способ контроля качества дезинфекции птицеводческих помещений

Формула изобретения

Способ контроля качества дезинфекции птицеводческих помещений, предусматривающий дезинфекцию помещения, отбор тест-объектов, представляющих собой суспензию Bacillus subtillis штамма АТСС-РТА 6737 (РВ6) на носителе - фильтровальной бумаге с клейким участком поверхности, помещение тест-объектов в питательную среду, прогрев пробирок с тест-объектами на водяной бане до 60-80^° С, культивирование при 37^°С в течение 12-24 часов с последующим учетом результата путем регистрации роста бактерий через 12 часов - помутнение питательной среды с образованием слизистой пленки свидетельствует об неудовлетворительном качестве дезинфекции, отсутствие помутнения и образования пленки через 24 часа- об удовлетворительной дезинфекции.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарной санитарии, а именно к способам контроля качества аэрозольной и газовой дезинфекции помещений для содержания птицы.

Известен метод контроля качества дезинфекции, основанный на микробиологических методах, предложенный А.А.Поляковым в 1957 году (Поляков А.А. Еще раз о теории и практике ветеринарной дезинфекции / А.А.Поляков, А.В.Куликовский // - Ветеринария. - 1989. - № 2. - С.19-23). Критерий этого метода - наличие или отсутствие в исследуемых объектах бактерий группы кишечной палочки.

Также качество дезинфекции можно определять по отсутствию стафилококков (Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора"(утв. Минсельхозом РФ 15.07.2002 N 13-5-2/0525)).

Данные методы не позволяют достоверно подтвердить отсутствие более устойчивой микрофлоры на объекте, т.к. указанные тестовые микроорганизмы, по степени устойчивости к дезинфектантам, относятся ко второй группе, а большинство патогенных микроорганизмов, имеющих значение для птицеводства, по устойчивости относятся ко второй и третьей группам: возбудители сальмонеллеза, гриппа, бурсальной болезни, реовирусного теносиновита, оспы птиц.

Прототипом предлагаемого метода является биотест, основанный на уничтожении спор штамма Bacillus stearothermophilus ВКМ В-718, нанесенных на тест-объект (Санитарные правила СП 1.2.011-94. Госкомсанэпиднадзор России. М., 1994, с.138). Однако культивирование данного микроорганизма требует дорогостоящих питательных сред и температурный режим 55°С.

Задачей заявляемого решения является расширение арсенала способов контроля качества дезинфекции помещений для содержания птицы.

Поставленная задача решается тем, что в способе контроля качества дезинфекции птицеводческих помещений, включающем размещение в помещении до дезинфекции тест-объектов на носителе, с нанесенным на них тестовым микроорганизмом - спорами Bacillus subtilis, согласно изобретению, в качестве тестового микроорганизма используют штамм Bacillus subtilis АТСС-РТА 6737 (РВ6).

Сущность изобретения заключается также в том, что в качестве носителя используют фильтровальную бумагу с клейким участком поверхности.

Сущность изобретения заключается также в том, что культивирование проводят при 37°С в течение 1 суток на мясопептонном бульоне. Способ осуществляют следующим образом:

Материалы и оборудование: термостат 37°С, водяная баня 70-80°С, сушильный шкаф 70°С, центрифуга 10 G, шейкер, шредер, бактериологические пробирки со стерильным МПБ, фильтровальная бумага, двусторонняя липкая лента, физиологический раствор.

Протокол получения тест-объекта:

1. Наращивание бак. массы: культивировать Bacillus subtilis РВ6 на МПБ с использованием шейкера для аэрации и увеличения скорости накопления бак. массы при 37°С - 2 суток.

2. Перевод вегетативной формы в споровую: анаэробные условия - 1 сутки.

3. Отмывка и концентрация спор: центрифугировать суспензию спор в питательной среде при 10 G - 20 мин. Удалить супернатант и ресуспендировать натант в дистиллированной воде в соотношении 1:100.

4. Сорбция спор на носитель - погрузить фильтровальную бумагу «синяя лента» в суспензию спор, высушить в сушильном шкафу при 60-70°С.

5. Изготовление тест-полосок: нанести на лист носителя полосы двусторонней липкой ленты шириной 1 см с интервалом 5 см и пропустить через шредер в поперечном направлении.

6. Хранение: при 2-8°С и относительной влажности воздуха не более 20% - 2 года.

Образцы для исследования: тест-объекты, подвергнутые дезинфекции, отбирать после удаления или инактивации дезинфектанта в период 0-6 часов.

