Иммуноглобулины, например моноклональные или поликлональные антитела: .из сыворотки – C07K 16/06

Изобретение относится к биохимии. Описан биспецифический антигенсвязывающий белок, который является гетеродимерным в отношении связывания белка А. При этом белок содержит первый полипептид, содержащий от N-конца до C-конца первую область связывания эпитопа, которая селективно связывает первый эпитоп, константную область иммуноглобулина, которая содержит первую область CH3 IgG человека, выбранную из IgG1, IgG2 и IgG4, где первая область СН3 связывается с белком А, и второй полипептид, содержащий от N-конца до C-конца вторую область связывания эпитопа, которая селективно связывает второй эпитоп, константную область иммуноглобулина, которая содержит вторую область CH3 IgG человека, выбранного из IgG1, IgG2 и IgG4, где вторая область CH3 содержит модификацию, которая снижает или предотвращает связывание второго домена CH3 с белком A. Изобретение позволяет быстро выделять белок А. 8 з.п. ф-лы, 10 ил., 3 табл., 12 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ очистки антитела, включая антитела, связывающие CD20 и VEGF человека, из композиции, включающей антитело и, по меньшей мере, одно примесное соединение, где указанный способ включает стадии: (a) загрузки композиции на катионообменный материал, где указанная композиция имеет значение первого pH от 4,0 до 6,0; (b) промывки катионообменного материала первым промывочным буфером при pH, значение которого превышает значение pH композиции (а), где pH первого промывочного буфера составляет от 6,8 до 9,0; (c) промывки катионообменного материала вторым промывочным буфером при pH, значение которого меньше значения pH первого промывочного буфера, где второй промывочный буфер имеет проводимость от 0,5 до 3,0 мСм/см и pH от 5,0 до 6,0; и (d) элюирования антитела из катионообменного материала элюирующим буфером при проводимости, по меньшей мере, на 2 мСм/см большей, чем проводимость второго промывочного буфера, где pH второго промывочного буфера и pH элюирующего буфера являются приблизительно одинаковыми и где pH элюирующего буфера составляет от 5,0 до 6,0. Описан способ конъюгирования, включающий конъюгирование очищенного продукта, полученного указанным способом, с гетерологичной молекулой. Также представлен способ получения фармацевтической композиции, включающий объединения указанного очищенного продукта с фармацевтически приемлемым носителем. Изобретение позволяет достичь улучшенной очистки антител, используемых для лечения. 5 н. и 11 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл., 2 пр.

Изобретение раскрывает способ получения высокоаффинных поликлональных антител. Способ включает стадии: а) нанесение раствора антител на аффинный сорбент с иммобилизованным антителом при молярном избытке антиген-специфических антител к антигену; б) удаление белков и низкоаффинных антител; в) удаление связавшихся среднеаффинных антител умеренно хаотропным агентом, таким как LiCl, MgCl₂, глицин, г) элюции высокоаффинных антител хаотропным агентом, д) удаление последнего и е) при необходимости удаление агрегатов антител. Способ обеспечивает получение антител, аффинность и специфичность которых значительно превосходят аффинность и специфичность поликлональных антител, известных из уровня техники. Применение антител, полученных способом по изобретению, позволяет заметно увеличить чувствительность и специфичность методов иммуноанализа. 12 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области жидкостной хроматографии. Предложен способ хроматографического выделения иммуноглобулина, включающий растворение в буферном растворе белковой фракции плазмы крови, в качестве которой используют осадок А спиртового фракционирования плазмы крови по Кону. Производят предварительную очистку полученного раствора в двух последовательно соединенных колонках, заполненных гидрофобным сорбентом и анионитом, соответственно, с последующим пропусканием через упомянутые две колонки буферного раствора. После сбора предварительно очищенной жидкой фракции, содержащей иммуноглобулин, ее направляют на вирусную сольвент-детергентную инактивацию, а затем на хроматографическую очистку, осуществляемую в системе из трех последовательно соединенных колонок, заполненных анионитом, гидрофобным сорбентом и катионитом, соответственно. Проводят элюирование иммуноглобулина с колонки, заполненной катионитом, а колонки с анионитом и гидрофобным сорбентом направляют на регенерацию. Изобретение обеспечивает возможность выделения иммуноглобулина из необогащенного сырья - осадка А, полученного спиртовым фракционированием плазмы крови по Кону, с высоким выходом и чистотой целевого продукта. 7 з.п. ф-лы, 2 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к диагностике инфекционных болезней, а также медицинской вирусологии и касается способа экспресс-диагностики ротавирусной инфекции в материалах из верхних дыхательных путей, а также флуоресцирующего конъюгата иммуноглобулина для его осуществления. Сущность способа заключается в том, что клетки цилиндрического эпителия слизистой оболочки носовой полости наносят на предметные стекла и антиген ротавируса в них определяют путем обработки стекол флуоресцирующим противоротавирусным коньюгатом иммуноглобулина, полученного из сыворотки крови кролика, иммунизированного ротавирусом G1P6. Использование способа и флуоресцирующего конъюгата иммуноглобулина позволяет упростить и обеспечить доступность диагностики ротавирусной инфекции в материалах из верхних дыхательных путей. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии. Способ выделения мономерного антитела из состава, содержащего агрегаты антител с высокой молекулярной массой, предусматривает контактирование состава с гидроксиапатитовой смолой и элюирование очищенного антитела из смолы. Раскрыты также варианты такого способа, предусматривающие проведение для состава аффинной хроматографии с белком А, ионообменной хроматографии и гидроксиапатитовой хроматографии. Способы позволяют получать состав, в котором содержание агрегатов антител с высокой молекуляной массой снижено до 1%. 6 н. и 17 з.п. ф-лы, 4 ил., 14 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению препарата на основе иммуноглобулинов человека, и может быть использовано в медицине. Препарат получают путем очистки иммуноглобулинов классов G, А и М, выделенных из крови ВИЧ-инфицированных больных с помощью аффинной хроматографии на колонке с интеграза-сефарозой. Изобретение позволяет получить иммуноглобулины классов G, А и М, выделенные из крови ВИЧ-инфицированных больных, обладающие способностью селективно расщеплять только интегразу ВИЧ. 7 ил.

