Получение мутаций или генная инженерия, ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка, использование их хозяев: .....инсулины – C12N 15/17

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к новым аналогам инсулина, и может быть использовано в медицине. Получают аналог инсулина, в котором по меньшей мере две гидрофобные аминокислоты заменены гидрофильными аминокислотами по сравнению с родительским инсулином и где A-цепь аналога инсулина содержит по меньшей мере одну мутацию и B-цепь содержит по меньшей мере одну мутацию по сравнению с родительским инсулином, при этом по меньшей мере одна мутация в А-цепи находится в одном или более сайтах расщепления, выбранных из группы, состоящей из A13-14, A14-15 и A19-20, и по меньшей мере одна мутация в В-цепи находится в одном или более сайтах расщепления, выбранных из группы, состоящей из B2-3, B6-7, B9-10, B10-11, B13-14, B14-15, B16-17, B22-23, B24-25, B25-26, и где аминокислота в положении B30 удалена. Аналог инсулина используют в составе фармацевтической композиции для лечения или профилактики гипергликемии, сахарного диабета 1 или 2 типа. Изобретение позволяет получить аналог инсулина с повышенной стабильностью в отношении одного или более протеолитических ферментов по сравнению с родительским инсулином. 6 н. и 38 з.п. ф-лы, 4 ил., 5 табл., 11 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой рекомбинантную плазмидную ДНК pHIG05, направляющую синтез гибридного белка человека с проинсулином Glargine человека, содержащую ДНК, кодирующую гибридный белок с проинсулином Glargine человека размером 134 а.о. с аминокислотной последовательностью, представленной на фиг.2, содержащей аминокислотные последовательности лидерного пептида, в виде N-концевого фрагмента гамма-интерферона человека, соединенного с проинсулином Glargine пептидным линкером. На основе рекомбинантной плазмиды pHIG05 получен штамм Escherichia coli JM109/pHIG05 - продуцент гибридного белка с проинсулином Glargine, зарегистрированный в ФГУП ГосНИИгенетики ВКПМ под номером В-11408. Использование заявляемых изобретений позволяет упростить технологию выделения инсулина Glargine и повысить его выход. 3 н. и 1 з.п.ф-лы, 2 ил., 2 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой рекомбинантную плазмидную ДНК pHI03, направляющую синтез гибридного белка человека с проинсулином человека, содержащую ДНК, кодирующую гибридный белок с проинсулином человека размером 134 а.о. с аминокислотной последовательностью, представленной на фиг.2, содержащей аминокислотные последовательности лидерного пептида, в виде N-концевого фрагмента гамма-интерферона человека, соединенного с проинсулином человека пептидным линкером. На основе рекомбинантной плазмиды pHI03 получен штамм Escherichia coli JM109/pHI03-продуцент гибридного белка с проинсулином, зарегистрированный в ФГУП ГосНИИгенетики ВКПМ под номером В-11409. Использование заявляемых изобретений позволяет упростить технологию выделения инсулина человека и повысить его выход. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой рекомбинантную плазмидную ДНК pHILP07, направляющую синтез гибридного белка человека с проинсулином Lispro человека, содержащую ДНК, кодирующую гибридный белок с проинсулином Lispro человека размером 134 а.о. с аминокислотной последовательностью, представленной на фиг.2, содержащей аминокислотные последовательности лидерного пептида в виде N-концевого фрагмента гамма-интерферона человека, соединенного с проинсулином Lispro пептидным линкером. На основе рекомбинантной плазмиды pHILP07 получен штамм Escherichia coli JM109/pHILP07 - продуцент гибридного белка с проинсулином Lispro, зарегистрированный в ФГУП ГосНИИгенетики ВКПМ под номером В-11410. Изобретение позволяет упростить технологию выделения инсулина Lispro и повысить его выход. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 пр.