способ лечения зависимости от психоактивных веществ, алкоголизма и табакокурения и лекарственное средство для лечения зависимости от психоактивных веществ, алкоголизма и табакокурения

Формула изобретения

1. Способ лечения зависимости от алкоголизма и табакокурения путем введения в организм активированной потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100, характеризующийся тем, что дополнительно одновременно и сочетанно вводят усиливающий компонент в виде активированной потенцированной формы антител к каннабиноидному рецептору человека.

2. Способ по п.1, характеризующийся тем, что в качестве дополнительного усиливающего компонента используют активированную потенцированную форму антител к каннабиноидному рецептору I типа человека.

3. Способ по п.1 или 2, характеризующийся тем, что активированную потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированную потенцированную форму антител к каннабиноидному рецептору I типа человека используют в виде активированного потенцированного водного или водно-спиртового раствора каждого компонента, полученного в процессе последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - встряхиванием каждого разведения.

4. Способ лечения по п.1 или 2, характеризующийся тем, что используют приготовленную в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы смесь различных гомеопатических разведений антител к мозгоспецифическому белку S-100 в сочетании со смесью различных разведений антител к каннабиноидному рецептору I типа человека, приготовленных по гомеопатической технологии.

5. Лекарственное средство для лечения зависимости от алкоголизма и табакокурения, содержащее активированную потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100, отличающееся тем, что выполнено в виде фармацевтической композиции и дополнительно содержит усиливающий компонент в виде активированной потенцированной формы антител к каннабиноидному рецептору человека.

6. Лекарственное средство по п.5, отличающееся тем, что в качестве дополнительного усиливающего компонента используют активированную потенцированную форму антител к каннабиноидному рецептору I типа человека.

7. Лекарственное средство по п.6, отличающееся тем, что активированную потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированную потенцированную форму антител к каннабиноидному рецептору I типа человека используют в виде активированного потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - встряхиванием каждого разведения.

8. Лекарственное средство по п.5 или 7 отличающееся тем, что фармацевтическая композиция выполнена в твердой лекарственной форме и содержит эффективное количество насыщенных активированной потенцированной формой антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированной потенцированной формой антител к каннабиноидному рецептору человека гранул нейтрального носителя и фармацевтически приемлемые добавки.

9. Лекарственное средство по п.5 или 7, отличающееся тем, что водные или водно-спиртовые растворы активированных потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к каннабиноидному рецептору человека получены путем многократного последовательного разведения в сочетании с внешним воздействием каждого разведения из матричных растворов антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к каннабиноидному рецептору человека с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

10. Лекарственное средство по п.5 или 7, отличающееся тем, что каждый из компонентов на основе активированных потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к каннабиноидному рецептору человека используют в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведений, полученных по гомеопатической технологии.

11. Лекарственное средство по п.8, характеризующееся тем, что фармацевтически приемлемые добавки включают лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для лечения зависимости от психоактивных веществ, в том числе алкоголизма и табакокурения.

Из уровня техники известно нейротропное лекарственное средство для лечения алкоголизма на основе активированной формы сверхмалых доз антител к мозгоспецифическому белку S-100 (RU 2156621 C1, A61K 39/395, 27.09.2000). Однако данное лекарственное средство не во всех случаях лечения привыкания к наркотическому веществу обеспечивает достаточную терапевтическую эффективность.

Изобретение направлено на создание лекарственного средства, обеспечивающего повышение эффективности лечения зависимости, преимущественно, от алкоголя, никотина и других психоактивных веществ, включая психотропные лекарственные препараты.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что в способе лечения зависимости от психоактивных веществ, преимущественно, алкоголизма и табакокурения путем введения в организм активированной потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100, согласно изобретению, дополнительно одновременно и сочетано вводят активированную потенцированную форму сверхмалых доз аффинно очищенных антител к каннабиноидному рецептору человека, предпочтительно к каннабиноидному рецептору человека I типа.

При этом активированную потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированную потенцированную форму антител к каннабиноидному рецептору человека I типа используют в виде активированного потенцированного водного или водно-спиртового раствора каждого компонента, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения.

Причем используют приготовленную в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы смесь различных разведений антител к мозгоспецифическому белку S-100 в сочетании со смесью различных разведений антител к каннабиноидному рецептору человека I типа, приготовленных по гомеопатической технологии.

