Получение мутаций или генная инженерия, ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка, использование их хозяев: .....факторы, стимулирующие рост колоний – C12N 15/27

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантному получению G-CSF, и может быть использовано для продуцирования G-CSF в клетках Е.coli. Для эффективной продукции белка в клетках Е.coli оптимизируют последовательность ДНК, кодирующую G-CSF. На основе полученной оптимизированной последовательности ДНК конструируют плазмиду pAS017, которая включает также NdeI/BamHI-фрагмент ДНК вектора рЕТМ-50 и имеет физическую карту, представленную на чертеже. 2 н.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генно-инженерному получению белков человека, и может быть использовано для получения эпидермального фактора роста человека (чЭФР) в клетках бактерий в виде гибридного белка с глутатион-3-трансферазой. Конструируют рекомбинантную ДНК, кодирующую гибридный белок GST-hEGF, который состоит из аминокислотной последовательности глутатион-S-трансферазы и аминокислотной последовательности эпидермального фактора роста человека, разделенных сайтом расщепления энтерокиназой, и характеризующуюся нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:1. На основе KpnI/XhoI-фрагмента вектора рЕТ41 и указанной рекомбинантной ДНК создают рекомбинантную плазмиду рАS007 для экспрессии гибридного белка GST-hEGF в клетках E.coli. Изобретение позволяет достичь высоких уровней экспрессии GST-hEGF в клетках E.coli. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл., 5 пр.

Изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к созданию мутеинов рецептора фактора роста фибробластов (FGFR), и может быть использовано в медицине. Полипептид мутеина кислотной зоны внеклеточного домена (ECD) рецептора FGFR4 представляет собой химеру кислотной зоны FGFR4 ECD или вариант длинного кислотного бокса FGFR4 и имеет большее количество кислотных остатков в линкерной зоне D1-D2, чем FGFR4 ECD дикого типа. Мутеин может содержать точечную мутацию, которая ингибирует гликозилирование. Мутеин используют для лечения заболевания, ассоциированного с одним или несколькими лигандами семейства FGFR, например пролиферативных заболеваний, в том числе различных видов рака, нарушений ангиогенеза и дегенерации желтого пятна. Изобретение позволяет получить мутеин кислотной зоны FGFR4 ECD, имеющий сниженную способность связываться с тканями, путем увеличения количества кислых аминокислотных остатков внутри линкерной зоны D1-D2. 8 н. и 24 з.п. ф-лы, 22 ил., 11 табл., 18 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ получения, выделения и очистки рчГ-КСФ. Осуществляют получение клеток рекомбинантного штамма-продуцента, а затем концентрирование культуральной жидкости. Разрушают бактериальные клетки при выделении тел включения двукратной обработкой высоким давлением. Удаляют примесные белки. Растворяют тела включения и осуществляют восстановление белка. Проводят ренатурацию белка длительностью 70-90 часов с разбавлением раствора белка до 400 л. Полученный раствор наносят на анионообменную ХК диаметром 300 мм с линейной скоростью нанесения 600-1000 мл/мин. Затем проводят концентрирование рчГ-КСФ последовательно на хроматографических колонках с анионообменным и катионообменным сорбентами. Затем осуществляют очистку рчГ-КСФ на катионообменнике в режиме рецикла фракций и стабилизацию диализом. Способ позволяет получать за один цикл стабильный препарат рчГ-КСФ в количестве 15-20 г с гомогенностью более 97% по ВЭЖХ и с гемостимулирующей активностью 1000-1400%. 4 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к вакцинации с использованием нуклеиновых кислот, и может быть использовано в медицине. Млекопитающему вводят местно имиквимод или резиквимод через 12-26 часов после введения нуклеотидных последовательностей, кодирующих гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор и антигенный пептид или белок. Изобретение позволяет значительно усилить иммунный ответ млекопитающего на антиген. 17 з.п. ф-лы, 23 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению генно-модифицированных клеточных линий, и может быть использовано в медицине для иммунотерапии и иммунопрофилактики у пациентов со злокачественными новообразованиями. Рекомбинантным методом получают линию клеток меланомы человека KG, секретирующую рекомбинантный гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор человека. Полученную линию депонируют в Специализированной коллекции культур клеток позвоночных Российской коллекции клеточных культур под номером РККК (П) 699Д. Линия клеток меланомы человека KG обладает стабильными культуральными, морфологическими и иммунологическими характеристиками и обладает способностью секретировать рекомбинантный GM-CSF человека, сохраняющейся после инактивации клеток ионизирующим облучением.

