способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости

Формула изобретения

1. Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости, включающий нанесение на поверхность раны и/или раневой полости пациента композиции на основе клеточных культур, фиксацию композиции на указанной поверхности пациента, закрытие повязкой и контроль хода лечения пациента, отличающийся тем, что на поверхность раны и/или раневой полости в качестве композиции на основе клеточных культур наносят композицию, включающую культуральную питательную среду, кондиционированную продуктами жизнедеятельности и ростовыми факторами мезенхимальных стволовых клеток человека, полученную на стадиях логарифмической фазы и стационарной фазы роста стабильной клеточной культуры мезенхимальных стволовых клеток, содержащую биологически активные соединения на основе низкомолекулярных пептидов и цитокинов, используемую для культивирования in vitro мезенхимальных стволовых клеток человека, при этом нанесение на поверхность раны и/или раневой полости указанной композиции осуществляют многократно.

2. Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости по п.1, отличающийся тем, что на поверхность раны и/или раневой полости наносят композицию, дополнительно включающую мезенхимальные стволовые клетки человека.

3. Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости по п.1, отличающийся тем, что на поверхность раны и/или раневой полости наносят композицию, дополнительно включающую мезенхимальные стволовые клетки человека в количестве по меньшей мере 10 ⁵ клеток/мл.

4. Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости по п.1, отличающийся тем, что на поверхность раны и/или раневой полости пациента наносят композицию, в которой в качестве кондиционированной культуральной питательной среды используют культуральную питательную среду, кондиционированную продуктами жизнедеятельности и ростовыми факторами мезенхимальных стволовых клеток данного пациента.

5. Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости по п.2, отличающийся тем, что на поверхность раны и/или раневой полости пациента наносят композицию, в которой в качестве мезенхимальных стволовых клеток человека используют мезенхимальные стволовые клетки данного пациента.

6. Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости по п.1, отличающийся тем, что перед нанесением на поверхность раны и/или раневой полости пациента композиции, включающей кондиционированную культуральную питательную среду, у пациента достигают показателя наличия микробных тел на поверхность раны и/или раневой полости не более 10³-10⁵ КОЕ/см².

7. Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости по п.1, отличающийся тем, что нанесение на поверхность раны и/или раневой полости композиции, включающей кондиционированную культуральную питательную среду, осуществляют ежедневно.

8. Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости по п.1, отличающийся тем, что на каждый кв.см поверхности раны и/или раневой полости пациента наносят от 0,1 мл до 0,4 мл композиции, включающей кондиционированную культуральную питательную среду.

9. Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости по п.1, отличающийся тем, что на поверхность раны и/или раневой полости пациента наносят указанную композицию, дополнительно содержащую антибактериальный агент, противогрибковое средство или их комбинации.

10. Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости по п.1, отличающийся тем, что на поверхность раны и/или раневой полости указанную композицию пациента наносят путем орошения раны и/или раневой полости.

11. Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости по п.1, отличающийся тем, что температура композиции при нанесении на поверхность раны и/или раневой полости пациента составляет от плюс 10°С до плюс 36°С.

12. Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости по п.1, отличающийся тем, что температура композиции при нанесении на поверхность раны и/или раневой полости пациента равна температуре окружающей среды.

13. Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости по п.1, отличающийся тем, что рана и/или раневая полость является следствием ожога, пролежней, акне, кожных грибковых инфекций или их сочетания.

14. Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости по п.1, отличающийся тем, что рана и/или раневая полость является следствием травмы.

15. Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости по п.1, отличающийся тем, что рана и/или раневая полость является следствием медицинского вмешательства.

16. Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости по п.1, отличающийся тем, что лечение уменьшает образование рубцов.

17. Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости по п.1, отличающийся тем, что лечение сокращает время заживления ран.

Описание изобретения к патенту

Область техники

Изобретение относится к медицине, в частности к клеточным технологиям, применяемым в медицине, а точнее изобретение касается способа лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости.

Изобретение может быть использовано при лечении глубоких и обширных ожогов, отморожений, травм опорно-двигательного аппарата, трофических язв на фоне хронической венозной недостаточности, хронических ран после длительных нагноительных процессов, трофических язв на фоне сахарного диабета, гнойно-некротических процессов, хронических незаживающих ран различного генеза (чистые раны, раны с гнойным или серозным отделяемым), угревой болезни и ее последствий, келоидных, атрофических и гипертрофических рубцов кожи, трещин, ссадин, пролежней.