Решение поставленной задачи обеспечивается также тем, что лекарственное средство для лечения зависимости от психоактивных веществ, преимущественно алкоголизма и табакокурения, содержащее активированную потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100, согласно изобретению, выполнено в виде фармацевтической композиции и содержит в качестве дополнительного усиливающего компонента активированную потенцированную форму антител к каннабиноидному рецептору человека, предпочтительно к каннабиноидному рецептору человека I типа.

При этом активированную потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированную потенцированную форму антител к каннабиноидному рецептору человека I типа используют в виде активированного потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом многократного последовательного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения.

Кроме того, фармацевтическая композиция может быть выполнена в твердой лекарственной форме, которая содержит эффективное количество гранул нейтрального носителя, насыщенного смесью активированной потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированной потенцированной формы антител к каннабиноидному рецептору человека, и фармацевтически приемлемые добавки, которые включают лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

При этом водные или водно-спиртовые растворы активированных потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к каннабиноидному рецептору человека получены путем многократного последовательного разведения в сочетании с внешним воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения из матричных растворов аффинно очищенных антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к каннабиноидному рецептору человека с концентрацией 0,5-5,0 мг/мл.

Кроме того, каждый из компонентов сверхмалых доз аффинно очищенных антител используют в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведений, приготовленных по гомеопатической технологии.

При этом лекарственное средство содержит действующие компоненты в объемном соотношении 1:1, при этом каждый компонент используют в виде смеси трех соответствующих матричных растворов, разведенных, соответственно, в 100¹² , 100³⁰, и 100²⁰⁰ раз, что эквивалентно сотенным разведениям С12, С30, С200, приготовленным по гомеопатической технологии.

Заявленную фармацевтическую композицию рекомендуется принимать, предпочтительно, по 1-2 таблетке 2-6 раз в день.

Заявленное техническое решение может быть использовано как для терапии психического влечения к психоактивным веществам, в том числе к алкоголю и табакокурению, так и для лечения психосоматических расстройств, связанных с лишением психоактивного вещества - абстинентными состояниями.

Кроме того, заявленное лекарственное средство может быть использовано в комплексной терапии с другими нейропсихотропными препаратами, применяемыми для лечения аддиктивных состояний.

При лечении зависимости от психоактивных веществ, алкоголизма и табакокурения возможно раздельное, но сочетанное и одновременное применение (введение в организм) в виде двух отдельно приготовленных препаратов, как в виде растворов, так и в твердых лекарственных формах (таблеток), каждый из которых содержит активированную потенцированную форму сверхмалых доз аффинно очищенных антител к мозгоспецифическому белку S-100 и, соответственно, активированную потенцированную форму сверхмалых доз аффинно очищенных антител к каннабиноидному рецептору человека.

Предложенное сочетание активированных потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к каннабиноидному рецептору I типа человека в фармацевтической композиции (т.е. форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к каннабиноидному рецептору I типа человека, приготовленных по гомеопатической технологии потенцирования путем многократного последовательного разведения в сочетании с внешним воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения (см., например, В.Швабе "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967 г., с.14-29), которые обладают активностью в фармакологических моделях и/или клинических методах лечения зависимости от психоактивных веществ, преимущественно алкоголизма и табакокурения) обеспечивает получение неожиданного синергетического терапевтического эффекта, подтвержденного на адекватных (валидных) экспериментальных моделях и клинических исследованиях. При этом заявленное лекарственное средство модулирует систему позитивного эмоционального подкрепления, уменьшая тем самым выраженность влечения к психоактивным веществам, в том числе при алкоголизме и никотинизме, нормализует баланс нейромедиаторов в центральной нервной системе, улучшает нейропротекторную активность, повышает устойчивость мозга к токсическим воздействиям, улучшает интегративную деятельность, способствует устранению когнитивных нарушений, повышает умственную работоспособность, нормализует соматовегетативные проявления при абстинентных состояниях. В результате этого устраняется раздражительность, повышается настроение, устраняется внутренний дискомфорт, устраняются мысли о никотине или алкоголе, повышается работоспособность, аппетит, устраняется потливость, тахикардия и общая слабость, а также другие аффективные, идеаторные и астеновегетативные нарушения; повышается качество жизни. При этом заявленное нейротропное лекарственное средство не оказывает седативного, миорелаксантного действия, не вызывает привыкания, лекарственной зависимости, не обладает наркогенным потенциалом и другими побочными явлениями и обладает расширенным терапевтическим диапазоном при лечении зависимости от психоактивных веществ.

Кроме того, заявленное лекарственное средство расширяет арсенал препаратов, предназначенных для лечения зависимости от психоактивных веществ.

Лекарственный препарат приготовляют следующим образом.

