внутриматочное средство для лечения послеродового эндометрита у коров и других сельскохозяйственных животных на основе соли фосфония
Классы МПК: | A61K31/66 соединения фосфора A61K9/02 суппозитории; свечи; основы для них A61P15/00 Лекарственные средства для лечения половых или сексуальных расстройств; контрацептивы |
Автор(ы): | Бахтиярова Юлия Валерьевна (RU), Андрияшин Виталий Владимирович (RU), Зиятдинова Гузель Камилевна (RU), Воробьева Наталья Владимировна (RU), Шулаева Марина Петровна (RU), Поздеев Оскар Кимович (RU), Щурова Елена Сергеевна (RU), Галкин Владимир Иванович (RU), Сунагатуллитин Фарук Ахмадуллович (RU), Егорова Светлана Николаевна (RU), Галкина Ирина Васильевна (RU) |
Патентообладатель(и): | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВПО КФУ) (RU) |
Приоритеты: |
подача заявки:
2013-03-22 публикация патента:
27.05.2014 |
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения и профилактики послеродового гнойно-катарального эндометрита у сельскохозяйственных животных. Суппозитории включают действующее вещество трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфония бромид в количестве 1%. В качестве фармацевтически приемлемых носителей суппозитории содержат «полиэтиленгликоль-6000» (30%), высшие жирные спирты C16-C21 (0,6%), кальция стеарат (0,8%) и сахароза (42,8%), вспениватели содержат кислоту лимонную (10%), натрия гидрокарбонат (14,8%). Заявленное средство обладает высокой бактерицидной, антимикотической, антиоксидантной активностью, обеспечивает высокий лечебный и профилактический эффект для лечения и профилактики послеродового гнойно-катарального эндометрита у сельскохозяйственных животных. 1 з.п. ф-лы, 3 табл., 5 пр.
Формула изобретения
1. Суппозитории для лечения и профилактики послеродового гнойно-катарального эндометрита у сельскохозяйственных животных, включающее действующее вещество и фармацевтически приемлемые носители и вспениватели, отличающееся тем, что действующим веществом является трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфония бромид в количестве 1%, в качестве фармацевтически приемлемых носителей использованы «полиэтиленгликоль-6000» (30%), высшие жирные спирты C16-C21 (0,6%), кальция стеарат (0,8%) и сахароза (42,8%), вспениватели содержат кислоту лимонную (10%), натрия гидрокарбонат (14,8%).
2. Суппозитории по п.1 для коров весом 10 г с действующим веществом трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфония бромид в количестве 0,1 г, в качестве фармацевтически приемлемых носителей использованы «полиэтиленгликоль-6000» (3 г), высшие жирные спирты C16-C21 (0,06 г), кальция стеарат (0,08 г) и сахароза (4,28 г.), вспениватели содержат кислоту лимонную (1,0 г), натрия гидрокарбонат (1,48 г).
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится преимущественно к ветеринарии, а именно к акушерству и гинекологии, и предназначено для лечения послеродового гнойно-катарального эндометрита у сельскохозяйственных животных, вызванного экзогенными и эндогенными инфекционными факторами, приводящими к гнойным воспалениям родовых путей животных, выкидышам и мертворождению молодняка. Может быть использовано для лечения родовых путей человека.
Задачей заявленного технического решения является разработка внутриматочного средства «шипучих-самовспенивающихся» суппозиториев для профилактики и лечения острого гнойно-катарального эндометрита (Endometritis puerperalis catarrhalis purulenta acuta) - воспаления родовых путей у сельскохозяйственных животных, обладающих низкими лечебными дозами (1% действующего вещества - соли четвертичного фосфония), преимущественно для ветеринарии с выраженным антибактериальным, антимикотическим и антиоксидантным действием.