Уровень техники

Известно, что пациентам с длительно (не менее 2-х недель) не заживаемыми ранами и раневыми мягкотелыми полостями выполняют консервативную терапию основной системной патологии, согласно рекомендациям ВОЗ, и проводят поэтапные манипуляции по заживлению ран: на стадии воспалительной фазы осуществляют очистку раны (полости) хирургическим путем с последующим использованием ферментных препаратов, водорастворимых мазей (левомеколь, левосин), антисептиков на основе полигексанида гидрохлорида, последующей обработкой раны (полости) ультразвуковым кавитатором, воздушно-плазменным потоком; выполняют контрольные бактериологические посевы. На стадии фазы пролиферации применяют препарат йодопирон, натрия гипохлорид, альгинат для роста и стимуляции грануляций. Программа лечения трофической язвы также базируется на принципе этапности. Фаза мокнутия характеризуется обильным раневым отделяемым. В этой фазе главными задачами местного лечения трофической язвы являются удаление омертвевших тканей и очищение язвы от болезнетворных микробов. Медикаментозное лечение - антибиотики широкого спектра действия, нестероидные противовоспалительные средства (диклофенак, кетопрофен), внутривенного вливания антиагрегантов (реополиглюкин с пентоксифиллином), антиаллергическая терапия (супрастин, тавегил). Местное лечение - ежедневный двух-, трехкратный туалет язвы антисептическим раствором (эплан, диоксидин, хлоргексидин, цитеал, слабый раствор марганцовки или фурацилина, отвары ромашки или череды), мазевые повязки (левосин, левомеколь, диоксиколь и др.), специальные сорбирующие повязки (карбонет). Гемосорбция (очищение крови). На стадии фазы деления клеток, характеризующейся началом заживления трофической язвы и созреванием соединительнотканного рубца, применяют медикаментозное лечение - антиоксиданты (токоферол), заживляющие препараты (актовегин, солкосерил). Местное лечение - куриозин, раневые покрытия (аллевин, альгипор, альгимаф, гешиспон, свидерм). Ультрафиолетовое или лазерное облучение аутокрови. Для ускорения заживления (особенно при обширных трофических язвах) применяют различные биологические пленки (аллокожа, ксенокожа).

Указанные методы лечения не обладают эффективностью, при которой возможно установить заживление раны в конце первой фазы раневого процесса, либо в ходе второй фазы раневого процесса, также трофических язв, ран при синдроме диабетической стопы. Процесс лечения затягивается на продолжительное время и при этом не всегда приводит к положительному результату.

Известен способ лечения нейротрофических язв с помощью аллогенной трансплантации, при котором для наложения на язву используют криоконсервированные аллогеннные фибробласты человека, полученные из кожи крайней плоти новорожденных, выращенные на биосорбирующем сетчатом скафолде из полиглактина. [Дермографт. 55, 56, 57 Batool Kazmi, PhD; Christopher J. Inglefield, FRCS (Plast); Mark P. Lewis, PhD Autologus Cell Therapy: Current Therapy: Current Treatments and Future Prospects // Wounds. 2009 VOLUME: 21 PUBLICATION DATE: Sep 15, 2009, pp. 234-242]. Объявленная эффективность этой технологии составляет 71%, при этом фибробласты являются чужеродным материалом и не обладают активностью, при которой можно говорить о достаточно быстром росте грануляций и краевой эпителизации язвенных ран, кроме того, указанный способ лечения основывается на использовании трудного и ограниченного источника - крайней плоти новорожденных, что обуславливает сложность в технике получения названного клеточного материала, следовательно, указанный способ лечения не может найти широкого применения в лечебной практике.

В качестве прототипа выбран способ лечения нейротрофических язв конечностей, включающий подготовку пациента медикаментозными методами, нанесение на раневую поверхность (на поверхность язвы) клеточных культур, фиксацию клеточных культур на поверхности, закрытие повязкой и контроль хода лечения, при этом нанесение на раневую поверхность клеточных культур проводят однократно путем трансплантации аутологичных клеточных культур фибробластов пациента, обогащенных мультипотентными мезенхимальными стволовыми клетками (ММСК). Доля содержащихся в культуре ММСК составляет от 5 до 15%. Клетки наносят на рану капельным путем и фиксируют на месте тканевого дефекта с помощью фибриновой подложки под повязку, изготовленной из обогащенной тромбоцитами плазмы (RU 2446811, опубл. 10.12.2011, МПК: А61К 35/28). Указанный способ лечения применим исключительно в условиях стационарного лечения из-за сложности использования, в частности, PRP плазмы в связи с необходимостью гемлаборатории, кроме того, указанный способ лечения основан на использовании аутологичных клеточных культур фибробластов, получение которых сложно, достоверно не изучено и занимает продолжительное время. Указанный способ является высокозатратный и не может найти применение в широкой лечебной практике.

