противомикробная композиция

Формула изобретения

1. Противомикробная композиция, содержащая хлоргексидин и пентан-1,5-диол, где количество хлоргексидина составляет от 0,000001 до 5 мас.%, и количество пентан-1,5-диола составляет от 1 до 75 мас.%.

2. Композиция по п.1, где количество хлоргексидина составляет от 0,00001 до 5 мас.%, и количество пентан-1,5-диола составляет от 3 до 25 мас.%.

3. Композиция по п.2, где количество хлоргексидина составляет от 0,001 до 2,5 мас.%, и количество пентан-1,5-диола составляет от 5 до 15 мас.%.

4. Композиция по п.1, где указанная композиция представляет собой фармацевтическую композицию.

5. Композиция по п.4, где указанная композиция предназначена для местного введения.

6. Композиция по п.4, где указанная композиция содержит носитель и загуститель.

7. Композиция по п.1 для применения в терапии.

8. Применение композиции по п.1 в нетерапевтической дезинфекции.

9. Композиция по любому из пп.1-6 для применения в лечении инфекций.

10. Композиция по п.9, где указанная инфекция представляет собой инфекцию, поражающую кожу.

Описание изобретения к патенту

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Воплощения настоящего изобретения относятся к противомикробной композиции, содержащей хлоргексидин и пентан-1,5-диол и, дополнительно, к применению такой композиции для борьбы с микроорганизмами.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

С микроорганизмами можно бороться разными способами в зависимости от причин борьбы с ними. Подход отличается в зависимости от того, является ли целью предупреждение роста микроорганизмов, ингибирование дальнейшего роста или уменьшение количества и устранение микроорганизма. Кроме того, подход отличается в зависимости от того, где находится микроорганизм, как например, в жидкости, на поверхности, внутри организма млекопитающего и т.д.

В US 2004/0191274 А1 раскрыты композиции для местного применения, которые можно применять в качестве антисептика и/или дезинфицирующего средства. Раскрытая композиция для местного применения содержит по меньшей мере один С1-С4 спирт; по меньшей мере одно противомикробное средство, такое как хлоргексидин; и по меньшей мере одно смягчающее вещество, такое как полиэтиленгликоль.

CN 1130020, Tawil, G.G. et al Alexandria Journal of Pharmaceutical Sciences, 1988, 2 (1), 58-60 и Frank M. von et al Pharmaceutische Industrie, 1991, 53 (5) 512-516, все раскрывают комбинации хлоргексидина и пропиленгликоля. Frank M. von et al делают заключение о том, что не может быть обнаружено синергии между хлоргексидином и пропиленгликолем в комбинации. С другой стороны, предыдущие данные, полученные Tawil, G.G. et al свидетельствуют о том, что пропиленгликоль должен усиливать бактерицидный эффект хлоргексидина. Однако Tawil, G.G. et al не предоставляют данных о пропиленгликоле, протестированном отдельно. В JP 2003267862 раскрыта комбинация хлоргексидина и 1,3-бутандиола.

В WO 07/063065 раскрыто применение композиции, содержащей пентан-1,5-диол, для уменьшения и/или устранения запаха от млекопитающего, такого как запах мочи, менструации, кала, жидкостей из язв ног, пролежней, крови и пота. Кроме того, в WO 07/063065 раскрыт абсорбирующий продукт, содержащий пентан-1,5-диол, для уменьшения и/или устранения запаха от млекопитающего, такого как запах мочи, менструации, кала, жидкостей из язв ног, пролежней, крови и пота.

Существуют различные композиции и соединения, о которых известно, что они обладают антибактериальными свойствами.

Одним примером соединения, о котором известно, что оно обладает антибактериальными свойствами, является пропан-1,2-диол (пропиленгликоль), который представляет собой диол, широко используемый для борьбы с микроорганизмами в дерматологии. Пентан-1,5-диол также применялся в дерматологии для борьбы с микроорганизмами, хотя и не так широко как пропиленгликоль.

Согласно WO 04/112765 антибактериальное действие пентан-1,5-диола, как полагают, разделяют и другие низкомолекулярные алифатические диолы. Кроме того, раскрыто, что применение пентан-1,5-диола оказывает действие против полирезистентных штаммов бактерий.