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к новому пептидному аналогу инсулиноподобного фактора роста-1 (IGF-1), содержащему аминокислотную замену метионина в положении 59 на Asn, Leu, Nle, Ile, Arg, A6c, Glu, Trp или Tyr, а также другие дополнительные замены, вставки и делеции. Указанный пептид или его фармацевтически приемлемую соль используют в составе фармацевтической композиции для лечения IGF-1-опосредованных заболеваний, а также в способе лечения низкорослости. Изобретение позволяет получить аналог-агонист IGF-1, обладающий повышенной биологической активностью по сравнению с нативным IGF-1. 3 н. и 14 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению модифицированных белков IGF-1, и может быть использовано в медицине. Сконструирован полипептид, содержащий человеческий белок-предшественник IGF-1, в котором аминокислоты G1, Р2 и ЕЗ удалены в результате делеции или аминокислота Е3 удалена в результате делеции и в котором аминокислота R37 изменена на аланин и аминокислоты R71 и R72 удалены в результате делеции. При этом отщепление Е-пептида от IGF-1 с помощью протеазы снижено в результате указанных модификаций. Полученный полипептид используют для лечения заболевания костно-мышечной системы, диабета, состояний, ассоциированных с гибелью нейронов, анемии, хронического обструктивного заболевания легких и ожогового поражения. Изобретение позволяет получить стабилизированные полипептиды, содержащие модифицированную последовательность предшественника IGF-1, в которых снижено встречающееся в естественных физиологических условиях отщепление Е-пептида от IGF1. 13 н. и 8 з.п. ф-лы, 12 ил., 1 табл., 82 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к генной и белковой инженерии, и касается способа получения рекомбинантного с-пептида человека. Представленный способ включает культивирование штамма-продуцента Escherichia coli, разрушение бактериальных клеток дезинтеграцией, отделение «телец включения», содержащих гибридный белок, их растворение в буфере, содержащем мочевину и дитиотреитол, ренатурацию и очистку ренатурированного гибридного белка, его расщепление трипсином и карбоксипептидазой В, разделение хроматографией на SP-сефарозе с последующей очисткой и получением целевого продукта. Представленный способ позволяет получать с-пептид с высоким выходом и с чистотой не менее 95% из отходов, образующихся в процессе получения рекомбинантного инсулина человека. 4 табл., 6 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к генной терапии, и касается нуклеотидной последовательности, кодирующей инсулиноподобный фактор роста человека, IGF-1, представленную синтетическим геном, включающим последовательность SEQ ID NO:1, рекомбинантной плазмидной ДНК, содержащей эту последовательность, эукариотической клетки, содержащей рекомбинантную плазмидную ДНК, конструкции для генной терапии и фармацевтической композиции для генной терапии, обладающей регенеративным и ранозаживляющим действием. Преимущество изобретения заключается в снижении доз инъекционных препаратов и частоты их введения. 5 н.п. ф-лы, 6 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению рекомбинантного инсулина человека, и может быть использовано для приготовления лекарственных препаратов для лечения сахарного диабета. Гибридный белок - предшественник инсулина человека состоит из N-концевого фрагмента гамма-интерферона человека, соединенного через пептидный линкер с аминокислотной последовательностью проинсулина человека. Рекомбинантный инсулин человека получают путем культивирования штамма-продуцента Escherichia coli JM109/pNINS11, несущего плазмиду pHINS11, выделения телец включений и растворения их в буфере, содержащем мочевину и дитиотреитол. Далее проводят ренатурацию гибридного белка, осаждение примесных соединений, очистку ренатурированного гибридного белка ионообменной хроматографией, совместный ферментативный гидролиз гибридного белка трипсином и карбоксипептидазой Б. На последнем этапе проводят очистку инсулина катионообменной хроматографией и методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на обращенных фазах. Изобретение позволяет упростить получение высокоочищенного рекомбинантного инсулина человека и повысить его выход. 6 н.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл.