Протокол контроля качества дезинфекции:

1. Размещают тест-объекты в объекте дезинфекции заблаговременно или непосредственно перед ее началом.

2. Дезинфицируют объект аэрозолем или газом.

3. После удаления или инактивации дезинфектанта, асептично отбирают тест-объекты целиком, отделяя их стерильным пинцетом, или частично, отсекая концевую часть полоски стерильными ножницами и помещают в бактериологические пробирки с МПБ.

4. Прогревают пробирки с объектами в МПБ на водяной бане при 80°С в течение 20 минут для уменьшения риска вторичной контаминации.

5. Культивируют отобранный материал при 37°С 12-24 часа. Через 12 часов можно констатировать рост, а через 24 - его отсутствие.

6. Интерпретируют результат исследования в зависимости от отсутствия или наличия роста Bacillus subtilis (помутнение МПБ с образованием слизистой пленки на поверхности питательной среды) как отрицательный или положительный.

Испытания метода контроля качества дезинфекции в биотесте со спорами B.subtilis штамма АТСС-РТА 6737 (РВ6) в сравнении с референтными методиками проводили при объемной дезинфекции птичников для напольного и клеточного методов содержания цыплят-бройлеров с использованием аппарата для генерации аэрозоля АГ-УД-2 и препарата «Вироцид» 2% из расчета 1 л/40 м (табл.1) и аппарата «АИСТ-2М» с формалином из расчета 20 мл/м (табл.2) при экспозиции - 12 часов.

Бактериальную обсемененность помещений контролировали после выгрузки из помещений птицы до этапа механической очистки (мойки) помещений и после мойки - референтными способами: обнаружение бактерий группы кишечной палочки и рода Staphylococcus, а после дезинфекции - и испытуемым методом. Отбирали с поверхностей помещения по 20 проб материала (смывы с участка 10 10 см или тест-объекты) с разных уровней по вертикали и горизонтали помещения для бактериологического исследования.

Учет результатов исследования референтными методиками проводили через 2 суток после посева, а испытуемой - через 1 сутки.

Таблица 1
Дезинфекция аппаратом АГ-УД-2 препаратом «Вироцид» 2% из расчета 1 л/40 м с экспозицией 12 часов		Бактерии группы кишечной палочки, положительных проб, %	Staphylococcus spp., положительных проб, %	Биотест со спорами В.subtilis, положительных проб, %
Корпус напольного содержания бройлера, 20 проб	до мойки и дезинфекции	85	100	Не проводили
	После мойки	35	80	Не проводили
	После дезинфекции	0	5	10
Корпус клеточного содержания бройлера, 20 проб	до мойки и дезинфекции	90	100	Не проводили
	После мойки	40	80	Не проводили
	После дезинфекции	0	10	15

Представленные данные свидетельствуют, что предложенный способ контроля качества дезинфекции может быть использован для контроля объемной аэрозольной дезинфекции с применением аппарата АГ-УД-2 и дезинфектанта «Вироцид» в концентрации 2% при насыщении 1 л/40 м с экспозицией 12 часов.

Таблица 2
Дезинфекция аппаратом АИСТ-2М препаратом формалин из расчета 20 мл/м3 с экспозицией 12 часов и нейтрализацией аэрозолем 5% водного раствора аммиака из расчета 15 мл/м		Бактерии группы кишечной палочки, положительных проб, %	Staphylococcus spp., положительных проб, %	Биотест со спорами B.subtilis, положительных проб, %
Корпус клеточного содержания бройлера, 20 проб	до мойки и дезинфекции	75	100	Не проводили
	После мойки	30	85	Не проводили
	После дезинфекции	0	0	0
Корпус клеточного содержания бройлера, 20 проб	до мойки и дезинфекции	95	100	Не проводили
	После мойки	45	75	Не проводили
	После дезинфекции	0	0	0

Представленные данные также свидетельствуют, что предложенный способ контроля качества дезинфекции может быть использован для контроля объемной аэрозольной дезинфекции с применением аппарата АИСТ-2М препаратом формалин из расчета 20 мл/м³ с экспозицией 12 часов и нейтрализацией аэрозолем 5% водного раствора аммиака из расчета 15 мл/м³.

Представленные в таблицах данные свидетельствуют о большей, в сравнении с референтными методами, чувствительности и надежности способа, а использование в нем режима культивирования при 37°С в течение 1 суток на МПБ обеспечивает скорость исследования - 1 сутки.