Хлоргексидин представляет собой химический антисептик. Он является бактерицидным как в отношении грамположительных, так и в отношении грамотрицательных микроорганизмов. Кроме того, он является бактериостатическим. Предполагается, что механизмом действия является разрушение мембраны, а не инактивация АТФаз, как считали ранее. Хлоргексидин используется для общей санитарной обработки кожи, как например, в хирургических скрабах для предоперационной обработки кожи. Он имеет большую продолжительность действия и низкую токсичность. Сообщали о чувствительности кожи к хлоргексидину. Также Хлоргексидин может быть нейротоксичным в высоких концентрациях, в силу чего было бы полезным снизить уровень хлоргексидина, наряду с тем, чтобы по-прежнему сохранялся его эффект.

Полирезистентность бактерий к антибиотикам становится все более и более распространенной. Сегодня в секторе здравоохранения во всем мире имеет место возрастающее беспокойство относительно будущего применения традиционных противомикробных средств. Для изготовления эффективных противомикробных агентов должны использоваться альтернативные способы и подходы.

Соответственно, имеется возрастающая медицинская потребность в идентификации новых противомикробных композиций, которые можно эффективно использовать для инактивации микроорганизмов. Конкретно, имеется растущий список микроорганизмов, таких как бактерии, вирусы и грибы, которые становятся устойчивыми к антибиотикам. Кроме того, имеется растущая популяция индивидуумов, становящихся аллегичными в отношении ряда антибиотиков или консервирующих компонентов, используемых в препаратах антибиотиков, что приводит к потребности в новых композициях, которые можно использовать в качестве альтернатив традиционным технологиям.

Помимо поиска новых антибиотиков, также было бы весьма желательным идентифицировать новые синергические смеси известных противомикробных соединений. Некоторые известные антибиотики в применяемых дозах могут вызывать нежелательные побочные эффекты при введении по отдельности.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Соответственно, настоящее изобретение преследует цель смягчить, ослабить, обойти или устранить один или более чем один из определенных выше недостатков путем предоставления композиции, содержащей от 0,000001 до 5% масс. хлоргексидина и от 1 до 75% масс. пентан-1,5-диола. Кроме того, разные воплощения настоящего изобретения относятся к применению композиции, содержащей хлоргексидин и диол для инактивации микроорганизмов, выбранных из группы, состоящей из грамположительных и грамотрицательных бактерий, грибов, включая дрожжи, плесневые грибы и дерматофиты, и вирусов, особенно Staphylococcus aureus и Р. acnes.

Полезные отличительные признаки изобретения определены в зависимых пунктах формулы.

Подробное описание иллюстративных воплощений

В контексте настоящего описания и приложенной формулы подразумевается, что «С3-С8алкандиол» означает органическое соединение, содержащее линейный или разветвленный насыщенный углеводород с 3-8 атомами углерода, которое имеет две гидроксильные группы, присоединенные к разным атомам углерода. Примеры таких С3-С8алкандиолов охватывают, но не ограничиваются ими, пропан-1,2-диол, пропан-1,3-диол, бутан-1,2-диол, бутан- 1,3-диол, бутан-1,4-диол, бутан-2,3-диол, 2-метилпропан-1,2-диол, 2-метилпропан-1,3-диол, 2-гидроксиметил-1-пропанол, пентан-1,2-диол, пентан-2,3-диол, 2-гидроксиметил-1-бутанол, 2-метилбутан-1,2-диол, 3-метилбутан-1,2-диол, 2-метилбутан-1,3-диол, 3-метилбутан-1,3-диол, 2-метилбутан-1,4-диол, гексан-1,2-диол, гексан-1,6-диол, 2-метилпентан-1,5-диол, 3-метилпентан-1,5-диол, 2-метил-2,4-пентан, гептан-1,7-диол, гептан-1,2-диол, октан-1,2-диол и октан-1,8-диол.

В контексте настоящего описания и приложенной формулы подразумевается, что хлоргексидин включает разные формы хлоргексидина. Такие формы включают, но не ограничиваются ими, хлоргексидин в его свободной форме, соли хлоргексидина, такие как дигидрохлорид, диацетат или D-дигликонат, сольваты хлоргексидина и сольватированные соли хлоргексидина.

Одно воплощение настоящего изобретения относится к композиции, такой как фармацевтическая композиция, содержащей хлоргексидин и С3-С8алкандиол, такой как С3-С5диол. В одном конкретном воплощении данный С3-С8алкандиол выбран из пентан-1,5-диола, пропан-1,2-диола, бутан-1,3-диола, пентан-1,2-диола, гексан-1,2-диола, гексан-1,6-диола и 2-метилпентан-2,4-диола. В одном другом конкретном воплощении данный С3-С8алкандиол выбран из пропан-1,2-диола и пентан-1,5-диола.

В еще одном воплощении согласно примерам, приведенным ниже, С3-С8алкандиол представляет собой пентан-1,5-диол.