При клиническом исследовании больных коров острым катарально-гнойный эндометритом выявляются следующие признаки, указывающие на развитие патологических процессов со стороны половой системы: снижение аппетита, угнетение, вялая жвачка, гипотонические сокращения рубца, повышение температуры, матовость кожного покрова, покраснение слизистой матки, наличие на ней гнойно-катарального экссудата, полосчатых кровоизлияний [Воронин В.В. Лечение коров при эндометрите. Ветеринария, 1977. - № 5. - С.71-73]. При вагинальном осмотре слизистая оболочка влагалища и влагалищной части шейки матки отечна, гиперемирована, с полосчатыми кровоизлияниями. Из канала шейки матки в полость влагалища выделялся воспалительный экссудат. Из половой щели отмечены истечения гнойно-катарального характера, истечения заметны также на полу, где лежало животное. При ректальном исследовании матка располагалась в брюшной полости, размером, как и при 3-4-месячной беременности. Стенки матки дряблые, тестоватые. Сократительная способность слабо выражена. Оба рога матки увеличены. При массаже матки через прямую кишку из половых путей выделяется в большом количестве гнойно-катаральный экссудат жидкой консистенции, желто-бурого цвета, с неприятным ихорозным запахом. Яичники имеют гладкую поверхность. При отсутствии правильного лечения могут развиться хронические воспалительные процессы родовых путей животных, что может привести в дальнейшем к выкидышам и мертворождению молодняка, сепсису.
Данное заболевание, в свою очередь, приводит к необходимости длительного и очень дорогостоящего лечения [Червяков Д.К., Евдокимов П.Д., Вишкер А.С. Лекарственные средства в ветеринарии. Справочник. Изд.2, перераб. и доп. М.: Колос. - 1977. - 415 с.]: внутривенные вливания 40% раствор глюкозы, 10% раствор хлорида кальция, внутримышечные инъекции 4% раствора гентамицина, тривитамина, 2% синестрола, подкожные инъекции 40 ЕД окситоцина, 0.1% раствор карбохолина, назначали аутогемотерапию по схеме 60, 80, 100, 120, суппозитории на основе фуразолидона, проводили массаж матки и промывание полости матки 4% раствором ихтиола. Лечение продолжалось в течение месяца. Однако и такое длительное и дорогостоящее лечение не всегда давало положительные результаты, заболевание зачастую переходит в хроническую форму, что соответственно приводит к значительным экономическим потерям в животноводстве и гибели молодняка.
Разработка лекарственных средств для лечения острого гнойно-катарального эндометрита, воздействующих на различные звенья патологического процесса, сочетающих в себе одновременно антибактериальное, антимикотическое и антиоксидантное действие, является актуальной задачей как ветеринарии, так и фармации, позволяет эффективно проводить лечение животных при остром гнойно-катаральном эндометрите, вызванном воздействием патогенной микрофлоры - экзогенными и/или эндогенными инфекционными факторами, приводящими к потере молодняка и послеродовым заболеваниям коров. Данное заболевание, в свою очередь, приводит к необходимости длительного и дорогостоящего лечения животных и соответственно к значительным экономическим потерям.
Из исследованного заявителем уровня техники выявлен близкий по назначению аналог - пенные шипучие суппозитории «Йодопен» (Iodopen) - лекарственное средство (антисептик), (Йодопен хранят в упаковке производителя, с предосторожностью (список Б), в сухом, защищенном от прямых солнечных лучей месте, при температуре от 4 до 20°C. Срок годности при указанных условиях хранения - 18 месяцев со дня изготовления. Йодопен следует хранить в местах, не доступных для детей), которое содержит 1,5 г йодповидона (1,57% активного йода) [Справочник Видаль «Лекарственные средства ветеринарного применения в России» М.: Видаль. - 2011. - 532 с.; Патент № 2155046 на изобретение «Средство для профилактики и лечения эндометритов у коров». Гавриш В.Г., Семенов С.В., Жемеричкин Д.А., Егунова А.В. Заявка № 99112322 от 08.06.1999. Зарегистрирован в Гос. реестре изобретений РФ 27.08.2000 г., 4 с.], активно используемые в гинекологии и акушерстве. В качестве активно действующего вещества «Иодопена» используется импортная фармацевтическая субстанция «Йодповидона 30/06», которая для изготовления суппозиториев закупается в Германии на известной фармацевтической фирме "BASF Corporation" [PVP-иод (иодоповидон). Техническая информация фирмы «BASF», 1997. - 21 с.].