Сущность изобретения

В основу заявляемого изобретения положена задача разработать способ лечения, обеспечивающий в экономически доступных условиях многофакторное высокоэффективное терапевтическое действие на длительно незаживающие раны и/или раневые полости различной этиологии и локализации с достижением их заживления в более короткие сроки.

Технический результат состоит в том, что стало возможно в экономически привлекательных условиях в короткие сроки купировать длительно текущие гнойно-воспалительные процессы в ранах, раневых полостях различного генеза и добиваться полного заживления раны и заживление раневых полостей объемом до 20 см².

Эта задача решается при лечении длительно незаживающей раны и/или раневой полости способом, включающим нанесение на поверхность раны и/или раневой полости пациента композиции на основе клеточных культур, фиксацию композиции на указанной поверхности пациента, закрытие повязкой и контроль хода лечения пациента, при котором, согласно изобретению, на поверхность раны и/или раневой полости в качестве композиции на основе клеточных культур наносят композицию, включающую культуральную питательную среду, кондиционированную продуктами жизнедеятельности и ростовыми факторами мезенхимальных стволовых клеток человека, полученную на стадиях логарифмической фазы и стационарной фазы роста стабильной клеточной культуры мезенхимальных стволовых клеток, содержащую биологически активные соединения на основе низкомолекулярных пептидов и цитокинов, используемую для культивирования in vitro мезенхимальных стволовых клеток человека человека, при этом нанесение на поверхность раны и/или раневой полости указанной композиции осуществляют многократно.

Для достижения пролонгированной стимуляции заживления на поверхность раны и/или раневой полости наносят композицию, дополнительно включающую мезенхимальные стволовые клетки человека.

Целесообразно, согласно изобретению, на поверхность раны и/или раневой полости наносить композицию, дополнительно включающую мезенхимальные стволовые клетки человека в количестве по меньшей мере 10⁵ клеток/мл, что способствует еще большему ускорению заживления раны и/или раневой полости при сохранении экономической привлекательности способа.

Согласно изобретению полезно на поверхность раны и/или раневой полости пациента наносить композицию, в которой в качестве кондиционированной культуральной питательной среды используют культуральную питательную среду, кондиционированную продуктами жизнедеятельности и ростовыми факторами мезенхимальных стволовых клеток данного пациента, что обеспечивает морально-этический комфорт пациента.

Для морально-этического комфорта пациента, согласно изобретению, полезно на поверхность раны и/или раневой полости пациента наносить композицию,в которой в качестве мезенхимальных стволовых клеток человека используют мезенхимальные стволовые клетки данного пациента.

В соответствии с заявляемым изобретением, для повышение эффективности терапии по срокам и результату и исключения возникновения инфекционных осложнений в виде нагноения раны, перед нанесением на поверхность раны и/или раневой полости пациента композиции, включающей кондиционированную культуральную питательную среду, у пациента достигают показателя наличия микробных тел на поверхность раны и/или раневой полости не более 10³-10⁵ КОЕ/см².

При использовании композиции, включающей только культуральную питательную среду, кондиционированную продуктами жизнедеятельности и ростовыми факторами мезенхимальных стволовых клеток человека, целесообразно, согласно изобретению, чтобы нанесение на поверхность раны и/или раневой полости композиции осуществляли ежедневно.

Для достижения 95%-ной эффективности лечения целесообразно, согласно изобретению, на каждый кв.см поверхности раны и/или раневой полости пациента наносить от 0,1 мл до 0,4 мл композиции, включающей кондиционированную культуральную питательную среду и мезенхимальные стволовые клетки человека.

В соответствии с заявляемым изобретением, для повышение эффективности терапии по срокам и результату и исключения возникновения инфекционных осложнений на поверхность раны и/или раневой полости пациента целесообразно наносить композицию, дополнительно содержащую антисептик, антибактериальный агент, противогрибковое средство или их комбинации.