Изобретение относится к генетической инженерии и может быть использовано для получения рекомбинантного полипептида гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека. Конструируют in vitro рекомбинантную плазмидную ДНК, содержащую синтетический ген гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека, сильный конститутивный промотор A3 из ранней области бактериофага Т7 и синтетический участок - усилитель трансляции (TREN) гена 10 бактериофага Т7, что в совокупности с высокой копийностью плазмиды и оптимизацией условий культивирования обеспечивает конститутивный биосинтез целевого белка в клетках трансформированного ею штамма Escherichia coli SGK25/pA3GF с высоким выходом. 2 н.з.п ф-лы, 4 ил.

Предложено средство с антидиабетической активностью. Средство представляет собой негликозилированный рекомбинантный человеческий гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (нрчГ-КСФ). От нативного препарата граноцит он отличается тем, что не гликозилирован и содержит дополнительный остаток метионина на N-конце. Действие средства связано с мобилизацией и миграцией мезенхимальных стволовых клеток костного мозга, хомингом в поджелудочную железу. Это приводит к репарации инсулинпродуцирующего аппарата органа и к нормализации уровня глюкозы в периферической крови в результате монотерапии нрчГ-КСФ. 2 ил., 3 табл.

(56) (продолжение):

CLASS="b560m"реферат базы данных PubMed: de Lalla F. et al. Randomized prospective controlled trial of recombinant granulocyte colony-stimulating factor as adjunctive therapy for limb-threatening diabetic foot infection. Antimicrob Agents Chemother. 2001 Apr; 45(4):1094-8 [on line] PMID: 11257020 [найдено 19.04.2007]. реферат базы данных PubMed: Hadaya К et al. G-CSF treatment prevents cyclophosphamide acceleration of autoimmune diabetes in the NOD mouse. J Autoimmun. 2005 Mar; 24(2):125-34 [on line] PMID: 15829405 [найдено 19.04.2007]. JP 1085098 А 30.03.1989 (реферат) [on line] [найдено 19.04.2007] Найдено базы данных Esp@cenet.

Изобретение относится к области молекулярной биологии. Предложен выделенный фрагмент ДИК, кодирующий GM-CSF лошади, а также сам выделенный белок GM-CSF лошади. Кроме того, предложены векторы и различные композиции, содержащие их. GM-CSF может быть использован в качестве адъюванта при вакцинации лошадей и в качестве неспецифического стимулятора иммунитета в ветеринарии. 12 н. и 6 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генетической инженерии и может быть использовано для получения гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) человека. Конструируют рекомбинантную плазмидную ДНК pFGM17, кодирующую конститутивный синтез полипептида ГМ-КСФ человека и состоящую из KpnI/EcoRI-фрагмента ДНК плазмиды pSPF1 и искусственной последовательности ДНК, кодирующей сигнальный пептид белка Caf1 Yersinia pestis, а также KpnI/EcoRI-фрагмента промежуточной плазмиды pSK-GM, включающего синтетический ген ГМ-КСФ человека. Клетки E. coli трансформируют плазмидной ДНК pFGM17 и получают штамм E. coli BL21(DE3)/pFGM17 - продуцент полипептида ГМ-КСФ человека. Изобретение позволяет повысить технологичность и экономичность процесса получения рекомбинантного ГМ-КСФ за счет исключения стадии индукции процесса биосинтеза при одновременном увеличении выхода целевого продукта в 2 раза. 2 н. п. ф-лы, 4 ил.

Изобретение относится к генной инженерии и может быть использовано для получения рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека. Конструируют рекомбинантную плазмидную ДНК pES3-7, которая имеет молекулярную массу 3,63 МДа (5907 п.о.) и состоит из Ndel/Notl-фрагмента ДНК, содержащего последовательность искусственного гена рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, гена -лактамазы, и Ndel/Notl-фрагмента ДНК плазмиды рЕТ22b(+), содержащего промотор и терминатор транскрипции Т7-РНК-полимеразы, усилитель трансляции гена 10 фага Т7. Плазмида pES3-7 содержит в качестве генетического маркера ген -лактамазы, детерминирующей устойчивость трансформированных плазмидой pES3-7 клеток E.coli к ампициллину и уникальные сайты узнавания эндонуклеаз рестрикции, расположенные на следующем расстоянии вправо от сайта Ndel: Xbal - 38 п.о., Hpal - 1332 п.о., Pstl - 4065 п.о., Pvul - 4190 п.о., Xhol - 5363 п.о. Полученной плазмидой трансформируют клетки Escherichia coli и получают штамм Е.coli BL21(DE3)/pES3-7 - суперпродуцент рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора. Изобретение позволяет получать рекомбинантный гранулоцитарный колониестимулирующий фактор с высоким выходом (в количестве 20-30% от суммарного содержания белка клеток) и по упрощенной технологии. 2 н.п. ф-лы, 2 ил.