Согласно настоящему изобретению предусматривалось, что синергический противомикробный эффект достигается при объединении хлоргексидина с С3-С8алкандиолом, таким как пентан-1,5-диол. Таким образом, предусматривалось, что композиция, содержащая как хлоргексидин, так и С3-С8алкандиол, такой как пентан-1,5-диол, имеет более сильный противомикробный эффект, чем композиции, содержащие те же самые концентрации либо хлоргексидина, либо С3-С8алкандиола, такого как пентан-1,5-диол.

Конкретно синергический эффект между хлоргексидином и пентан-1,5-диолом показан в примерах, приведенных ниже. Хотя WO 07/063065 раскрывает то, что пентан-1,5-диол, при использовании для уменьшения запаха от млекопитающего, может быть объединен с антисептическим агентом, он ничего не говорит о каком-либо возможном синергическом эффекте. Кроме того, WO 07/063065 ничего не говорит о том, какие концентрации указанных компонентов являются подходящими для применения в фармацевтической композиции. Согласно WO 07/063065 следует использовать по меньшей мере 0,1% масс. пентан-1,5-диола. Однако, как здесь раскрыто, такая концентрация является слишком низкой для того, чтобы она имела какой-либо синергический эффект при объединении с хлоргексидином.

Однако вполне возможно, что синергический эффект также достигается при объединении хлоргексидина и С3-С8алкандиола, отличного от пентан-1,5-диола, но пентан-1,5-диол является предпочтительным, так как он хорошо известен по предпочтительному токсикологическому профилю, малому риску в отношении чувствительности и раздражения кожи. Благодаря синергическому противомикробному эффекту можно использовать меньше каждого компонента и все еще получать желаемый эффект. Кроме того, благодаря применению меньшего количества каждого компонента, каждый компонент может вызывать меньшее число побочных эффектов и менее тяжелые побочные эффекты, чем при использовании по отдельности. Композиция, содержащая и хлоргексидин и пентан-1,5-диол, является более эффективной для борьбы с микроорганизмами, чем композиция, содержащая только один активный компонент.

Не будучи связанными какой-либо теорией, можно предположить, что механизм действия хлоргексидина, т.е. разрушение липидной мембраны, поддерживается характерной гидрофобностью С3-С8алкандиолов. В особенности гидрофобность пентан-1,5-диола оказывается в значительной степени подходящей в этом отношении. Кроме того, солюбилизирующие свойства С3-С8алкандиолов могут быть важными в этом контексте. В качестве альтернативы, противомикробный эффект С3-С8алкандиолов улучшается одновременным разрушением липидной мембраны, вызванным хлоргексидином. Другая теория состоит в том, что механизм действия противомикробного эффекта С3-С8алкандиолов состоит в растворении липидных мембран, вследствие чего усиливается способность хлоргексидина разрушать указанную липидную мембрану, и наоборот. Возможно растворяющий эффект и гидрофобность пентан-1,5-диола содействуют хлоргексидину способом, максимально увеличивающим синергический эффект между ними.

Фармацевтическую композицию, содержащую хлоргексидин и пентан-1,5-диол, можно использовать в терапии. При использовании в терапии ее можно вводить местно. Такую вводимую местно композицию можно использовать для лечения разных инфекций, таких как инфекции, поражающие кожу или слизистые оболочки. Примеры таких кожных инфекций включают импетиго, вторично инфицированный атопический дерматит и другие дерматозы с вторичными инфекциями. Хлоргексидин и пентан-1,5-диол также можно использовать для лечения грибковых инфекций кожи и слизистых оболочек, таких как эпидермофития стопы, трихофития гладкой кожи, дерматофитный онихомикоз, кандидозные инфекции кожи и слизистых оболочек и т.д., и вирусных инфекций, таких как инфекции вирусом герпеса (например лабиальный герпес), папалломы и поксвирусом кожи или слизистых оболочек.

Фармацевтическую композицию, содержащую хлоргексидин и пентан-1,5-диол, также можно применять для инактивации микроорганизмов, выбранных из группы, состоящей из грамположительных и грамотрицательных бактерий, грибов, включая дрожжи, плесневые грибы и дерматофиты, и вируса. Примеры таких микроорганизмов включают, но не ограничиваются ими, Staphylococcus aureus, P. acnes, Streptococci, грамотрицательные палочки, Candida albicans, Candida glabrata, Malassezia, плесневой гриб Aspergillus fumigatus и дерматофиты Trichophyton rubrum, T. mentagrophytes, Epidermophyton floccusum, Microsporum canis, вирус папилломы, вирус герпеса и поксвирус. Было показано, что композиция, содержащая хлоргексидин и пентан-1,5-диол, является особенно эффективной при воздействии на Staphylococcus aureus и Р. acnes, то есть уничтожении, борьбе с ними или предупреждении Staphylococcus aureus и Р. acnes, как раскрыто в примерах, приведенных ниже.

