способ микрочеренкования винограда in vitro

Формула изобретения

Способ микрочеренкования винограда in vitro, включающий микроразмножение пробирочных растений и высадку их на жидкую питательную среду с добавлением макроэлементов, витаминов и биопрепаратов, отличающийся тем, что на основе субстрата Мурасиге-Скуга исключают активированный уголь, снижают соли и кислоты в 2-4 раза, а добавляют Гумат+7B в количестве 5-10 мл/л.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к способам размножения растений, и может быть использовано в виноградстве для ускоренного размножения оздоровленных от вирусной инфекции перспективных сортов винограда путем снижения затрат на дорогостоящие препараты.

Известен способ размножения винограда, при котором проводят вычленение меристематических эксплантов, их высадку и культивирование (патент № 2120739 от 27.10.1998 г. МПК A01H 4/00).

Однако в известном техническом решении для стимуляции микроэксплантов используют электромагнитное СВЧ-поле в комплексе с узкополосным лазерным лучом, что усложняет способ, повышает затраты.

Известен также способ микроклонального размножения, включающий расчленение пробирочных растений на питательной среде Мурасиге-Скуга с одновременным использованием биопрепаратов (патент № 2265319 от 10.12.2005 г. МПК A01H 4/00).

Сложность известного технического решения заключается в том, что биопрепараты гиббереллиновой и цитокининовой пород выделяют из грибов, которые воздействуют на процессы роста и развития растений на этапе ввода меристем в культуру.

Однако экспланты для своего развития требуют дополнительного введения и других элементов для своего развития, что снижает эффективность способа и повышения затраты.

Наиболее близким техническим решением является способ, при котором проводят микроразмножение in vitro путем микрочеренкования пробирочных растений и высадку их на жидкую питательную среду с добавлением макроэлементов, витаминов и биопрепаратов (патент № 2264706 от 27.112006 г. МПК A01H 4/00, A01N 25/00, C12N 5/00).

Однако в способе-прототипе для размножения микрочеренкования используют дорогостоящие препараты для формирования питательной среды, что усложняет способ, повышает себестоимость продукции.

Технический результат - снижение себестоимости продукции и повышение эффективности способа.

Техническое решение заявленного объекта, в отличие от известного, заключается в том, что из состава субстрата Мурасиге-Скуга исключают активированный уголь, снижают соли и кислоты в 2-4 раза, а добавляют Гумат+7B в количестве 5-10 мл/л.

Способ осуществляется следующим образом.

Гумат+7B хорошо растворим в воде, легко усваивается растениями, мобилизует его иммунную систему, стимулирует развитие мощной корневой системы, способствует усиленному поступлению питательных веществ, интенсифицирует обменные процессы в растительной клетке, снижает содержание нитратов в 2 раза, увеличивает содержание хлорофилла, витаминов, сахаров и других ценных веществ, стимулирует воздействие всех микроэлементов, применяемых в смеси с гуматом.

В отличие от известных видов гуматов предлагаемый Гумат+7B содержит 60-65% гуматов, микроэлементов (железо, медь, цинк, марганец, молибден, кобальт и бор). В таком сочетании с преимуществом бора (В) гумат при микрочеренковании винограда не применялся, бор необходим растениям для нормального роста и развития. Функции бора связаны с метаболизмом, переносом сахаров через мембраны, синтезом ДНК, РНК и фитогормонов, образованием клеточных стенок и развитием тканей. Недостаток бора в организме вызывает различные заболевания. Учитывая комплекс микро- и макроэлементов, применяемых в качестве питательной среды, Гумат+7B дополняет в качестве ценных веществ, сочетающих совместное положительное действие на результате опытов.

Пример. Растения-регенеранты размерами 8-10 см разрезали на фрагменты, включавшие узел с листом и почкой (нижняя часть междоузлия длиннее верхней на 1-1,5 см), полученные микрочеренки высаживали в биологические пробирки размером 40×120 мм на питательную среду. Пробирки закрывали фольгой и помещали их в культуральную комнату с соответствующими методике условиями.

Опыт был заложен на сорте винограда Августин в 5-ти вариантах, табл.1. В каждом варианте по 3 повторности. В каждой повторности по 6 пробирок с микрочеренками. Изучали влияние модифицированных питательных сред на период роста и развития растения винограда в условиях in vitro.

Технология черенкования пробирочных растений обычная. Дата черенкования 1.08.2012 г. Наблюдения за растениями проводились в течение 41 дня до 11.09.2012 г. - ежедневно, отмечая дату появления корней и листьев. Измерения высоты растений, подсчет листьев и основных корней провели через 41 день после черенкования.

Во всех вариантах начало образования корней отмечено на 8-й день после черенкования. На 13 день после черенкования укоренились все растения.

Отмечено, что рост корней в варианте 5 существенно увеличился и по количеству корней, которые превзошли контроль.

Образование листьев в варианте 5 началось на десятый день после черенкования, а на 13 день образование листьев началось на всех вариантах опыта.