При лечении открытых поверхностных ран целесообразно, согласно изобретению, наносить композицию на поверхность раны и/или раневой полости пациента путем ее/их орошения для обеспечения длительного контакта композиции с поверхностью раны и/или раневой полости.

В соответствии с заявляемым изобретением, для повышения эффективности терапии и обеспечения пациенту комфортных ощущений полезно, чтобы температура композиции при нанесении на поверхность раны и/или раневой полости пациента составляла от плюс 10 градусов по Цельсию до плюс 36 градусов по Цельсию, в том числе, была равна температуре окружающей среды.

Варианты выполнения заявляемого изобретения предусматривают, что длительно незаживающая рана и/или раневая полость является следствием ожога, пролежней, акне, кожных грибковых инфекций или их сочетания или же является следствием травмы, в том числе является следствием медицинского вмешательства.

Согласно заявляемому изобретению, эффективность способа дополнительно состоит в том, что лечение уменьшает образование рубцов.

Согласно заявляемому изобретению, эффективность способа дополнительно состоит в том, что лечение сокращает время заживления ран.

Дальнейшие цели и преимущества заявляемого изобретения станут ясны из последующего подробного описания способа лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости.

Подробное описание изобретения

Заявляемый способ лечения предназначен для лечения таких длительно незаживающих ран и/или раневых полостей, которые являются следствием, например, острого повреждения тканей, в том числе операционных ран, или следствием хронического нарушения трофики тканей, следствием инфекционно-воспалительных процессов, в том числе ожога, пролежней, акне, кожных грибковых инфекций или их сочетания.

Способ лечения осуществляется поэтапно следующим образом: сначала проводится обработка поверхности раны и/или раневой полости пациента преимущественно до достижения показателя наличия микробных тел на поверхность раны и/или раневой полости не более 10³ -10⁵ КОЕ/см².

Поскольку раневая поверхность стимулируется лишь в местах контакта живых тканей с факторами роста и регенерации, рана должна быть максимально чистой от некротических тканей.

Затем на поверхность раны и/или раневой полости пациента многократно наносят композицию на основе клеточных культур, а именно композицию, включающую культуральную питательную среду, кондиционированную продуктами жизнедеятельности и ростовыми факторами мезенхимальных стволовых клеток человека, полученную на стадиях логарифмической фазы и стационарной фазы роста стабильной клеточной культуры мезенхимальных стволовых клеток, содержащую биологически активные соединения на основе низкомолекулярных пептидов и цитокинов, используемую для культивирования in vitro мезенхимальных стволовых клеток человека.

Особую ценность заявляемого способа лечения составляет то, что факторы воздействия имеют человеческую природу, то есть изначально обладают высокой активностью по отношению к поврежденным тканям человека, при этом практически и экономически доступны для широкого применения, что обеспечивает возможность для многократного нанесения композиции, содержащей факторы роста и регенерации, на поврежденные участки тканей до их полного заживления.

Местное периодическое применение названной композиции способствует уменьшению микробной контаминации раневых дефектов, стимулирует репаративные и регенеративные процессы, то есть стимулирует процесс заживления.

Эффект санации раны от некротизированных тканей при применении названной композиции связан с секрецией ряда ферментов, таких как коллагеназа и эластаза, обеспечивающих ферментативную деструкцию некротизированных тканей, а также со стимуляцией процесса фагоцитоза, связанного с поглощением и элиминацией клеточного детрита.

Регенерационный эффект при применении названной композиции опосредован наличием и стимуляцией секреции ряда факторов, регулирующих процессы регенерации и развития соединительной ткани, в том числе основного фактора роста, который стимулирует процессы ангиогенеза в раневом дефекте, пролиферацию и дифференцировку различных типов клеток в ране, осуществляет хемотаксис фибробластов и кератиноцитов, а также стимулирует продукцию компонентов внеклеточного матрикса (фибронектина и коллагена); васкулярного эндотелиального фактора роста, который стимулирует процесс ангиогенеза в раневом дефекте (пролиферации, миграции эндотелиальных клеток и образовании новых кровеносных сосудов); трансформирующего фактора роста , который стимулирует процессы пролиферации, дифференцировки и апопотоза различных типов клеток соединительной ткани, стимулирует хемотаксис фибробластов и продукцию ими коллагена и фибронектина; эпидермального фактора роста, который стимулирует процессы пролиферации и дифференцировки различных эпидермальных и эпителиальных клеток, в том числе фибробластов и кератиноцитов, является хемоаттрактантом для указанных типов клеток, стимулирует процесс ангиогенеза; а также ряда других факторов, участвующих в процессах пролиферации, дифференцировки, миграции и апоптоза различных клеток при регенерации поврежденных тканей.

