способ оценки противовоспалительной активности препарата

Формула изобретения

Способ оценки противовоспалительной активности препарата, включающий введение исследуемого препарата экспериментальному животному, индукцию воспаления каррагенином и исследование крови экспериментального животного спустя 3 часа после индукции воспаления, отличающийся тем, что оценивают лейкограмму крови и определяют соотношение суммы агранулоцитов к сумме гранулоцитов I и при I>0,93 судят о наличии противовоспалительной активности, а при I 0,93 - о ее отсутствии.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области фармакологии и касается лекарственных средств, обладающих противовоспалительной активностью, а именно способов оценки их противовоспалительной активности.

Показателями противовоспалительного эффекта служат антиэкссудативное, анальгезирующее и жаропонижающее действия. Известны способы оценки противовоспалительной активности препаратов онкометрическим методом, по изменению порога болевой чувствительности при контактно-тепловом раздражении, по способности исследуемых препаратов снижать температуру кожи конечности крысы над очагом воспаления. Для исследования противовоспалительной активности используют модель каррагенинового отека лапы у крыс: острую воспалительную реакцию (отек) воспроизводят субплантарным (под подошвенный или плантарный апоневноз) введением 0,1 мл 1% раствора каррагенина. Выраженность воспалительной реакции оценивают через 3 часа после индукции воспаления по изменению объема лапы (онкометрически). Исследуемые вещества вводят зондом в желудок за час до каррагенина (Рейхарт Д.В., Фисенко В.П., Хабриев Р.У. и др. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Ремедиум, 2000. С.234-241).

Данными методами сложно оценить противовоспалительную активность препаратов ввиду большого количества показателей, которые трудно интерпретировать однозначно.

Кроме этого для оценки противовоспалительной активности препаратов используются унифицированные биохимические и гематологические методы, где определяют активность воспалительного процесса по показателям крови: СОЭ, сиаловых кислот, фибриногена и содержание лейкоцитов (Рейхарт Д.В., Фисенко В.П., Хабриев Р.У. и др. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Ремедиум, 2000. С.234-241).

По биохимическим и гематологическим показателям можно косвенно судить о наличии воспалительного процесса, то есть об эффективности противовоспалительного действия исследуемого препарата, однако, данные методы не обладают достаточной точностью ввиду индивидуальных особенностей и большого «разброса» данных, а также ввиду необходимости оценки значительного числа показателей.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является повышения точности и информативности, а также уменьшение количества регистрируемых показателей.

Сущность предлагаемого способа оценки противовоспалительной активности препарата состоит в том, что экспериментальному животному вводят исследуемый препарат, индуцируют острую воспалительную реакцию каррагенином и через 3 часа после индукции воспаления исследуют лейкограмму крови, определяют отношение суммы агранулоцитов к сумме гранулоцитов I, и при I>0,93 судят о наличии противовоспалительной активности, а при I 0,93 - о ее отсутствии.

При любом виде воспаления изменяется качественный и количественный состав крови ее форменных элементов, возрастает количество гранулоцитов, а количество агранулоцитов может уменьшаться.

Поэтому для оценки противовоспалительной активности препаратов можно использовать данные лейкоцитарной формулы крови.

Способ осуществляется следующим образом. Лабораторному животному внутрижелудочно вводят препарат, противовоспалительное действие которого необходимо исследовать. Спустя час после внутрижелудочного введения препарата вводят 0,1 мл 1% раствора каррагенина субплантарно в виде водного раствора для индукции воспаления. Затем, спустя 3 часа после индукции воспаления осуществляют забор крови, для исследования лейкограммы и расчета индекса соотношения Т агранулоциты суммы агранулоцитов к сумме гранулоцитов . При I>0,93 гранулоциты судят о наличии противовоспалительной активности у исследуемого препарата, а при I 0,93 - противовоспалительная активность отсутствует.

Пример 1. Крысе массой 200 г внутрижелудочно вводили ацетилсалициловую кислоту (АСК) в дозе 100 мг/кг. Спустя час после введения АСК индуцировали острую воспалительную реакцию путем субплантарного введения в левую заднюю лапу 0,1 мл 1% раствора каррагенина. Спустя 3 часа после индукции воспаления осуществляли забор крови для исследования лейкограммы (нейтрофилы: палочкоядерные - 1%, сегментоядерные - 35%; эозинофилы - 1%; моноциты - 4%; лимфоциты - 49%). После этого рассчитывали соотношение количества агранулоцитов (53) к гранулоцитам (37). Таким образом, получали значение индекса противовоспалительной активности I=53/37=1,43, т.е. 1,43>0,93, следовательно, препарат обладает противовоспалительной активностью.