Изобретение относится к инактивации вирусов в производстве иммуноглобулинов, в частности фракции G. Способ инактивации вирусов при получении иммуноглобулина фракции G включает очистку раствора иммуноглобулина, выделенного спиртовым фракционированием по методу Кона, при этом при очистке раствор иммуноглобулина предварительно обрабатывают сольвент-детергентной смесью, в качестве которой используют 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1 мас.% три-н-бутилфосфата и 1 мас.% полисорбата 80, и обработку проводят путем перемешивания смеси в течение 12-16 часов с последующим разбавлением 0,05 М ацетатным буферным раствором при рН 5,5, содержащим 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л, обработанный иммуноглобулин иммобилизируют на сульфопропилкатионитном сорбенте, имеющем зерна размером 50 мкм и сорбционную емкость 55 мг/см³, и осуществляют промывание в две стадии с помощью колоночной хроматографии с последующей элюцией, причем на первой стадии промывания используют 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1% мас. октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л, на второй стадии промывания используют 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, при этом на первой стадии промывание ведут объемом, соответствующим пяти объемам сорбента, на второй стадии промывание ведут объемом, соответствующим трем объемам сорбента. Изобретение обеспечивает высокую эффективность в инактивации вирусов, что повышает вирусобезопасность препаратов иммуноглобулина. 2 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к медицине, а именно к производству лекарственных препаратов. Предложен способ получения иммуноглобулина G, включающий фракционирование этиловым спиртом донорской плазмы с получением осадка Б и очистку выделенного иммуноглобулина, при этом осадок Б растворяют в 0,9%-ном растворе натрия хлорида при рН 5,15 и смешивают с 2 М ацетатным буферным раствором и 53%-ным этиловым спиртом, центрифугируют, центрифугат смешивают с гидрокарбонатом натрия при рН раствора 5,5, после центрифугирования центрифугат осветляют, смешивают с ацетатным буферным раствором при рН 5,4, 96%-ным (об./об.) этиловым спиртом и бикарбонатом натрия при рН 7,2, центрифугируют при минус (10-12)°С, выделенный осадок растворяют в 0,05 М ацетатном буферном растворе с рН 5,5, добавляют к нему сольвент-детергентную смесь, содержащую 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, 1% мас. три-н-бутилфосфата и 1% мас. полисорбата 80, смесь перемешивают, затем разбавляют 0,05 М ацетатным буферным раствором при рН 5,5, содержащим 1% мас. октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л, обработанный таким образом иммуноглобулин иммобилизируют и промывают в две стадии на сульфопропилкатионитном сорбенте с помощью колоночной хроматографии с последующей элюцией, ультрафильтрацией и стерилизующей фильтрацией. Изобретение обеспечивает высокую степень очистки иммуноглобулина G, отсутствие вирусов и стабильность готового препарата. 2 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к медицине и биотехнологии и касается способа получения иммуноглобулиновых препаратов. Способ получения иммуноглобулинового препарата включает последовательную обработку спиртового осадка Б (III фракции по Кону) десятикратным объемом 0,9% раствора хлорида натрия, хлороформом в конечной концентрации 0,1-3,0%, центрифугирование, добавление к центрифугату при рН 6-8 сульфата меди, удаление осадка центрифугированием, с последующим выделением целевого продукта методом ультрафильтрации в присутствии комплексообразующих соединений, его стабилизации, осветляющей и стерилизующей фильтрации, при этом сульфат меди используют в концентрации 0,003-0,03%. Изобретение обеспечивает повышение содержания выделяемой фракции иммуноглобулина А и повышение качества продукта.

