целевой белковый продукт, отличный от белка, кодируемого геном хомяка EF-1. Полученный химерный полинуклеотид используют в составе экспрессионной плазмиды для трансформирования или трансфицирования клетки-хозяина. Для увеличения транскрипции целевого гена в клетке-хозяине интегрируют ДНК, содержащую регуляторную ДНК гена хомяка EF-1, в геномную ДНК клетки-хозяина в положение, оперативно связанное с целевым геном. Изобретение обеспечивает повышение в 3-11 раз уровней экспрессии мРНК оперативно связанных гетерологичных полинуклеотидов, 14 с. и 17 з.п. ф-лы, 3 табл.