Композиция для местного введения может принимать форму или быть включенной в жидкий, полужидкий или твердый дезинфицирующий препарат, бактериостатический или бактерицидный раствор, лосьон, крем, мыло, шампунь, мазь, пасту, влажное полотенце, гигиеническую посуду, пластырь, пеленку или подобное защитное устройство для личной гигиены.

Если она предназначена для нанесения на кожу или слизистые оболочки, композиция согласно воплощениям изобретения может содержать один или несколько агентов для регулирования тонуса или увлажняющих агентов, таких как хлорид натрия, мочевина и молочная кислота, водопоглощающих агентов, красителей, таких как карбонат кальция и оксид цинка, и ароматизирующих веществ, таких как эфирное масло. Композиция по изобретению также может содержать катионный, нейтральный или анионный детергент, в частности соль жирной кислоты.

Предпочтительно, композиция, содержащая хлоргексидин и С3-С8алкандиол, и предпочтительно пентан-1,5-диол, также содержит носитель. Носитель может быть водным носителем или липидным носителем, который может дополнительно содержать загуститель. Такие загустители могут быть выбраны из производных целлюлозы, в частности метилцеллюлозы, гидроксиметилцеллюлозы, гидроксиметилпропилцеллюлозы. Согласно дополнительному воплощению изобретения носитель содержит соль жирной кислоты.

Другое воплощение изобретения относится к фармацевтическим композициям, как раскрыто выше, которые дополнительно включают один или более чем один фармацевтически приемлемый адъювант или эксципиент. Такие фармацевтические композиции можно получить способом, известным в данной области, и они являются достаточно стабильными при хранении и подходящими для введения человеку и животным.

Фармацевтическая композиция, как здесь раскрыто, подлежащая местному введению, может принимать форму мазей, лосьонов, паст, кремов, гелей, талька, спреев, растворов и эмульсий, как легко поймет специалист в данной области техники. Такие мази, лосьоны, кремы и гели могут содержать эксципиенты, такие как животные и растительные жиры, воска, парафины, крахмал, трагакантовую камедь, производные целлюлозы, полиэтиленгликоли, силиконы, бентониты, кремниевую кислоту, тальк и оксид цинка или смеси этих веществ. Тальк и спреи могут содержать эксципиенты, такие как лактоза, тальк, кремниевая кислота, гидроксид алюминия, силикат кальция и полиамидные порошки или их смеси. Спреи также могут содержать пропелленты, такие как хлорфторуглеводороды. Растворы и эмульсии могут содержать эксципиенты, такие как растворители, солюбилизирующие агенты и эмульгаторы, такие как вода, этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленовый спирт, диметилформамид, масла, такие как хлопковое масло, арахисовое масло, масло зародышей кукурузы, оливковое масло, касторовое масло и кунжутное масло, глицерин, глицеролформаль, тетрагидрофурфуриловый спирт, полиэтиленгликоли и сложные эфиры жирных кислот, такие как сорбитан, или их смеси.

Фармацевтическую композицию, как здесь раскрыто, можно вводить пациенту в фармацевтически эффективной дозе. Под "фармацевтически эффективной дозой" подразумевается доза, которая является достаточной для получения желаемых эффектов в отношении состояния, для которого ее вводят. Точная доза зависит от активности соединения, способа введения, природы и тяжести расстройства, возраста и массы тела пациента, и могут быть нужны разные дозы. Введение дозы можно проводить как однократным введением в форме отдельной единицы дозы, так и несколькими меньшими единицами дозы или многократными введениями разделенных доз через определенные интервалы времени.

Термин «пациент» для целей настоящего изобретения включает как человека, так и другого млекопитающего. Таким образом, данные способы применимы как к терапии человека, так и для ветеринарных применений.

Одно дополнительное воплощение настоящего изобретения относится к композиции, такой как фармацевтическая композиция, содержащей по меньшей мере 0,000001% масс., как например, по меньшей мере 0,00005% масс. хлоргексидина и по меньшей мере 1% масс. С3-С8алкандиола, такого как пентан-1,5-диол.