Таким образом, местное применение названной композиции оказывает комплексное терапевтическое воздействие на раневый процесс, состоящее в снижении микробной контаминации; стимуляции процесса очистки раны от некротизированных тканей; стимуляции регенерации.

Говоря о периодическом и многократном применении названной композиции, мы имеем в виду, что нанесение на поверхность раны и/или раневой полости указанной композиции осуществляют преимущественно ежесуточно, по меньшей мере двухкратно за весь период лечения. Периодичность и кратность нанесения композиции, включающей кондиционированную культуральную питательную среду и мезенхимальные стволовые клетки человека, само собой разумеется, зависит от общего состояния пациента, репаративного и регенераторного потенциала его раны и/или раневой полости.

В качестве терапевтических доз названной композиции выбран диапазон от 0,1 мл до 1,0 мл, но преимущественно от 0,1 мл до 0,4 мл на один кв.см поверхности раны и/или раневой полости. Диапазон определен на основании экспериментальных данных и клинических испытаний. При этом рекомендуемая доза композиции при лечении, например, ожогов составляет 50 мл композиции на 10-20 кв.см поверхности.

Достигаемый лечебный эффект заявляемого способа заключается в закрытии некротического кожного дефекта в течение 1,5-2 месяцев и восполнения недостатка ткани в области самого дефекта, причем восстанавливаются все слои дермы и подлежащие ткани, в частности подкожно-жировая клетчатка и фасции. Пролиферативный потенциал композиции, включающей культуральную питательную среду, кондиционированную продуктами жизнедеятельности и ростовыми факторами мезенхимальных стволовых клеток человека, обеспечивает формирование нового микроциркулярного сосудистого русла.

Заявляемый способ лечения также включает фиксацию указанной композиции на поверхности раны и/или раневой полости пациента, закрытие повязкой и контроль хода лечения пациента. Для предохранения от травмирования заживляемой раны и/или полости, целесообразно, чтобы способ включал стадию обеспечения перевязки раны и/или раневой полости.

В соответствии с заявляемым изобретением, при высоком риске инфицирования раны (высокий уровень бактериальной обсемененности) для повышения эффективности терапии по срокам и результату на поверхность раны и/или раневой полости пациента целесообразно наносить вышеуказанную композицию, дополнительно содержащую антисептик мягкого действия, антибактериальный агент, противогрибковое средство или их комбинации.

В соответствии с изобретением, при лечении открытых поверхностных ран целесообразно указанную композицию наносить на поверхность раны и/или раневой полости пациента путем ее/их орошения, что обеспечивает более плотную обработку композицией любого участка поверхности раны и/или раневой полости.

В соответствии с заявляемым изобретением, для повышения эффективности терапии и обеспечения пациенту комфортных ощущений полезно, чтобы температура композиции при нанесении на поверхность раны и/или раневой полости пациента составляла от плюс 10°С по Цельсию до плюс 36°С, в том числе, была равна температуре окружающей среды.

При использовании композиции, включающей только культуральную питательную среду, кондиционированную продуктами жизнедеятельности и ростовыми факторами мезенхимальных стволовых клеток человека, целесообразно, согласно изобретению, чтобы способ включал стадию перевязки по крайней мере ежедневно.

Для достижения пролонгированной стимуляции заживления на поверхность раны и/или раневой полости наносят вышеуказанную композицию, дополнительно включающую мезенхимальные стволовые клетки человека. Целесообразно, согласно изобретению, на поверхность раны и/или раневой полости наносить композицию, дополнительно включающую мезенхимальные стволовые клетки человека в количестве по меньшей мере 10 ⁵ клеток/мл, что способствует еще большему ускорению заживления раны и/или раневой полости при сохранении экономической привлекательности способа.

Согласно изобретению полезно на поверхность раны и/или раневой полости пациента наносить композицию, в которой в качестве кондиционированной культуральной питательной среды используют культуральную питательную среду, кондиционированную продуктами жизнедеятельности и ростовыми факторами мезенхимальных стволовых клеток данного пациента, что обеспечивает морально-этический комфорт пациента. Для морально-этического комфорта пациента, согласно изобретению, полезно на поверхность раны и/или раневой полости пациента наносить композицию,в которой в качестве мезенхимальных стволовых клеток человека используют мезенхимальные стволовые клетки данного пациента.