Недостатками данного антисептика являются:
- изготавливается из дорогой импортной фармацевтической субстанции фирмы "BASF Corporation";
- имеет длительный срок лечения и необходимость сочетания с другими видами лечения, и, как следствие, - дороговизна лечения;
- содержит высокие лечебные дозы активного вещества (кристаллического йода);
- обладает сильным побочным токсико-аллергическим действием;
- не обладает антиоксидантными свойствами;
- часто возникает необходимость дополнительного курса лечения осложнений:
1) гипертиреоза;
2) аденомы щитовидной железы;
3) сердечной недостаточности;
4) хронической почечной недостаточности;
5) дерматита Дюринга;
- возникает необходимость дополнительного курса лечения:
1) противоаллергического;
2) антитоксического;
3) противогрибкового;
- требуется соблюдение строгих правил хранения (Список Б, в защищенном от света месте, низкой температуре и проветриваемой атмосферы).
Из исследований, проведенных заявителем по российским и зарубежным информационным базам данных и технической литературе, известны антибактериальные, противогрибковые и антимикотические свойства четвертичных солей фосфония как таковые [см. Галкина И.В., Тудрий Е.В., Бахтиярова Ю.В., Егорова С.Н., Галкин В.И. Синтез, строение и исследование биологической активности солей фосфония / в сб. Фармакология и токсикология фосфорорганических соединений и других биологически активных веществ. - Казань, 2008. С.23; Pat. JP 2002308713, publ. 23/10/2002; Pat. JP 2005060332, publ. 10.03.2005; Pat. JP 2000316701, publ. 221.11.2003], при этом из исследованного уровня техники заявителем не выявлены специфические свойства этих соединений, показывающие их известностью эффективность в отношении возможности лечения животных с послеродовыми воспалительными заболеваниями родовых путей, вызванных воздействием патогенной микрофлоры - экзогенными или эндогенными инфекционными факторами, приводящими к острому гнойно-катаральному эндометриту.
Из уровня техники заявителем не выявлено структурных аналогов предлагаемого фармацевтического средства на основе четвертичных солей фосфония для целей профилактики и лечения гнойных послеродовых эндометритов у коров и других сельскохозяйственных животных, вызванных экзогенными и эндогенными инфекционными факторами, приводящими к гнойным воспалениям родовых путей животных, выкидышам и мертворождению молодняка.
Сущность заявленного технического решения заключается в том, что используют сложный фармацевтический состав (внутриматочное средство) в виде лекарственной формы (суппозитории весом 10 г), содержащий активно действующее вещество - трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфоний бромид и пенообразующую основу (фармацевтически приемлемые носители и вспениватели), включающую полиэтиленгликоль, лимонную кислоту, бикарбонат натрия, кальций стеариновокислый, сахарозу, оксиэтилированные жирные спирты в следующем соотношении (наиболее эффективном, выявленном в результате проведенных опытов):
Полиэтиленгликоль 6000 | 3,0 г | 30% |
Соль четвертичного фосфония формулы I | 0,1 г | 1% |
Высшие жирные спирты С16-С21 | 0,06 г | 0,6% |
Кальция стеарат | 0,08 г | 0,8% |
Кислота лимонная | 1,0 г | 10% |
Натрия гидрокарбонат | 1,48 г | 14,8% |
Сахароза | 4,28 г | 42,8% |
Полученные суппозитории при контакте с маточной жидкостью (экссудатом) «пенятся» вследствие реакции нейтрализации гидрокарбоната натрия с лимонной кислотой, заполняют полость матки, при ее максимальном послеродовом сокращении, обеспечивая тем самым контакт лекарственного вещества с воспаленными тканями. Лекарственная форма самовспенивающихся суппозиториев торпедовидной формы состоит из соли трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфония бромида, как основного действующего вещества формулы I (в концентрации 1%) и фармацевтически приемлемых носителей (полиэтиленгликоль 6000 - 30%, высшие жирные спирты С16-С21 - 0,6%, кальция стеарат - 0,8%, сахароза - 42,8%) и вспенивателя (кислота лимонная - 10%, натрия гидрокарбонат - 14,8%).
Заявленное внутриматочное средство - фармацевтические суппозитории обладают высокой бактерицидной, антимикотической и антиоксидантной активностью при низких концентрациях, которые могут найти применение в области ветеринарии и медицины.