Дальнейшие наблюдения за ростом и развитием растений показали, что экспланты в вариантах 2 и 3 на бедных питательных средах хотя и показали вначале неплохие результаты по укоренению, намного отставали в росте и развитии по сравнению с вариантами 1, 4, 5 (табл.2).

Существенные различия по количеству корней, листьев и по высоте растения наблюдаются в вариантах 4 и 5. У эксплантов, помещенных на эти среды, проходил более интенсивный рост растения в высоту и образование корней, по сравнению с контрольным вариантом (табл.2).

Лучшие результаты по росту и развитию растений показал вариант 5 на питательной среде № 4. Введение в состав питательных сред, кроме минеральных солей, жидкого концентрированного органоминерального препарата Гумат+7B, оказало существенное значение для роста и развития экспланта в условиях in vitro.

Данные результаты сведены в таблицу 2, из которой следует, что питательная среда № 4 наиболее оптимальная, обеспечивая за сравнительно короткий период увеличение количества основных корней, листьев и высоту растений.

В питательных средах № 4 и № 5 (табл.1) значительно снижается количество агар-агара, сахарозы, солей натрия, магния, калия и кальция, мезоинозита, сернокислой меди и хлористого никеля, никотиновой кислоты, пиридоксина, тиамина, сернокислого железа, трилона Б, активированного угля, за счет значительного сокращения этих элементов в питательной среде и добавлением Гумата+7B в количестве 5-10 мл/л.

Следовательно, в предлагаемом способе снижаются затраты на питательную среду и повышается его эффективность.

Табл.1
Состав питательной среды для укоренения и роста пробирочных растений винограда (метод in vitro) 31.07.2012 г.
Мг/л, мл/л
№	Наименование препаратов	Вариант 1	Вариант 2	Вариант 3	Вариант 4	Вариант 5
		Контроль, модифицированная среда МС	Питательная среда № 1	Питательная среда № 2	Питательная среда № 3	Питательная среда № 4
1	Агар-агар	7000	7000	7000	7000	7000
2	Сахароза	15000	20000	20000	10000	10000
3	KNO3 - азотнокислый калий	950			475	475
4	NH4 NO3 - азотнокислый аммоний	825			69	69
5	MgSO4 ×7H2O - сернокислый магний	185		185	93	93
6	CaCl2×2H2O - хлористый кальций	220		166	83	83
7	KH2PO4 - фосфорнокислый калий	85			34	34
8	Мезоинозит	100		50	25	25
9	KI - йодистый калий	0,42			0,42	0,42
10	H3 BO3 - борная кислота	3,1			3,1	3,1
11	ZnSO 4×2H2O - сернокислый цинк	4,3			4,3	4,3
12	MnSO 4×4H2O - сернокислый марганец	1,1			1,12	1,12
13	CuSO 4×5H2O - сернокислая медь	0,025			0,013	0,013
14	NiCl 2 - хлористый никель	0,025			0,013	0,013
15	Никотиновая кислота	1		0,5	0,25	0,25
16	Пиридоксин В6	1		0,5	0,1	0,1
17	Тиамин B1	1		0,2	0,1	0,1
18	FeSO4×7H2O - сернокислое железо	27,8			13,9	13,9
19	Трилон Б Na2ЭДТА×2H2O	37,2			18,6	18,6
20	Гумат + 7B (мл.)		10	10	10	5
21	Уголь активированный	5000
	pH-среды	6,6	6,6	6,6	6,6	6,6
Примечание: Трилон Б предварительно растворенный в 5 мл бидистиллированной воды.

Влияние различных, питательных сред на рост и развитие растений винограда при микрочеренковании (метод in vitro)

Табл.2
Дата проведения учета 11.09.2012 г, через 41 сутки после черенкования
Варианты	Кол-во основных корней, шт.					Кол-во листьев, шт.					Высота растений, см
	Повторности			Всего	Среднее на 1 растение	Повторности			Всего	Среднее на 1 растение	Повторности			Всего	Среднее на 1 растение
	1	2	3			1	2	3			1	2	3
Вариант-контроль, модифицированная среда МС	1,7	1,5	2,3	5,5	1,8	0,17	5,50	5,83	17,5	5,8	7,0	5,3	6,3	18,6	6,2
Питательная среда № 1	2,0	1,5	1,8	5,3	1,8	3,17	3,33	1,00	7,5	2,5	2,2	3	1,2	6,4	2,1
Питательная среда № 2	1,7	1,3	1,0	4,0	1,3	0,5	1,00	1,17	2,7	0,9	0,5	0,8	0,7	2,0	0,7
Питательная среда № 3	1,7	1,8	1,8	5,3	1,8	6,33	5,50	6,33	18,2	6,1	7,0	6,5	7,3	20,8	6,9
Питательная среда № 4	1,8	2,0	2,2	6,0	2,0	6,33	6,50	5,83	18,7	6,2	7,3	7,7	7,8	22,8	7.6
	HCP-1,25					HCP-2,14					HCP-2,39