Заявляемый способ лечения обеспечивает в экономически доступных условиях многофакторное высокоэффективное терапевтическое действие на длительно незаживающие раны и/или раневые полости различной этиологии и локализации с достижением их заживления в ранее не достигаемые короткие сроки. Способ позволяет купировать длительно текущие гнойно-воспалительные процессы в ранах, раневых полостях различного генеза и добиваться полного заживления раны и заживление раневых полостей объемом до 20 кв.см, при этом достигнута возможность существенно уменьшить образование рубцов.

Заявляемый способ был апробирован в эксперименте на беспородных мышах массой 18-20 г. Животным под действием хлороформа в области спины делали контактный ожог раскаленным железом до IIIа-IIIб степени, площадью 4 см² . На поверхность ожоговой раны наносили композицию, включающую культуральную питательную среду, кондиционированную продуктами жизнедеятельности и ростовыми факторами мезенхимальных стволовых клеток человека, полученную на стадиях логарифмической фазы и стационарной фазы роста стабильной клеточной культуры мезенхимальных стволовых клеток, содержащую биологически активные соединения на основе низкомолекулярных пептидов и цитоканов, используемую для культивирования in vitro мезенхимальных стволовых клеток человека. Сверху рану закрывают раневым покрытием или стерильной салфеткой, фиксируют марлевой повязкой, в случае сильного прикрепления к поверхности раны проводят промывание поверхности раны физиологическим раствором из шприца или промывают рану салфеткой, обильно смоченной физиологическим раствором.

Оценку процесса заживления проводили по следующим параметрам: экссудация, грануляция, краевая эпителизация, планиметрия. В первые сутки у животных отмечали симптомы, характерные для общей клинической картины течения ожогового шока, к 2-м суткам во всех группах отмечали краевое отхождение струпа. К 3-м суткам наблюдали образование грануляций и начало краевой эпителизации, а к 5-м суткам раны интенсивно гранулировали, отмечена быстрая краевая эпителизация. К 9-м суткам у животных отсутствовали экссудация. К 10-м суткам отмечали полную эпителизацию ожоговых ран.

После детальной отработки в лабораторных условиях клинические испытания предложенного способа были проведены в условиях военного госпиталя Спецстроя России у 28 пациентов (15 мужчин и 13 женщин) с длительно не заживающими мягкоткаными ранами (22 человека) и мягкоткаными полостями (6 человек), осложненными трофическими нарушениями различного генеза. Средний возраст пациентов от 21 до 73 лет. При обследовании у 7 пациентов раны длительно не заживали на фоне сахарного диабета, у 10 пациентов раны длительно не заживали на фоне артериально-венозной недостаточности нижних конечностей, у 11 пациентов раны длительно не заживали на фоне длительного гнойно-воспалительного процесса с поражением костей (остеомиелит) и мягких тканей в зоне раны.

Отбор пациентов проводился при наличии добровольного информированного согласия, подписанного пациентами, на основании анамнестических данных, результатов врачебного осмотра, лабораторных исследований на предмет возникновения аллергических реакций (биологическая проба). Критерием включения в испытание являлось тяжесть патологии (не менее 2-х недель) раны и/или раневой полости - безуспешность проводимого консервативного лечения, так как не удавалось добиться гранулирования и заживления ран и раневых мягкотелых полостей стандартными препаратами и повязками.

