способ определения биологического возраста трупа при повторной кровопотере

Формула изобретения

Способ определения биологического возраста трупа при повторной кровопотере, заключающийся в том, что в сосочковом слое дермы неповрежденной кожи определяют экспрессию следующих иммуногистохимических маркеров на 1 мкм²: elastin, fibrillin, amyloid Р, vitronectin, fibulin-5; и при величине elastin менее 11,0%, величине fibrillin менее 6,0%, величине amyloid Р менее 0,2%, величине vitronectin менее 0,1%, величине fibulin-5 более 57,0% делают вывод о биологическом возрасте трупа 5-10 лет; при величине elastin 43,0-64,0%), величине fibrillin 23,0-47,0%, величине amyloid Р 3,5-7,8%, величине vitronectin 4,6-6,8%, величине fibulin-5 0,5-4,7% делают вывод о биологическом возрасте трупа 35-45 лет; при величине elastin менее 3,0%, величине fibrillin менее 1,5%, величине amyloid Р более 27,0%), величине vitronectin более 12,0%, величине fibulin-5 менее 0,1% делают вывод о биологическом возрасте трупа 70-85 лет.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к судебной медицине, в частности к судебно-медицинской экспертизе.

На сегодняшний день не выявлены объективные признаки определения возраста человека при повторной кровопотере, являющейся причиной хронической постгеморрагической анемии.

Известен способ определения возраста человека по степени стирания зубов верхней челюсти (Герасимов М.Г. Восстановление лица по черепу. - М., 1955).

Недостатки: невозможность использования способа при повторной кровопотере и хронической постгеморрагической анемии, а также других видах анемии вследствие выраженных изменений дентина, пульпы и тканей перидонта (Benoist Н.М., Seek Diallo А., Diop S. Et all. // Dakar Med. - 2008. - Vol.53. - № 2. - P.91-98; Hatipoglu M.G., Cagirankaya L.B., et all. // Eur J Dent. - 2012. - Vol.6. - № 1. - P.95-100).

Известен способ определения возраста человека по степени заращения швов черепа (Самищенко С.С. Судебная медицина: Учебник для юридических вузов. OCR Палек, 1998 г.).

Недостатки: невозможность использования способа при повторной кровопотере, хронической постгеморрагической анемии, заболеваниях костно-суставной системы и нарушении обмена кальция, когда нарушается процесс заращения швов черепа (Reimann F., Gökmen М., Inceman S. // Blut. - 1968. - Vol.17. - № 4. - P.214-226; Rutten E.P., Franssen F.M., Spruit M.A., Wouters E.F. // COPD. 2012 Dec 28 [Epub ahead of print]).

Известен способ определения возраста человека по показателям функционального состояния кожи (Александрова И.И. Нестеров М.А. // Избранные вопросы судебной медицины и экспертной практики. - Хабаровск, 1998. - № 1. - С.58-59).

Недостатки: результаты определения возраста с использованием данного способа недостаточно точны и зависят от социальных условий и биологических особенностей (условий жизни и питания, наследственности, перенесенных заболеваний, физических нагрузок, профессии); данный способ возможен только на неповрежденной коже.

Задачей изобретения является способ определения биологического возраста трупа при повторной кровопотере.

Поставленная задача решается способом, заключающимся в том, что в сосочковом слое дермы неповрежденной кожи определяют экспрессию следующих иммуногистохимических маркеров на 1 мкм: elastin, fibrillin, amyloid Р, vitronectin, fibulin-5; и при величине elastin менее 11,0%, величине fibrillin менее 6,0%, величине amyloid Р менее 0,2%, величине vitronectin менее 0,1%, величине fibulin-5 более 57,0% делают вывод о биологическом возрасте трупа 5-10 лет; при величине elastin 43,0-64,0%, величине fibrillin 23,0-47,0%, величине amyloid Р 3,5-7,8%, величине vitronectin 4,6-6,8%, величине fibulin-5 0,5-4,7% делают вывод о биологическом возрасте трупа 35-45 лет; при величине elastin менее 3,0%, величине fibrillin менее 1,5%, величине amyloid Р более 27,0%, величине vitronectin более 12,0%, величине fibulin-5 менее 0,1% делают вывод о биологическом возрасте трупа 70-85 лет.

Способ осуществляют гистологическим исследованием тканей по (Саркисов Д.С., Перов Ю.Л. Микроскопическая техника. М. - Медицина. - 1996 г. - С.4-50, 339-445) следующим образом:

1. Исследуют участки неповрежденной кожи семи областей тела: шеи, груди, спины, ягодицы, передневнутренней поверхности бедра, передней поверхности предплечья и подошвенной поверхности стопы. На шее кусочек кожи вырезают с передней ее поверхности, на 0,5 см ниже проекции нижнего края щитовидного хряща, на груди - по срединной линии на уровне 4-го межреберья, на спине - в межлопаточной области, в проекции остистых отростков 4-5 грудных позвонков по срединной линии, на ягодице - с центральной ее части, на бедре - в области передневнутренней его поверхности на границе верхней и средней трети, на предплечье - на передней его поверхности на середине расстояния между проекцией локтевого и лучезапястного суставов, на подошвенной поверхности стопы - в области свода стопы на середине расстояния между проекцией головок плюсневых костей и пяточного бугра.