Группа изобретений относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использована для иммунотерапии и иммунопрофилактики бактериальных и вирусных заболеваний. Предложена иммуноглобулиновая основа для иммунобиологических препаратов, которая содержит IgG, IgM и IgA, а также подклассы IgG: IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, при этом содержание иммуноглобулинов составляет: IgG 70-80%, IgM 10-15% и IgA 10-15%. Предложен способ получения иммуноглобулиновой основы для иммунобиологических препаратов. Предложены суппозитории и мазь для профилактики и терапии бактериальных и вирусных заболеваний. Изобретение обеспечивает разработку экономичного и эффективного способа обработки осадка A (II+III по Кону), позволяющего получить высокоэффективную пасту для иммуноглобулиновых препаратов. 4 н.п. ф-лы, 2 табл., 2 ил.

Изобретение относится к биотехнологии. Способ осуществляют следующим образом: доводят рН исходного раствора до 4,6-4,95 и добавляют к нему каприлат- и/или гептаноат-ионы, поддерживая рН на уровне 4,8-4,95. Инкубируют раствор супернатанта в условиях, при которых концентрация каприлат- и/или гептаноат-ионов составляет 10-30 мМ. Наносят фильтрованный раствор на анионообменную смолу в условиях, обеспечивающих связывание загрязняющих примесей со смолой в отсутствие значительного связывания антител со смолой. Способ позволяет получить очищенный, вирусологически безопасный и инактивированный с вирусологической точки зрения препарат антител. 2 н. и 20 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине. Предложены варианты антител, специфичных к пептидному домену, расположенному по обе стороны шарнирного участка R₇₆S ₇₇ в проBNP(1-108). Указанные антитела также специфически распознают циркулирующий проBNP(1-108) в образцах сыворотки или плазмы человека и практически не распознают пептиды BNP(1-76) или BNP(77-108). Описаны варианты пептидов, используемых для получения антител. Аминокислотная последовательность в описании. Раскрыты также способы получения указанных антител, в том числе с использованием указанных пептидов. Описаны способы получения гибридомы, секретирующей антитела, и раскрыта гибридома, полученная указанным способом. Описано моноклональное антитело, секретируемое гибридомой 3D4, депонированной под номером CNCM I-3073. Раскрыты варианты способа диагностики in vitro сердечной недостаточности с использованием антител по изобретению. Описан набор для обнаружения проBNP(1-108) в биологическом образце. Использование изобретения упрощает обнаружение циркулирующего в образцах сыворотки или плазмы человека проBNP(1-108) и делает обнаружение проBNP(1-108) более специфичным, что может найти применение в ранней диагностике сердечной недостаточности человека. 14 н. и 10 з.п. ф-лы, 16 ил., 5 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к очистке иммуноглобулинов, и может быть использовано в производстве лекарственных препаратов иммуноглобулинов, пригодных для внутривенного введения. Препарат иммуноглобулина получают путем концентрирования фракции III спиртового метода Кона ультрафильтрацией при величине рН 3,5-5,0, отмывки от этанола, заключительного концентрирования раствора. Последующее восстановление гидратных оболочек иммуноглобулина проводят методом молекулярной фильтрации путем создания градиента концентрации за счет введения в раствор иммуноглобулина низкомолекулярного вещества в концентрации 0,1-2,5 мас.%, с использованием воды с величиной рН от 3,8 до 4,5, очищенной для диализирующего раствора, затем добавляют стабилизатор и устанавливают величину рН 3,5-5,0. В конце очистки проводят стерилизующую фильтрацию и при необходимости полученный препарат сублимационно высушивают. Полученный препарат иммуноглобулина для внутривенного введения имеет показатель прозрачности раствора менее 0,01 и содержит мономерный иммуноглобулин G более 97% при полном отсутствии полимерных форм, белок от 4,5 до 11% и хлорид натрия - не более 0,3%. Изобретение позволяет уменьшить риск возникновения побочных реакций при терапии иммуноглобулинами, обеспечить возможность механизации и автоматизации процесса получения препарата иммуноглобулина, а также увеличить срок хранения этих препаратов. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл.

Изобретения относится к способу получения IgG (иммуноглобулина G) из плазмы для медицинских применений. Способ включает в себя следующие стадии: (1') удаляют альбумин, получая в результате фракцию IgG, далее проводят стадию (1'), где концентрируют фракцию IgG, полученную на стадии (1'); (2') очищают эту фракцию IgG на анионите и собирают несвязанную фракцию IgG, (3') очищают эту несвязанную фракцию, IgG путем адсорбции на катионите и собирают связанную фракцию IgG, при этом осуществляют (II), где доводят рН фракции IgG, выделенной с катионита на стадии (3'), до 4±0,1, и предпочтительно поддерживают рН в течение остальных стадий способа меньше 6,0 и (4') осуществляют инактивацию вируса во фракции IgG, полученной из фракции IgG, собранной на стадии (3') путем использования химических продуктов при температуре 30°С±2°С в течение по меньшей мере 4 часов. Способ позволяет получить IgG, который обладает антикомплементной активностью типично меньше 1 титра комплемента, обусловливающего 50% гемолиз (СН₅₀)/мг иммуноглобулина. 6 з.п. ф-лы, 1 ил.