Всем пациентам выполнялась консервативная терапия основной системной патологии в полном объеме, согласно рекомендациям ВОЗ, пациенты с поверхностными ранами велись соответственно классификации заживления ран по R.Ross (1968 г.) на три фазы. В первой фазе (воспалительная фаза) осуществляли очистку ран хирургическим путем с последующим использованием ферментных препаратов, водорастворимых мазей (левомеколь, левосин), антисептиков на основе полигексанида гидрохлорида, с последующей обработкой ран ультразвуковым кавитатором, воздушно-плазменным потоком. Раневые полости различного генеза после купирования воспалительной фазы в течение 1-2 недель промывали гипохлоридом натрия, физиологическим раствором, обогащенным озоном, 0,05%-ным водным раствором хлоргекседина. Выполняли контрольные бактериологические посевы. Во второй фазе (фаза пролиферации) после безуспешного применения препаратов для роста и стимуляции грануляций осуществляли нанесение на поверхность раны/раневой полости композиции, включающей культуральную питательную среду, кондиционированную продуктами жизнедеятельности и ростовыми факторами мезенхимальных стволовых клеток человека, полученную на стадиях логарифмической фазы и стационарной фазы роста стабильной клеточной культуры мезенхимальных стволовых клеток, содержащую биологически активные соединения на основе низкомолекулярных пептидов и цитокинов, используемую для культивирования in vitro мезенхимальных стволовых клеток человека, или указанную кондиционированную культуральную питательную среду и мезенхимальные стволовые клетки человека в количестве по меньшей мере 10⁵ клеток/мл. Температура композиции при нанесении на поверхность раны и/или раневой полости пациента равна температуре окружающей среды.

Нанесение названной композиции осуществляли 1 раз в сутки аппликационным путем или вводили композицию в полость раны шприцом. При появлении грануляций и последующей эпителизации раны нанесение композиции осуществляли 1 раз в три дня.

Для фиксации композиции на поверхности раны использовали марлевую повязку, асептическую повязку и специальную повязку, обеспечивающую «влажное» низкоадгезивное покрытие.

На каждый кв.см поверхности раны и/или раневой полости пациента наносили от 0,1 мл до 0,4 мл композиции, включающей указанную кондиционированную культуральную питательную среду.

Результат отслеживали в динамике.

Аллергических реакций за время исследования отмечено не было.

Динамика процесса эпителизации, состоящего в образовании эпителия в месте повреждения кожи или слизистой оболочки, является важной характеристикой скорости регенерации. Обследование 28 пациентов (15 мужчин и 13 женщин) по истечении различных сроков показало - рост грануляций и краевая эпителизация развивались в срок от 1 до 3-х суток с момента нанесения названной композиции, в том числе заживление раневых полостей объемом до 20 куб.см также происходило в течение 3-х суток. Заживление раневых полостей контролировали клинически и регионарным ультразвуковым исследованием.

В последующем рецидива формирования полости не возникало.

Удалось добиться заживления 93% ран.

Полученные данные свидетельствуют, что использование терапии по предлагаемому способу стимулирует процессы эпителизации раневого дефекта.

При заявленном лечении больных с обширными ожогами при гранулирующих, но слабо эпителизирующихся ранах отмечен положительный эффект и сокращение сроков эпителизации на 5-6 суток. Сроки закрытия и эпителизации ожоговых ран влияют на выраженность рубцовых изменений: чем раньше закрыты ожоговые поверхности, тем менее выражены рубцовые деформации.

При лечении заявленным способом трофических ран различной этиологии и гнойно-некротических процессов после операции некрэктомии на «свежую» рану» позволяло абортировать 1-ю фазу раневого процесса - гидратации и очищения, при этом ускорялся процесс заживления в целом. На слабо гранулирующих ранах, а также на трофических язвах с практически отсутствующими грануляциями наблюдали усиление роста грануляций и эпителизации ран. При длительно существующих трофических язвах с большими размерами, а также при наличии заболеваний, осложняющих течение трофических язв, наблюдали значительное улучшение в виде очищения ран, сокращения размеров, появление грануляций и краевой эпителизации.

Проведенные клинические испытания предложенного способа по лечению длительно незаживающей раны и/или раневой полости убедительно свидетельствуют о технической осуществимости способа и создании практической основы для разработки безопасной и эффективной технологии клеточной терапии в отношении длительно незаживающих ран различного генеза во второй и третьей фазах заживления раны, а также мягкотканых полостей, позволяющей значительно сократить сроки лечения при высокой ее результативности, расширяя возможности использования продуктов клеточных технологий при лечении тяжелых ожогов, трофических язв венозного генеза, пролежней.

Применяемая композиция была испытана на специфическую активность в опытах in vivo и in vitro, а также в клинических условиях при лечении ран различной этиологии. Проведенные испытания показали, что разработанный способ лечения обеспечивает выраженное ранозаживляющее действие и может быть рекомендован как перспективная терапия.

Таким образом, задача изобретения, а именно повышение эффективности терапии длительно незаживающей раны и/или раневой полости различной этиологии и локализации в условиях многофакторного терапевтического действия на воспалительные и регенерационные процессы раневых дефектов реализована в заявленном изобретении.