Изобретение относится к генной инженерии и может быть использовано в фармацевтической промышленности при создании лекарственных препаратов для лечения инсулинозависимого сахарного диабета. Плазмида pAS-2 образована HindIII/BamHI-фрагментом плазмиды pPINS07, содержащим часть искусственного гена, кодирующего IgG-связывающий домен белка А из S. aureus и пептид His₆ GlySerArg, и HindIII/BamHI-фрагментом, кодирующим проинсулин Aspart. Плазмида pAS-2 обеспечивает в клетках Е. coli биосинтез гибридного белка, в котором последовательность домена В стафилококкового белка A Staphylococcus aureus соединена через пептидный линкер His₆GlySerArg с аминокислотной последовательностью проинсулина Aspart человека. Штамм бактерий Escherichia coli BAS2 человека, полученный путем трансформирования клеток штамма бактерий Escherichia coli BL21 плазмидой pAS-2, продуцирует указанный гибридный белок. Применение изобретения позволяет получать инсулин Aspart человека по упрощенной технологии и с высоким выходом. 2 н.п. ф-лы, 4 ил.

Изобретение относится к генной инженерии, конкретно к получению проинсулина Glargin, и может быть использовано для создания лекарственных препаратов нового поколения для лечения инсулинозависимого сахарного диабета. Конструируют рекомбинантную плазмидную ДНК pGG-1, кодирующую гибридный белок с аминокислотной последовательностью проинсулина Glargin, в котором последовательность домена В белка A Staphylococcus aureus соединена через пептидный линкер His₆ GlySerArg с аминокислотной последовательностью проинсулина Glargin, имеющую молекулярную массу 3,3 МДа (5051 п.о.), содержащую HindIII/BamHI-фрагмент плазмиды pPINS07, включающий гибридный tac-промотор, ген -лактамазы (bla), область начала репликации (ori), терминатор транскрипции рибосомного оперона Е.coli, последовательность нуклеотидов, кодирующую аминокислотную последовательность домена В белка A Staphylococcus aureus, соединенную с последовательностью нуклеотидов, кодирующей пептид His₆GlySerArg, и HindIII/BamHI-фрагмент (271 п.о.), кодирующий проинсулин Glargin; уникальные сайты рестрикции со следующими координатами: EcoRI - 1, NcoI - 217, BamHI - 221, PstI - 342 и 417, HindIII - 492, SalGI - 4513, ClaI - 4792. Бактерии Escherichia coli BL21 трансформируют плазмидой pGG-1 и получают штамм Escherichia coli BGG18, продуцент гибридного полипептида, содержащего аминокислотную последовательность проинсулина Glargin. Изобретение позволяет получить инсулин Glargin с высоким выходом и по упрощенной технологии. 2 н.п. ф-лы, 4 ил.