Для приготовления активированной потенцированной формы действующих компонентов используют моноклональные или, преимущественно, поликлональные антитела, которые могут быть получены по известным технологиям - методикам, описанным, например, в книге: Иммунологические методы, под ред. Г.Фримеля, М., «Медицина», 1987, с.9-33; или, например, в статье Laffly E., Sodoyer R.Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. - 2005 - Vol.14. - N 1-2. P.33-55.

Моноклональные антитела получают, например, с помощью гибридомной технологии. Причем начальная стадия процесса включает иммунизацию, основанную на принципах, уже разработанных при приготовлении поликлональных антисывороток. Дальнейшие этапы работы предусматривают получение гибридных клеток, продуцирующих клоны одинаковых по специфичности антител. Их выделение в индивидуальном виде проводится теми же методами, что и в случае поликлональных антисывороток.

Поликлональные антитела могут быть получены активной иммунизацией животных. Для этого по специально разработанной схеме животным делают серию инъекций требуемыми в соответствии с изобретением веществами - антигенами: мозгоспецифическим белком S-100 и каннабиноидным рецептором человека I типа. В результате проведения такой процедуры получают моноспецифические антисыворотки с высоким содержанием антител, которые используют для получения активированных потенцированных форм. При необходимости проводят очистку антител, присутствующих в антисыворотке, например, методом аффинной хроматографии, путем применения фракционирования солевым осаждением или ионообменной хроматографии.

Предпочтительным для приготовления заявленной фармацевтической композиции является использование поликлональных антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к каннабиноидному рецептору человека I типа, которые в качестве матричного (первичного) раствора с концентрацией 0,5-5,0 мг/мл используют для последующего приготовления активированной потенцированной формы.

Предпочтительной для приготовления каждого компонента является использование смеси трех водно-спиртовых разведений первичного матричного раствора антител, разведенных, соответственно, в 100¹², 100³⁰, и 100 ²⁰⁰ раз, что соответствует сотенным разведениям С12, С30 и С200, приготовленных по гомеопатической технологии. При выполнении заявленного лекарственного средства в твердой лекарственной форме на лактозу наносится смесь указанных компонентов.

Предпочтительным для приготовления заявленного лекарственного препарата является использование поликлональных антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к каннабиноидному рецептору человека I типа, которые могут быть получены иммунизацией кроликов следующим образом.

Пример 1.

Для проведения экспериментальных исследований были использованы антитела, приготовленные по заказу специализированной биотехнологической фирмой.

Для иммунизации кроликов используют в качестве иммуногена (антигена) адъювант и цельную молекулу каннабиноидного рецептора I типа человека:

или, преимущественно, полипептидный фрагмент каннабиноидного рецептора I типа человека, выбираемый, например, из следующей группы:

Перед отбором крови за 7-9 дней проводят 1-3 внутривенных инъекций для повышения уровня антител. В процессе иммунизации у кроликов отбирают небольшие пробы крови для оценки количества антител. Максимальный уровень иммунного ответа на введение большинства растворимых антигенов достигается через 40-60 дней после первой инъекции. После окончания первого цикла иммунизации кроликов в течение 30 дней дают восстановить здоровье и проводят реиммунизацию, включающую 1-3 внутривенные инъекции. Для получения антисыворотки из иммунизированных кроликов собирают кровь в центрифужную пробирку объемом 50 мл. С помощью деревянного шпателя удаляют со стенок пробирки образовавшиеся сгустки и помещают палочку в сгусток, образовавшийся в центре пробирки. Кровь помещают в холодильник (температура 4°С) на ночь. На следующий день удаляют сгусток, прикрепившийся к шпателю, и центрифугируют оставшуюся жидкость при 13000g в течение 10 мин. Супернатант (надосадочная жидкость) является антисывороткой. Полученная антисыворотка должна быть желтого цвета. Добавляют к антисыворотке 20% (весовая концентрация) NaN₃ до конечной концентрации 0,02% и хранят до использования в замороженном состоянии при температуре -20°С (или без добавления NaN₃ - при температуре -70°С). Для выделения из антисыворотки антител к каннабиноидному рецептору I типа человека производят абсорбцию на твердой фазе в следующей последовательности:

1) 10 мл антисыворотки кролика разбавляют в 2 раза 0,15 М NaCl добавляют 6,26 г Na₂ SO₄, перемешивают и инкубируют 12-16 ч при 4°С;

2) выпавший осадок удаляют центрифугированием, растворяют в 10 мл фосфатного буфера и затем диализуют против того же буфера в течение ночи при комнатной температуре;

3) после удаления осадка центрифугированием раствор наносят на колонку с ДЭАЭ-целлюлозой, уравновешенную фосфатным буфером;

4) фракцию антител определяют, измеряя оптическую плотность элюата при 280 нм.