Пример 2. Крысе массой 206 г внутрижелудочно ввели 2 мл изотонического раствора. Спустя час индуцировали острую воспалительную реакцию путем субплантарного введения в левую заднюю лапу 0,1 мл 1% раствора каррагенина. Спустя 3 часа осуществляли забор крови для исследования лейкограммы (нейтрофилы: палочкоядерные - 1%, сегментоядерные - 51%; эозинофилы - 1%; моноциты - 4%; лимфоциты - 43%). После этого рассчитывали соотношение количества агранулоцитов (47) к гранулоцитам (53). Индекс противовоспалительной активности I=47/53=0,89, т.е. противовоспалительная активность отсутствует.

Исследование проведено на 70 крысах-самцах линии Wistar массой 160-220 г. Животные были разделены на 7 групп: интактная, контрольная и 5 опытных. Интактной группе (10 крыс) внутрижелудочно вводили 2 мл изотонического раствора без индукции воспаления. Контрольной группе (10 крыс) индуцировали воспаление без фармакологической коррекции. В 5 опытных группах по 10 крыс в каждой исследовали противовоспалительное действие следующих препаратов: ацетилсалициловая кислота (группа 1), диклофенак (группа 2), гипоксен (группа 3), метапрот (группа 4) и гесперидин (группа 5) на фоне каррагенин-индуцированного воспаления. Все исследуемые препараты вводились внутрижелудочно в дозах: ацетилсалициловая кислота - 100 мг/кг, диклофенак - 8 мг/кг, гипоксен, метапрот и гесперидин - 50 мг/кг за час до индукции воспаления. Во всех группах измеряли объем задней левой конечности дважды - до индукции воспаления и спустя 3 часа после индукции воспаления и рассчитывали прирост объема конечностей. В интактной группе воспаление не индуцировали. Острую воспалительную реакцию вызывали путем субплантарного введения 0,1 мл 1% раствора каррагенина в виде водного раствора в левую заднюю лапу крысе. После этого осуществляли забор крови у крыс всех 7 групп для последующего анализа и расчета индекса противовоспалительной активности. Подсчет общего числа лейкоцитов проводили стандартным методом в камере Горяева. В таблице представлены средние показатели индекса противовоспалительной активности и прироста объема конечности контрольной и опытных групп животных.

Из таблицы видно, что при наличии воспаления предлагаемый индекс уменьшается, его величина зависит от тяжести патологического процесса. Для подтверждения состоятельности индекса противовоспалительной активности его значения сопоставлялись с приростом объема конечности, который измеряли онкометрическим методом. Выявлено, что имеется обратная корреляционная зависимость между предложенным индексом противовоспалительной активности и приростом объема конечности (при r=-0,96, p<0,01). При этом наблюдается наибольший прирост объема конечности при каррагениновом воспалении в группе без фармакологической коррекции, а индекс противовоспалительной активности имеет наименьшее значение. Препараты проявляли различную противовоспалительную активность, что выражалось не только изменением объема конечности, но и изменением индекса.

Таким образом, данный способ позволяет судить о наличии воспалительной реакции и, следовательно, о противовоспалительной активности исследуемого препарата. Предлагаемый способ является простым, точным и информативным, и может быть использован как в экспериментальной медицине для проверки противовоспалительных свойств препарата, так и в клинических условиях для контроля проводимой терапии воспалительных процессов.

Способ оценки противовоспалительной активности препарата

Таблица
Группа животных, n=10	Индекс противовоспалительной активности, усл. ед.	Прирост объема конечности, мл
Интактная группа	3,07±0,11	0,01±0,001
Контрольная группа	0,95±0,02	1,06±0,04
АСК	1,55±0,03	0,38±0,02
Диклофенак	1,99±0,02	0,15±0,01
Гипоксен	1,29±0,01	0,71±0,01
Метапрот	1,16±0,02	0,82±0,02
Гесперидин	0,97±0,03	0,97±0,02