Задачей заявленного технического решения является разработка неизвестного из уровня техники препарата нового поколения - внутриматочного средства - самовспенивающихся суппозиториев, характеризующегося тем, что суппозитории
должны обладать:
- более низкой стоимостью по сравнению с препаратом «Йодопен»;
- коротким периодом обработки и лечения животного;
- низкими лечебными дозами активного вещества;
- антиоксидантными свойствами;
- более низким классом опасности по сравнению с препаратом «Йодопен»;
должны исключать:
- возможность возникновения осложнений и заболеваний от применения препарата и, как следствие, необходимость дополнительного лечения животных;
- необходимость дополнительного противоаллергического лечения животных;
- необходимость дополнительного антитоксического лечения животных;
- необходимость дополнительного противогрибкового лечения животных.
Заявляемое внутриматочное средство - шипучие пенные суппозитории имеют выраженный лечебный эффект при лечении гнойно-катаральных эндометритов у коров и других сельскохозяйственных животных, не уступающий, а даже превосходящий препарат «Йодопен» по эффективности излечения при одно-двухразовом их применении, при содержании лекарственного средства формулы I в суппозиториях в 15 раз меньше, чем содержание йодоповидона в «Йодопене».
Поставленная задача решается заявленным противовоспалительным фармацевтическим лекарственным внутриматочным средством для профилактики и лечения гнойно-катарального эндометрита при одно-, двукратной обработке животного (в зависимости от состояния животного) в виде шипучих суппозиториев, состоящих из соли трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфония бромида формулы I в фармацевтически приемлемом носителе:
Усовершенствованный способ получения соли фосфония формулы I состоит из двух стадий и частично воспроизводится по литературной методике, описанной в [Stames W.H., Lauff J.J. Reactions of a Quinone Methide with Tri-n-butylphosphosphine. J. Org. Chem. Vol.35, N6, 1970. - P.1978-1986], следует отметить, что в работах американских авторов вообще не изучались антибактериальные, антимикотические и антиоксидантные свойства этих соединений, а исследовались лишь в качестве сжигателей жира для похудания. Необходимо заметить, что их опыты оказались отрицательными.
Первой стадией синтеза соединения формулы I явилось бромирование 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (ионол) в четыреххлористом углероде, приводящее к количественному выходу 3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензилбромида в виде желтого кристаллического продукта с температурой плавления 55-56°C.
Второй стадией получения продукта формулы I была кватернизация трифенилфосфина синтезированным бензилбромидом.
Реакция кватернизации проводилась в ацетонитриле, после отгонки большей части (2/3) растворителя, продукт формулы I осаждался эфиром. Получен бесцветный мелкокристаллический порошок с высокой температурой плавления, в 31P ЯМР спектрах которого фиксируется лишь один сигнал ядра фосфора в районе 23,47 м.д. поля.
Исходный 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол (торговые марки «ионол», «агидол-1», «алкофен») является дешевым многотоннажным широко известным препаратом, применяется в качестве антиоксиданта в производстве пищевых продуктов (пищевая добавка Е-321), смазочных масел, пластмасс (производится технический «ионол» ГОСТ 10894-76). Благодаря возможности нейтрализовать свободные радикалы и прерывать цепные реакции с участием свободных радикалов, 5%-ный линимент Дибунола широко применялся в качестве наружного противоожогового и противовоспалительного средства. Дибунол также успешно применялся для лечения некоторых видов рака, лучевых и трофических поражений кожи и слизистых оболочек [В.В. Ершов, Г.А. Никифоров, А.А. Володькин. «Пространственно-затрудненные фенолы». М.: Химия, 1972. 352 с.; Эмануэль Н.М. «Кинетика экспериментальных опухолевых процессов». М.: Наука, 1977; Машковский М.Д. Лекарственные средства. Издание 16. М.: Новая волна, 2010. С.721]. Трифенилфосфин, а также бром - относительно дешевые доступные отечественные коммерческие препараты.
Сущность изобретения иллюстрируется следующими примерами, конкретного осуществления, но не исчерпывается ими. В примере 1 приведен способ синтеза основного действующего вещества суппозиториев - соли фосфония формулы I -, в примере 2 приведен способ получения фармацевтической композиции внутриматочного средства самовспенивающихся суппозиториев, в примере 3 приведены способы и методы определения острой токсичности и раздражающего действия четвертичной соли фосфония - трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфония бромида, в примере 4 приведен способ лечения острого гнойно-катарального эндометрита у коров, в примере 5 проведено изучение биологической активности соли фосфония формулы I, изучено антибактериальное, антимикотическое и антиоксидантное действие.