Затем производят очистку антител методом аффинной хроматографии путем прикрепления полученных антител к каннабиноидному рецептору I типа человека, который находится на нерастворимом матриксе с последующим элюированием концентрированными растворами соли.

Для получения поликлональных антител к мозгоспецифическому белку S-100 используют мозгоспецифический белок S-100, физико-химические свойства которого описаны в статье М.В.Старостина, С.М.Свиридов, Нейроспецифический белок S-100, Успехи современной биологии, 1977 г., т.5, с.170-178; книге М.Б.Штарк, Мозгоспецифические белки /антигены/ и функции нейрона, М., "Медицина", 1985 г.; с.12-14, выделенный из ткани головного мозга быка по следующей методике:

- замороженную в жидком азоте ткань растирают в порошок на специальной мельнице;

- экстракцию белков проводят в соотношении 1:3 (вес/объем) в экстрагирующем буфере при гомогенизации;

- гомогенат прогревают в течение 10 мин при 60°С и охлаждают до 4°С на ледяной бане;

- термолабильные белки удаляют центрифугированием;

- проводят ступенчатое фракционирование сульфатом аммония с последующим удалением выпадающих в осадок примесных белков;

- содержащую белок S-100 фракцию осаждают 100% насыщенным сульфатом аммония при снижении pH до 4,0 и собирают центрифугированием;

- осадок растворяют в минимальном объеме буфера, содержащего ЭДТА и меркаптоэтанол, диализируют против деионизованной воды и лиофильно высушивают;

- фракционирование кислых белков продолжают хроматографией на ионообменных носителях - ДЭАЭ целлюлозе ДЕ-52 и затем ДЭАЭ-сефадексе А-50;

- собранные и отдиализованные фракции, содержащие белок S-100, разделяют по молекулярному весу гель-фильтрацией на сефадексе G-100;

- очищенный белок S-100 диализируют и лиофильно высушивают.

Молекулярный вес очищенного мозгоспецифического белка S-100 составляет - 21000 Дал.

Благодаря высокому содержанию аспарагиновой и глутаминовой кислот мозгоспецифический белок S-100 является сильнокислым и занимает крайнее анодное положение при электрофорезе в прерывистой буферной системе в полиакриламидном геле, что облегчает его идентификацию.

Для получения мозгоспецифической антисыворотки к выделенному мозгоспецифическому белку S-100 готовят смесь очищенного белка S-100 (антигена) в комплексе с метилированным бычьим сывороточным альбумином в качестве носителя с полным адъювантом Фрейнда, которую вводят подкожно лабораторному животному - кролику в область спины в количестве 1-2 мл. На 8-й, 15-й день проводят повторную иммунизацию. Забор крови производят (например, из вены уха) на 26-й и 28-й день.

Полученная антисыворотка имеет титр 1:500-1:1000, образует единственную полосу преципитации с экстрактом из нервной ткани, но не реагирует с экстрактами гетерологичных органов и формирует единственный пик преципитации как с чистым белком S-100, так и с экстрактом нервной ткани, что свидетельствует о моноспецифичности полученной антисыворотки.

Полученные таким образом буферные растворы каждого компонента поликлональных антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к и каннабиноидному рецептору I типа человека с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, предпочтительно 2,0÷3,0 мг/мл, используют в качестве матричных (первичных) растворов для последующего приготовления активированных потенцированных форм лекарственного средства.

Активированную потенцированную форму каждого компонента готовят путем равномерного уменьшения концентрации в результате последовательного разведения 1 части упомянутого матричного раствора в 9 частях (для десятичного разведения D), или в 99 частях (для сотенного разведения С), или в 999 частях (для тысячного разведения М) нейтрального растворителя с многократным вертикальным встряхиванием ("динамизацией") каждого полученного разведения и использованием отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой потенции - кратности разведения по гомеопатическому методу (см., например, В.Швабе "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967 г., с.14-29).

Внешнюю обработку в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.