Изобретение относится к генной инженерии и может быть использовано для получения высокоочищенного генно-инженерного инсулина Lyspro - быстродействующего аналога инсулина человека. Путем трансформации родительского штамма бактерий Escherichia coli BL21 плазмидной ДНК pLP-3-1 получают штамм Escherichia coli BLP21 - продуцент проинсулина Lyspro. Изобретение позволяет получить стабильный рекомбинантный инсулин Lyspro с высоким выходом и по упрощенной технологии. 1 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению генно-инженерного инсулина человека для изготовления лекарственных препаратов, применяемых при лечении сахарного диабета. Способ осуществляют путем культивирования штамма-продуцента гибридного белка, содержащего проинсулин человека, Escherichia coli BL21/pPINS07(BL07) или Escherichia coli JM109/pPINS07, разрушения клеток дезинтеграцией, отделения телец включения, содержащих гибридный белок. Далее проводят предварительную отмывку телец включения, одновременное растворение белка и восстановление дисульфидных связей в буфере с 5-10 мМ дитиотреитола и 1 мМ ЭДТА, ренатурацию и очистку ренатурированного гибридного белка ионообменной хроматографией. Расщепление гибридного белка проводят совместным гидролизом трипсином и карбоксипептидазой Б при массовом соотношении гибридного белка, трипсина и карбоксипептидазы Б 4000:0,6:0,9. Очистку инсулина проводят гидрофобной хроматографией или обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографией с последующей гель-фильтрацией, а выделение инсулина - кристаллизацией в присутствии солей цинка. Изобретение позволяет сократить процесс получения генно-инженерного инсулина человека и увеличить его выход.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в медико-биологической промышленности. Предложены новые полипептиды - предшественники инсулина или его аналогов, характеризующиеся повышенной стабильностью структуры и высоким уровнем экспрессии при получении в виде рекомбинантных форм в дрожжевых клетках. Полипептиды по изобретению отличаются от природной формы предшественника инсулина тем, что содержат укороченный С-пептид, включающий остаток ароматической аминокислоты, и имеют общую формулу: В (1-27)-X₂-X₃-X₁ -Y-A (1-21), где Х₁-пептидная последовательность из 1-3 аминокислотных остатков, в которой рядом с Y расположен остаток ароматической аминокислоты; Х₂-Pro или Asp; Х ₃-Lys; Y-Lys или Arg; A (1-21) - А-цепь инсулина человека, а В (1-27) - первые 27 аминокислотных остатков В-цепи инсулина человека. Раскрыт способ получения новых предшественников инсулина с помощью технологии рекомбинантных ДНК и последующего преобразования их в активный гормон. 5 с. и 4 з.п. ф-лы, 6 табл., 10 ил.

Изобретение относится к генной инженерии и касается нового штамма бактерий Escherichia coli, который может быть использован для получения высокоочищенного генно-инженерного инсулина человека. Путем трансформации клеток E.coli BL21 плазмидной ДНК pINS07, определяющей синтез проинсулина, получают штамм бактерий Escherichia coli BL21/pРINS07(BL07) - продуцент рекомбинантного проинсулина человека. Изобретение решает задачу повышения внутриклеточной стабильности рекомбинантного проинсулина человека.

(56) (продолжение):

CLASS="b560m"WINTER J. et al. Recombinant expression and in vitro folding of proinsulin are stimulated by the synthetic dithiol Vectrase-P. FEMS Microbiol. Lett . 2002,v. 213, n.2, p.225-230.

Изобретение относится к генной инженерии и может быть использовано для получения рекомбинантного инсулина человека. Рекомбинантная плазмидная ДНК pHINS05 содержит ген, кодирующий гибридный белок, состоящий из N-концевого фрагмента гамма-интерферона человека, пептидного линкера His₄GlySerArg и проинсулина человека. Рекомбинантной плазмидной ДНК pHINS05 трансформируют клетки Е. coli и получают штамм Е. coli JM109/pHINS05 - продуцент гибридного белка с проинсулином человека. Изобретение позволяет увеличить выход рекомбинантного проинсулина человека и удешевить технологический процесс получения инсулина человека. 3 н.п. ф-лы, 2 ил.

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается производного инсулина или его физиологически приемлемой соли с ускоренным по сравнению с человеческим инсулином наступлением действия, в котором аспарагин (Asn) в положении В3 цепи В заменен на природный основной аминокислотный остаток и по меньшей мере один аминокислотный остаток в положениях В27, В28 или В29 цепи В замещен на другой природный нейтральный или кислый аминокислотный остаток, причем аспарагин (Asn) в положении А21 цепи А может быть заменен на Asp, Gly, Ser, Thr или Ala, а фенилаланин (Phe) в положении В1 цепи В и аминокислотный остаток в положении В30 цепи В могут отсутствовать. Описываются также ДНК-последовательности, кодирующие предшественник производного инсулина, вектор экспрессии, содержащие эту ДНК, а также штаммы, экспрессирующие предшественник инсулина, и фармацевтическая композиция с понижающей, соответственно регулирующей уровень глюкозы в крови эффективностью. Преимущество изобретения заключается в разработке препарата с ускоренным наступлением действия. 6 н. и 17 з.п. ф-лы, 6 табл., 1 ил.