способ иммунокоррекции апи-фитокомпозицией
Классы МПК: | A61K35/64 насекомые, например маточное молочко (пчел) A61K36/28 Asteraceae или Compositae (семейство сложноцветных), например ромашка, девичья трава (пиретрум), тысячелистник или эхинацея A61K31/66 соединения фосфора A61P37/00 Лекарственные средства против иммунологических или аллергических заболеваний |
Автор(ы): | Покровский Михаил Владимирович (RU), Грибанов Николай Николаевич (RU), Покровская Татьяна Григорьевна (RU), Арустамова Анна Александровна (RU), Затолокина Мария Алексеевна (RU), Кочкаров Владимир Исхакович (RU), Корокин Михаил Викторович (RU), Гудырев Олег Сергеевич (RU) |
Патентообладатель(и): | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") (RU), Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное объединение "Гамма+" (RU) |
Приоритеты: |
подача заявки:
2013-01-14 публикация патента:
27.07.2014 |
Изобретение относится к области медицины и предназначено для иммунокоррекции. У лабораторных животных путем введения циклофосфана однократно в дозе 200 мг/кг массы тела лабораторного животного (1-е сутки эксперимента) модулируют иммунодефицит. Коррекцию иммунодефицита проводят апи-фитокомпозицией в виде водной суспензии меда, пыльцы, прополиса, экстракта эхинацеи пурпурной в соотношении 10:1:1:2. Композицию вводят лабораторному животному внутрижелудочно (через зонд), в дозе 200 мг/кг ежедневно в течение 10 дней на вторые сутки эксперимента. Сочетание компонентов композиции обеспечивает синергетический эффект и эффективно корректирует экспериментальный иммунодефицит. 1 табл., 1 пр.
Формула изобретения
Способ иммунокоррекции апи-фитокомпозицией, включающий воспроизведение иммунодефицита у лабораторных животных путем введения циклофосфана однократно в дозе 200 мг/кг массы тела лабораторного животного (1-е сутки эксперимента) с последующей ее коррекцией, отличающийся тем, что коррекцию иммунодефицита проводят апи-фитокомпозицией в виде водной суспензии меда, пыльцы, прополиса, экстракта эхинацеи пурпурной в соотношении 10:1:1:2, которую вводят лабораторному животному внутрижелудочно (через зонд), в дозе 200 мг/кг ежедневно в течение 10 дней на вторые сутки эксперимента.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии.
По известным литературным источникам - прополис содержит биологически активные вещества, обладающие иммуномодулирующими свойствами (биофлавоноиды, цинк, полисахариды и др.). Это характеризует прополис как перспективное средство для производства иммунных препаратов (Хисматуллина Н.З. Апитерапия. - Пермь: Мобиле, 2005. - С.55).
Биологически активные вещества эхинацеи пурпурной Echinacea purpurea (L.) Moench. широко используются в качестве источников эффективных лекарственных средств с иммуностимулирующей активностью. Максимальная биологическая активность экстракта эхинацеи проявляется в комбинации с биофлавоноидами и аскорбиновой кислотой (Дубинская Г.М., Почерняева В.Ф., Островская Г.Ю., Бобырев В.Н. Клиническое испытание фруктовых соков с включением экстракта эхинацеи пурпурной // Изучение и использование эхинацеи: Матер. Междунар. научн. конф., Полтава, 21-24 сентября 1998 г. - Полтава, 1998. - С.126-128). Витаминный комплекс меда содержит витамины группы B, витамины E, K, аскорбиновую кислоту.
Известен способ коррекции экспериментального иммунодефицита на примере циклофосфановой модели, который характеризуется тем, что в экспериментально-гистологических исследованиях было сформировано пять групп животных (крыс-самцов) в возрасте двух месяцев. Крысы первой группы служили контролем. У крыс второй, третьей, четвертой и пятой групп моделировали иммунодефицит путем введения циклофосфана внутрибрюшинно в дозе 40 мкг/кг однократно. Через 5 дней, на фоне иммунодефицитного состояния крысам третьей группы вводили в течение 5 дней олетим подкожно 1 раз в сутки в дозе 3 мкг/кг, животных четвертой группы лечили хитозаном путем введения внутрь 3%-ного гелевого раствора 1 раз в сутки в течение 5 дней в дозе 0,5 мл/гол, у крыс пятой опытной группы проводили лечение рибавом путем введения препарата внутрь в форме раствора (1:5) 1 раз в сутки в течение 5 дней в дозе 0,25 мл/кг. Забор материала для гистологических исследований (тимус, селезенка, лимфатические узлы брыжейки, печень и др.) осуществляли через 5, 10, 15 дней после начала введения иммуномодуляторов.