Например, для приготовления 12-го сотенного разведения С12 одну часть упомянутого матричного раствора антител к мозгоспецифическому белку S-100 (или к каннабиноидному рецептору человека I типа) с концентрацией 3,0 мг/мл разводят в 99 частях нейтрального водного или водно-спиртового растворителя (преимущественно 70% этилового спирта) и многократно (10 и более раз) вертикально встряхивают - потенцируют полученное 1-е сотенное С1 разведение. Из 1-го сотенного С1 разведения приготовляют 2-е сотенное разведение С2. Данную операцию повторяют 11 раз, получая 12-е сотенное разведение С12. Таким образом, 12-е сотенное разведение С12 представляет собой раствор, полученный разбавлением последовательно в разных емкостях 12 раз 1-й части исходного матричного раствора антител к мозгоспецифическому белку S- 100 с концентрацией 3,0 мг/мл в 99-ти частях нейтрального растворителя, раствор, приготовленный разведением матричного раствора в 100¹² раз. Аналогичные операции с соответствующей кратностью разведения проводят для получения разведений С30 и С200.

При использовании в качестве биологически активного жидкого компонента смеси различных, преимущественно сотенных, разведений действующего вещества, приготовленных по гомеопатической технологии, каждый компонент состава (например, С12, С30, С200) приготовляют раздельно по описанной выше технологии до их предпоследнего разведения (соответственно, до получения С11, С29, С199) и затем вносят в соответствии с составом смеси в одну емкость по одной части каждого компонента и смешивают с требуемым количеством растворителя (соответственно, с 97 частями для сотенного разведения). При этом получают активированную потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением матричного раствора, соответственно в 100¹², 100³⁰ и 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных разведений С12, С30 и С200, приготовленных по гомеопатической технологии.

Возможно использование действующего вещества в виде смеси других различных разведений, например, десятичных и/или сотенных (D20, С30, С100 или С12, С30, С50 и т.д.), приготовленных по гомеопатической технологии, эффективность которых определяют экспериментально.

При потенцировании вместо встряхивания в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять внешнее воздействие ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.

Для получения заявленной фармацевтической композиции водные или водно-спиртовые растворы действующих компонентов смешивают, преимущественно, в объемном соотношении 1:1 и используют в жидкой лекарственной форме.

Заявленная фармацевтическая композиция может быть использована и в твердой лекарственной форме, которая содержит эффективное количество гранул нейтрального носителя - лактозы, насыщенного путем пропитывания до насыщения смесью водных или водно-спиртовых растворов активированной потенцированной формой антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированной потенцированной формой антител к каннабиноидному рецептору человека I типа, и фармацевтически приемлемые добавки, включающие, преимущественно, лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

Для получения твердой оральной формы заявленного лекарственного средства производят в установке кипящего слоя (например, типа «Huttlin Pilotlab» производства компании Huttlin GmbH) орошение до насыщения вводимых в псевдоожиженный - кипящий слой гранул нейтрального вещества - лактозы (молочного сахара) с размером частиц 150-300 мкм, предварительно полученным водным или водно-спиртовым раствором активированных потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к каннабиноидному рецептору человека I типа, преимущественно, в соотношении 1 кг раствора антител на 5 или 10 кг лактозы (1:5-1:10) с одновременной сушкой в потоке подаваемого под решетку нагретого воздуха при температуре не выше 40°С. Расчетное количество 0,07-0,17 от массы твердой оральной формы высушенных гранул, насыщенных активированной потенцированной формой антител, загружают в смеситель и смешивают с микрокристаллической целлюлозой, вводимой в количестве 3,0-8,0 масс. частей от общей массы загрузки - от массы твердой оральной формы. Затем в эту смесь добавляют 25-45 масс. частей от общей массы загрузки «ненасыщенной» чистой лактозы (для снижения стоимости и некоторого упрощения и ускорения технологического процесса без снижения эффективности лечебного воздействия) и стеарат магния в количестве 0,8-1,2 масс. частей от общей массы загрузки. Полученную таблеточную массу равномерно перемешивают и таблетируют прямым сухим прессованием (например, в таблет-прессе Korsch - XL 400) с формированием круглых таблеток массой 150÷500 мг. Масса таблетки может составлять 150÷500 мг. Предпочтительно использовать таблетки массой 250÷300 мг, которые включают активированную потенцированную форму водно-спиртовых разведений субстанции - действующего вещества поликлональных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к каннабиноидному рецептору человека I типа, очищенных на антигене в сверхмалой дозе, приготовленной из матричного раствора, разведенного, соответственно, в 100 ¹², в 100³ в 100²⁰⁰, что эквивалентно смеси сотенных разведений С12, С30 и С200, приготовленных по гомеопатической технологии.

Предпочтительно заявленную фармацевтическую композицию рекомендуется принимать по 1-2 таблетке 2-4 раза в день.