Пример 1
Этап 1.
Синтез 3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензилбромида.
К раствору 2.20 г (0.01 моль) 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола в 20 мл четыреххлористого углерода прибавляют по каплям раствор 1.60 г (0.01 моль) брома в 20 мл четыреххлористого углерода с такой скоростью, чтобы он обесцвечивался по мере прибавления. После окончания реакции, смесь кипятят с обратным холодильником в течение часа, растворитель удаляли в вакууме. Выпавший маслообразный продукт кристаллизуется при замораживании. Выход 2.75 г (92%). Т.пл. 54-56°C.
Элементный анализ C15 H23BrO. Найдено, %: C 60.54; H 8.01. Вычислено, %: C 60.21; H 7.75.
Этап 2.
Синтез трифенил-(3,5-ди-трет.-бутил-4-гидроксибензил)фосфоний бромида формулы I.
К 0.299 г (0.001 моль) 3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил бромида в 5 мл ацетонитрила добавляют раствор 0.262 г (0.001 моль) трифенилфосфина в 5 мл ацетонитрила. Реакционную смесь оставляют на 10 минут. Растворитель удаляют в вакууме на 2/3, после чего продукт осаждают эфиром. Выпавший осадок продукта I отфильтровывают и промывают небольшим количеством эфира. Выход 0.533 г (95%). Т.пл. 225°C (разл.), p
31 м.д. 23.47.
Элементный анализ C33H38OBrP. Найдено, %: C 70.70; H 7.00; P 5.62. Вычислено, %: C 70.58; H 6.82; P 5.52.
Пример 2
Способ получения фармацевтической композиции внутриматочного средства - самовспенивающихся суппозиториев.
Все манипуляции по приготовлению суппозиториев проводили в стерильных условиях. Взвешенное количество ПЭГ (полиэтиленгликоль) расплавляли в фарфоровой ступке, затем к нему добавляли оксиэтилированные жирные спирты. Также смешивали стеариновокислый кальций, лимонную кислоту и соль фосфония в ступке. Отдельно смешивали натрия бикарбонат с сахарозой. Затем к расплавленной смеси ПЭГ и спиртов добавляли смесь стеариновокислого кальция с лимонной кислотой и солью фосфония и смесь натрия бикарбоната с сахарозой. Затем полученную массу помещали в алюминиевую фольгу. После застывания получали суппозитории цилиндрической формы, кремового цвета и однородной структуры. Полученные суппозитории обладают высокой стабильностью при хранении и могут быть изготовлены в заводских условиях как готовая лекарственная форма. Количества ингредиентов суппозиториев приведены ниже.
Полиэтиленгликоль 6000 | 3,0 г | 30% |
Трифенил-(3,5-дитретбутил-4-гидроксибензил)фосфония бромид формулы I | 0,1 г | 1% |
Высшие жирные спирты С16-С21 | 0,06 г | 0,6% |
Кальция стеарат | 0,08 г | 0,8% |
Кислота лимонная | 1,0 г | 10% |
Натрия гидрокарбонат | 1,48 г | 14,8% |
Сахароза | 4,28 г | 42,8% |
Заключение. Разработан состав и технология изготовления внутриматочного средства для профилактики и лечения острого гнойно-катарального эндометрита у коров и других сельскохозяйственных животных, содержащего активнодействующее вещество формулы I и пенообразующую основу, включающую полиэтиленгликоль, лимонную кислоту, бикарбонат натрия, кальций стеариновокислый, сахарозу, оксиэтилированные жирные спирты.
Пример 3
Определение острой токсичности и раздражающего действия четвертичной соли фосфония - трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфония бромида.
Заявленное техническое решение было исследовано посредством проведения экспериментов с получением результатов, соответствующих поставленным целям (задачам) по разработке нового поколения самовспенивающихся суппозиториев на основе соли четвертичного фосфония с низкими лечебными дозами.
Метод изучения токсичности.