Основным недостатком способа является то, что хитозан снижает эффективность масляных лекарственных форм витаминов и лекарств для приема внутрь, а также резко понижает уровень кислотности желудочного сока. Олетим и рибав применяются только в ветеринарной медицине.
Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции экспериментального иммунодефицита на примере циклофосфановой модели (Морозова Е.Н. Изменения морфометрических параметров лимфатических узелков пейеровых бляшек тонкой кишки после коррекции иммунодефицитного состояния имунофаном в эксперименте // Клiнiчна анатомiя та оперативна хiрургiя. - Т.10, № 4. - 2011 - С.19-22), который характеризуется тем, что опыты проводили на 36 белых крысах-самцах половозрелого возраста массой 200-250 г. Крысы были разделены на 2 группы по 18 особей. Животным первой группы вводили циклофосфан однократно 200 мг/кг (1-е сутки), затем имунофан по схеме (2-е, 4-е, 6-е, 8-е и 10-е сутки) в дозе 0,7 мкг/кг. Второй группой служили интактные крысы. Животных выводили из эксперимента на 7-е, 30-е и 90-е сутки после завершения введения имунофана. Тонкую кишку фиксировали в 10% растворе формалина, затем подвергали стандартной гистологической проводке. Срезы толщиной 5-6 мкм окрашивали гематоксилином и эозином. При помощи автоматизированного морфометрического комплекса измеряли высоту и ширину лимфатических узелков, их герминативных центров и межузелковых зон.
Основным недостатком способа является то, в эксперименте не проводили сравнение морфометрических параметров лимфатических узелков пейеровых бляшек тонкой кишки в группе с коррекцией иммуносупрессии имунофаном с показателями в группе животных с иммуносупрессией (группой контроля), вследствие чего не получено достоверных различий морфометрических параметров в группе с патологией и группе с коррекцией патологии, что не подтверждает эффективность применения имунофана на модели циклофосфановой иммуносупрессии в эксперименте.
Задачей предлагаемого изобретения является способ иммунокоррекции апи-фитокомпозицией в виде водной суспензии меда, пыльцы, прополиса, экстракта эхинацеи, исключающий недостатки известных решений.
Задача достигается тем, что предложен способ иммунокоррекции апи-фитокомпозицией, включающий воспроизведение иммунодефицита у лабораторных животных путем введения циклофосфана однократно в дозе 200 мг/кг массы тела лабораторного животного (1-е сутки эксперимента) с последующей ее коррекцией, причем коррекцию иммунодефицита проводят апи-фитокомпозицией в виде водной суспензии меда, пыльцы, прополиса, экстракта эхинацеи пурпурной в соотношении 10:1:1:2, которую вводят лабораторному животному внутрижелудочно (через зонд), в дозе 200 мг/кг ежедневно в течение 10 дней на вторые сутки эксперимента.
Сочетание прополиса, меда и экстракта эхинацеи пурпурной в апи-фитокомпозиции обеспечивает взаимное усиление иммуномодулирующих свойств данных компонентов (синергизма).
Основным преимуществом предлагаемого способа является то, что в эксперименте проводили сравнение морфометрических параметров лимфатических узелков пейеровых бляшек тонкой кишки в группе с коррекцией иммуносупрессии апи-фитокомпозицией с показателями в группе животных с иммуносупрессией (группой контроля), вследствие чего выявлена выраженная иммунокоррекця апи-фитокомпозицией на модели циклофосфановой иммуносупрессии в эксперименте.
СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ
Опыты проводят на 30 белых крысах-самцах половозрелого возраста массой 200-250 г. Крысы были разделены на 3 группы по 10 особей: 1) интактные крысы, 2) крысы с иммуносупрессией, 3) крысы с коррекцией иммуносупрессии. Животным второй группы вводили циклофосфан однократно в дозе 200 мг/кг массы тела животного (1-е сутки эксперимента). В третьей группе животных проводится коррекция иммунодефицита внутрижелудочным введением (через зонд) водной суспензии меда, пыльцы, прополиса, экстракта эхинацеи пурпурной (10:1:1:2) ежедневно, начиная со второго дня эксперимента, в дозе 200 мг/кг массы тела животного в течение 10 дней. Животных выводили из эксперимента на 11-е сутки эксперимента. Тонкую кишку фиксировали в 10%-ном растворе формалина, затем подвергали стандартной гистологической проводке. Срезы толщиной 5-6 мкм окрашивали гематоксилином и эозином. При помощи автоматизированного морфометрического комплекса (световой микроскоп Olympus CX 41, цифровая фотокамера, персональный компьютер с набором прикладных программ) измеряли высоту и ширину лимфатических узелков, их герминативных центров.
Достоверность наблюдавшихся при действии апи-фитокомпозиции изменений параметров определяли разностным методом описательной статистики с нахождением средних значений сдвигов (M), средней ошибки средней арифметической (±m) и вероятности возможной ошибки (p). Различия оценивали как достоверные при p<0,05. Статистические расчеты проводились с использованием программы Microsoft Excel 2003.
ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ
В иммунном аппарате тонкой кишки выделяют B-зависимую (лимфатические узлы (ЛУ) с герминативным центром) зону. Изменение их морфометрических параметров может отражать функциональные особенности периферического иммунного аппарата. При недостаточности гуморального и клеточного иммунитета периферические лимфоузлы уменьшаются или отсутствуют.
Показатели высоты ЛУ у животных с моделированием иммуносупрессии уменьшались к 11-м суткам эксперимента на 20,6% по сравнению со значениями в группе интактных животных, что статистически достоверно значимо. В группе с коррекцией иммунодефицита апи-фитокомпозицией достоверных отличий значений данных показателей от группы интактных животных не выявлено. Параметры ширины узелков к 11-м суткам уменьшались в группе контроля на 20,2% по сравнению с интактными животными, что статистически достоверно значимо. В группе с коррекцией патологии апи-фитокомпозицией статистически достоверных отличий значений данных показателей от группы интактных крыс не выявлено. На 11-е сутки эксперимента показатели высоты герминативных центров уменьшались в группе с иммуносупрессией на 14,8%, а показатели ширины уменьшались на 21,2% по сравнению с интактными животными, что статистически достоверно значимо. В группе с коррекцией иммунодефицита апи-фитокомпозицией значения морфометрических параметров герминативных центров (ГЦ) статистически достоверно не отличались от значений в группе интактных крыс.
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о выраженной иммунокоррекции в условиях модели циклофосфановой иммуносупрессии у крыс предлагаемой апи-фитокомпозицией. Морфометрические параметры лимфатических узелков пейеровых бляшек тонкой кишки крыс на 11-е сутки эксперимента, M±m (n=30), мкм приведены в Таблице 1.
Таблица 1 | |||
Параметры | Интактные крысы | Крысы с иммуносупрессией (контроль) | Крысы с коррекцией иммуносупрессии |
Высота ЛУ | 951,0±14,5 | 755,0±16,3* | 938,0±9,3** |
Ширина ЛУ | 1076,0±25,6 | 859,0±26,0* | 961,3±14,8** |
Высота ГЦ | 620,0±18,2 | 528,5±13,1* | 600,2±11,2** |
Ширина ГЦ | 737,2±17,5 | 581,0±4,9* | 730,1±14,5** |
Примечание: ** - p<0,05 в сравнении с группой контрольных животных, * - p<0,05 в сравнении с группой интактных животных.
Класс A61K35/64 насекомые, например маточное молочко (пчел)
Класс A61K36/28 Asteraceae или Compositae (семейство сложноцветных), например ромашка, девичья трава (пиретрум), тысячелистник или эхинацея
Класс A61K31/66 соединения фосфора
Класс A61P37/00 Лекарственные средства против иммунологических или аллергических заболеваний