2. Кусочки фиксируют в 10% нейтральном забуференном формалине в течение 24 часов.

3. Материал промывают в проточной воде в течение 30 минут, а затем подвергается обезвоживанию и заливке в парафин по следующей схеме: спирт 60,0% - 2 часа, спирт 70,0% - 2 часа, спирт 96,0% - 2 часа, спирт 96,0% - 2 часа, спирт + ксилол (1:1) - 2 часа, ксилол + парафин (1:1) - 2 часа, парафин I 56° - 2 часа, парафин II 56° - 1 час.

4. Кусочки заливают в парафиновые блоки.

5. На ротационном микротоме изготавливают гистологические срезы толщиной 4-6 микрон.

6. Срезы подвергают депарафинизации и антигенной демаскировке в 0,1 М цитратном буфере pH 6,0 в течение 30 минут (Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека / под ред. С.В. Петрова, Н.Т. Райхлина. - Казань: Титул, 2004).

7. Осуществляют обработку срезов следующими первичными антителами: monoclonal mouse а Hu elastin Clone ВА-4 (фирма Santa cruz); polyclonal rabbit a Hu fibrillin-1 Clone H-109 (фирма Santa cruz); monoclonal mouse a Hu Amyloid P Clone 318-6-11 (фирма Santa cruz); polyclonal rabbit a Hu vitronectin Clone H-202 (фирма Santa cruz); polyclonal rabbit a Hu fibulin-5 Clone H-60 (фирма Santa cruz) (Петров С.В., Райхлин H.T., см. выше).

8. Срезы обрабатывают реагентами системы визуализации En Vision + System-HRP (DAV), code K4010 (фирма Dako) (Петров С.В., Райхлин Н.Т., см. выше).

10. Полученные данные обрабатывают статистически по методу Стъюдента-Фишера с 95%-ным уровнем статистической достоверности с определением средней арифметической М, средней ошибки средней арифметической т, средней ошибки относительных величин m_p и коэффициента достоверности разности t. Также статистическую обработку производят с использованием таблиц сопряженности, критерия ² и метода множественных сравнений с поправкой Бонферрони (Гланц С. Медико-биологическая статистика. Пер. с англ. - М., Практика, 1998. - 459 с.).

С помощью данных методов изучались ткани кожи, полученные при судебно-медицинском исследовании 50 трупов (26 лиц мужского пола и 24 лица женского пола) в возрасте от 5 до 85 лет, не имеющих повреждений и патологических изменений кожи, при наличии признаков повторной кровопотери и хронической постгеморрагической анемии.

Проведенный статистический анализ установил, что иимуногистохимические маркеры elastin, fibrillin, amyloid Р, vitronectin, fibulin-5 можно использовать для определения биологического возраста человека при наличии признаков повторной кровопотери и хронической постгеморрагической анемии.

Способ определения биологического возраста трупа по фрагментам неповрежденной кожи апробирован на кафедре судебной медицины Первого Московского Государственного медицинского университета им. И.М. Сеченова и имеет большое практическое значение.

Пример.

Согласно акту судебно-медицинского исследования на месте происшествия был обнаружен труп мужчины с ожоговой травмой лица и колото-резаной раной в области правого плеча. Повреждение кожи лица затрудняло определение возраста трупа пострадавшего. Следственные органы интересовали следующие вопросы: 1. Могло ли ранение в области правого плеча привести к смерти? 2. Биологический возраст трупа.

При судебно-медицинском исследовании у пострадавшего выявлена хроническая язва тела желудка с внутрижелудочным кровотечением недельной давности, а также морфологические признаки хронической постгеморрагической анемии. Повторная кровопотеря в небольшом объеме из раны в области плеча усугубила состояние пострадавшего, что и явилось непосредственной причиной смерти. Для определения характера кровопотери были использованы способ диагностики рецидивирующей кровопотери (патент на изобретение Российской Федерации № 2466391), а также способ определения длительности терминального периода при острой кровопотере (патент на изобретение Российской Федерации № 2453844).

Учитывая наличие хронической постгеморрагической анемии, было невозможно использовать стандартные способы определения биологического возраста человека.

При иммуногистохимическом исследовании в сосочковом слое дермы выявлена позитивная экспрессия следующих маркеров на 1 мкм²: elastin 45,6%, fibrillin 32,4%, amyloid Р 4,1%, vitronectin 5,5%, fibulin-5 0,9%.

На основании указанных признаков был сделан вывод, что биологический возраст трупа составляет 35-45 лет (нормативные данные для этой возрастной группы составляют: elastin 43,0-64,0%, fibrillin 23,0-47,0%, amyloid Р 3,5-7,8%, vitronectin 4,6-6,8%, fibulin-5 0,5-4,7%).

Способ по изобретению позволяет определять биологический возраст человека и более объективно решать задачи, поставленные перед судебно-медицинским экспертом следственными органами.