Работа по изучению острой токсичности проводилась на базе кафедры паразитологии и радиобиологии Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана в сентябре 2011 года. В опыте использовались 70 белых мышей, самцов и самок, массой тела 18-21 г. Соль фосфония формулы (I) в виде водной суспензии вводили в желудок однократно с помощью зонда. Лабораторные животные, учитывая пол, возраст, массу тела, были разделены на 7 групп: 6 опытных и одну контрольную (по 10 голов в каждой). Мышам опытных групп вводили суспензию соли в возрастающих дозах 50, 100, 150, 200, 250 и 300 мг/кг массы тела, по ДВ соответственно. Мышам контрольной группы в желудок вводили дистиллированную воду. За состоянием здоровья лабораторных животных наблюдали в течение 14 дней после введения, учитывая внешний вид, подвижность, прием корма. Случаи гибели регистрировали, павших животных вскрывали. Результаты приведены в таблице 1.
Однократное пероральное введение препарата в дозе 50 мг/кг массы тела по действующему веществу не вызвало у мышей 1 группы изменений в поведении и общем состоянии животных. До конца эксперимента не было отмечено падежа животных. Эта доза была определена как максимально переносимая.
Во 2-й группе, в которой вводили 100 мг/кг массы тела, наблюдалось угнетение двигательной активности и аппетита животных, которое продолжалось до 5 дней. Три из десяти мышей пали на вторые и третьи сутки.
В группе 3, в которой вводили 150 мг/кг массы тела, также наблюдалось угнетение двигательной активности и аппетита животных. До конца эксперимента погибли 4 из 10 мышей.
В группе 4, в которой вводили 200 мг/кг массы тела, произошел падеж 7 из 10 мышей в период с первых по седьмые сутки после введения.
В группе 5, в которой вводили 250 мг/кг массы тела, наблюдалось значительное ухудшение общего состояния животных, уменьшение двигательной активности и потребления корма. 9 из 10 мышей пали в течение первых пяти суток.
В группе 6, в которой вводили препарат в дозе 300 мг/кг массы тела, наблюдался кратковременный период двигательной активности, который затем сменялся периодом глубокого угнетения и отказом от корма. Все мыши погибли в течение первых и вторых суток после введения. При вскрытии у всех животных 6 группы отмечено вздутие желудочно-кишечного тракта газами на всем протяжении, застой содержимого в желудке, венозный застой в сосудах брюшной полости.
Таблица 1 | |||||
Результаты изучения острой токсичности соли - трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфония бромида формулы (I) на белых мышах | |||||
№ группы | Доза препарата, мг/кг | Количество животных в группе на начало опыта | Пало животных (голов) | Выжило животных (голов) | Летальность, % |
1 | 50 | 10 | 0 | 10 | 0 |
2 | 100 | 10 | 3 | 7 | 30 |
3 | 150 | 10 | 4 | 6 | 40 |
4 | 200 | 10 | 7 | 3 | 70 |
5 | 250 | 10 | 9 | 1 | 90 |
6 | 300 | 10 | 10 | 0 | 100 |
Расчет среднесмертельной дозы произведен по методу Кербера [Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. - Л.: Медгиз, 1962. - 180 с.], с использованием формулы:
LD50 =LD100-( (Z×D))/m, где
D - интервал между каждыми двумя смежными дозами;
Z - среднее арифметическое число животных, у которых наблюдалась учитываемая реакция, под влиянием каждых двух смежных доз;
M - число животных в каждой группе.
При пероральном введении LD 50 препарата формулы (I) составила 160 мг/кг массы тела, по ДВ.
Таким образом, установлено, что соль фосфония формулы I при пероральном введении, в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 [Заугольников С.Д., Кочанов М.М., Лойт А.О., Ставчанский И.И. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности. Экспериментальные методы определения токсичности и опасности химических веществ. М.: Медицина, 1978. - 184 с.], по своим токсикологическим характеристикам относится к III классу опасности - веществам умеренно опасным для теплокровных животных.
Изучение раздражающего действия соли фосфония формулы (I) проводили на пяти кроликах, в возрасте 12 месяцев, одного пола, и примерно одинаковой массы тела (2,5-3 кг). Препарат в виде водной суспензии, с помощью глазной пипетки, вводили под правое веко по одной капле. Для контроля под левое веко, аналогично, вводили дистиллированную воду. За животными наблюдали в течение часа. За это время не было выявлено покраснения конъюнктивы глаз ни у одного из кроликов. Через 12 и 24 часа не было замечено видимых различий левых и правых глаз у опытных кроликов. Это позволило сделать вывод, что лекарственная субстанция суппозиториев, включающая соль формулы (I) не обладает выраженным раздражающим действием.
Пример 4
Способ лечения острого гнойно-катарального эндометрита у коров.
Исследования проводились в ООО АПК «Чистое Поле» т.о. а/ «Юлдуз» Чистопольского района Республики Татарстан на 10 коровах черно-пестрой породы в возрасте от 3 до 8 лет.
Содержание в хозяйстве привязное, в дневное время коровы выпускаются для прогулки на карду. Осеменение искусственное, сперму поставляют из племхозяйства «Чистопольское». По острым инфекционным заболеваниям хозяйство считается благополучным.
В исследования были взяты коровы, больные гнойно-катаральными эндометритами. Болезнь проявлялась гнойно-катаральными истечениями из родовых путей, которые наблюдались больше в утренние часы. Температура тела колебалась от субфебрильной до 39-40°C. Пульс, дыхание учащены. Начало болезни, в основном, было связано с задержанием последа, который отделяли механическим путем (вручную).
Больных животных разделили на 2 группы по 5 коров в каждой: исследуемую и контрольную. Коровам обеих групп проводили туалет родовых путей раствором марганцевокислого калия. Суппозитории вводили однократно (для укрепления достигнутых результатов возможно двукратное введение с интервалом 48 часов в зависимости от состояния животного) в полость матки рукой, одетой в полиэтиленовую перчатку разового использования. Выздоровевшими считали коров, у которых заканчивались истечения, нормализовались пульс, температура, дыхание.
Коров контрольной группы лечили однократно пенными шипучими суппозиториями «Йодопен» (Iodopen) - лекарственное средство, содержит 1,5 г йодповидона (1,57% активного йода). Спустя 5-6 дней истечения из половых путей уменьшались, превращались в более вязкую слизистую массу. Истечения продолжались до 20 дней, у 1 коровы - до 21 дня.
В исследуемой группе для лечения коров применяли однократно шипучие пенные суппозитории, содержащие 0,1 г вещества формулы I. После введения препарат не вызывал беспокойства у животных, раздражения слизистой половых путей. На 4-5 сутки истечения из родовых путей значительно уменьшились, характер их становился более прозрачным, консистенция - более жидкой по сравнению с коровами контрольной группы. Клиническое выздоровление наступило у 3 коров - на 14 день, у 2 - на 16 день.
Заключение.
Таким образом, внутриматочное средство - шипучие пенные суппозитории с действующим веществом формулы I показали явное превосходство по лечебному действию и выраженный эффект при лечении гнойно-катаральных эндометритов у коров в сравнении с «Йодопеном», при содержании лекарственного средства формулы (I) в суппозиториях в 15 раз меньше, чем содержание йодповидона в «Йодопене».
Пример 5
Исследование биологической активности: бактерицидной, фунгицидной и антиоксидантной четвертичной соли фосфония - трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфония бромида.
Фунгицидную и бактерицидную активность соединения формулы I, исследовали на тест-культурах патогенной и условно-патогенной микрофлоры человека. В работе использовали музейные штаммы кафедры микробиологии Казанской государственной медицинской академии: Escherichia coli, Salmonella paratyphi B, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans [Першин Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии. - М.: Медицина, 1971. - 245 с.]. Для оценки активности непосредственно перед исследованием готовили 0.01% растворы исследуемого соединения формулы I в спирте. Суточные культуры музейных штаммов стандартизовали до оптической плотности 0.5 по МакФарланду (1,5×108 КОЕ/мл). Чашки Петри с питательной средой Сабуро (для Candida albicans) и Мюллера-Хинтона для всех остальных микроорганизмов засевали стандартизованными взвесями тест-культур, используя тампон. Через 5 минут на поверхность агара бактериологической петлей наносили каплю исследуемого вещества. В одну чашку помещали 5 химических соединений, в центр чашки наносили растворитель (для контроля возможного антибактериального эффекта) или стандартное лекарственное вещество сравнения. Через 24-48 часов при инкубации 37°C оценивали величину зоны задержки роста микроорганизмов. Результаты представлены в таблице 2.
Таблица 2 | |||||
Антимикотическая и бактерицидная активность соли фосфония формулы I в сравнении с контрольными лекарствами (1% растворы в этаноле) | |||||
Соединение | Микроорганизмы, зона ингибирования роста (диаметр, мм) | ||||
Staphylococcus aureus | Escherichia coli | Pseudomonas aeruginosa | Salmonella р.В | Candida albicans | |
43 | 18 | 16 | 16 | 46 | |
Chlorhexidine | 19 | 15 | 13 | 14 | 16.5 |
Penicillin | 23 | - | 8 | 10 | - |
Griseofulvin | - | - | - | - | 19 |
Антиоксидантную активность определяли методом кулонометрического титрования электрогенерированным бромом [Ziyatdinova O.K., Budnikov G.K., Pogorel'tzev V.I., Ganeev T.S. The application of coulometry for total antioxidant capacity determination of human blood. Talanta. 2006. V.68. No.3. P.800-805]. Электрогенерацию брома осуществляли на потенциометре П-5827М при постоянной силе тока 5,0 мА из 0,2 М KBr в H2SO4. Конец титрования определяли амперометрически, в ячейке с двумя поляризованными платиновыми электродами ( E=300 мВ). Результаты представлены в таблице 3.
Таблица 3 | |||
Антиоксидантная активность соли фосфония I | |||
№ | Соединение (растворы в этаноле) | АОА, кл/мл | Sr |
I | 286±6 | 1.7 | |
Контроль 1 | Аскорбиновая кислота | 185±3 | 2.2 |
Контроль 2 | | 195±4 | 1.4 |
Преимуществами предлагаемого соединения - (формулы I) является то, что оно обладает высокой бактерицидной и одновременно высокой антимикотической активностью, а также значительной антиоксидантной активностью, данный эффект проявляется при низких концентрациях на фоне относительно низкой токсичности предлагаемого соединения. Кроме того, оно термически стойко (по данным метода термогравиметрии и сканирующей калориметрии) до 225°C (I) и не разрушаются под действием мыльного раствора, что делает их перспективными лекарственными и дезинфицирующими средствами в медицине и ветеринарии.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «новизна», предъявляемому к изобретениям, так как из исследованного уровня техники не выявлены технические решения, характеризующиеся указанными признаками, приводящими к реализации заявленных технических результатов заявленного технического решения, которыми является создание внутриматочного средства - «шипучих-самовспенивающихся» суппозиториев для профилактики и лечения острого гнойно-катарального эндометрита (Endometritis puerperalis catarrhalis purulenta acuta) - воспаления родовых путей у коров и других сельскохозяйственных животных, обладающих низкими лечебными дозами (1% действующего вещества - соли четвертичного фосфония), с выраженным антибактериальным, антимикотическим и антиоксидантным действием.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «изобретательский уровень», предъявляемому к изобретениям, так как не является очевидным для специалистов в данной области техники вследствие того, что заявленное техническое решение обеспечивает практическую реализацию объективно существующих в науке и технике противоречий, не разрешимых посредством обычного проектирования, а именно из исследованного уровня техники известно получение солей фосфония для создания препаратов - сжигателей жира для похудания и не изучались антибактериальные, антимикотические и антиоксидантные свойства этих соединений, а полученное соединение формулы I по заявленному техническому решению, обладающее антибактериальными, антимикотическими и антиоксидантными свойствами, отличается высокой эффективностью при лечении и профилактике гнойных послеродовых эндометритов у коров и других сельскохозяйственных животных, таким образом можно сделать вывод о том, что полученные результаты не являются очевидными для специалиста в данной области техники.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «промышленная применимость», предъявляемому к изобретениям, т.к. может быть реализовано на любом отечественном специализированном предприятии с использованием стандартного оборудования, известных отечественных материалов и промышленных технологий.
Класс A61K31/66 соединения фосфора
Класс A61K9/02 суппозитории; свечи; основы для них
Класс A61P15/00 Лекарственные средства для лечения половых или сексуальных расстройств; контрацептивы