Другое воплощение настоящего изобретения относится к композиции, такой как фармацевтическая композиция, содержащей от 0,000001% масс. до 5% масс., как например, от 0,00005% масс. до 5% масс. или от 0,00005% масс. до 1% масс. хлоргексидина и от 1 до 75% масс., как например, от 1 до 25% масс., от 2 до 15% масс. или от 3 до 15% масс. С3-С8алкандиола, такого как пентан-1,5-диол.

Другое воплощение настоящего изобретения относится к композиции, такой как фармацевтическая композиция, содержащей по меньшей мере 0,00001% масс. хлоргексидина и по меньшей мере 3% масс. пентан-1,5-диола. Несмотря на то, что можно использовать меньшие концентрации, противомикробный эффект является более отчетливым при этих или при более высоких концентрациях.

Другое воплощение настоящего изобретения относится к композиции, такой как фармацевтическая композиция, содержащей по меньшей мере 0,0001% масс.хлоргексидина и по меньшей мере 5% масс. пентан-1,5-диола.

Поскольку более высокие концентрации могут увеличить риски побочных эффектов, другое воплощение настоящего изобретения относится к композиции, такой как фармацевтическая композиция, содержащей от 0,0001 до 5% масс., как например, от 0,001 до 2,5% масс. хлоргексидина и от 3 до 25% масс., как например, от 5 до 15% масс. пентан-1,5-диола.

Другое воплощение настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере 0,001% масс. хлоргексидина и С3-С8алкандиол, такой как пентан-1,5-диол.

Другое воплощение настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей хлоргексидин и по меньшей мере 2% масс. С3-С8алкандиола, такого как пентан-1,5-диол.

Другое воплощение настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей хлоргексидин и по меньшей мере 5% масс. С3-С8 алкандиола, такого как пентан-1,5-диол.

При объединении вместе хлоргексидин и пентан-1,5-диол проявляют синергические антибактериальные эффекты, как показано в примерах, приведенных ниже. Эти синергические эффекты делают возможным использование меньших количеств соответствующих соединений, в то же время получая желаемый эффект. Комбинация хлоргексидина и пентан-1,5-диола является эффективной в предупреждении роста различных микроорганизмов. Такие микроорганизмы включают бактерии, грибы и вирусы. Такие бактерии включают, но не ограничиваются ими, S. aureus и Р. acnes.

Аналогично хлоргексидину, композицию, содержащую хлоргексидин и С3-С8алкандиол, также можно использовать для общей санитарной обработки кожи, как например, в хирургических скрабах для предоперационной обработки кожи. Дезинфекция, достигаемая путем применения такой композиции, будет более эффективной, чем дезинфекция при использовании одного только хлоргексидина. Кроме того, хорошо известный водосвязывающий эффект диолов делает их прекрасными увлажнителями кожи и, следовательно, будет делать такую обработку менее грубой при нанесении на кожу.

Кроме того, композицию, содержащую хлоргексидин и С3-С8алкандиол, можно использовать при других типах дезинфекции и очистки. Без ограничений такие дезинфекции могут включать обработку различных поверхностей, таких как полы, стены, поверхности столов, поверхности скамеек, вкладные доски раздвижных столов и хирургические инструменты. Такие дезинфекции также можно объединять с автоклавированием, или они даже могут заменять его. В одном воплощении такие дезинфекции включают дезинфекцию кожи, но другое воплощение, относящееся к дезинфекции, исключает дезинфекции частей тела человека или животного. Такие дезинфекции, исключающие дезинфекции частей тела человека или животного, следует отличать от терапевтического способа.

В воплощении, где композиция, содержащая хлоргексидин и С3-С8алкандиол, используется для дезинфекции и/или очистки поверхности, а не части тела человека или животного, содержание С3-С8алкандиола может составлять 1-95% масс., а содержание хлоргексидина - от 0,000001% до 10% масс.

Хотя настоящее изобретение было описано выше со ссылкой на конкретные иллюстративные воплощения, не подразумевается, что оно ограничено конкретной изложенной здесь формой. Скорее данное изобретение ограничивается только сопровождающей формулой изобретения, и другие воплощения, отличные от конкретных воплощений, приведенных выше, равным образом возможны в пределах объема этой приложенной формулы изобретения.

В данной формуле изобретения термин «содержит/содержащий» не исключает присутствия других разновидностей или стадий. Кроме того, несмотря на то, что отдельные отличительные признаки могут быть включены в разные пункты формулы изобретения, они возможно преимущественно могут быть объединены, и включение в разные пункты формулы изобретения не подразумевает то, что комбинация отличительных признаков не является возможной и/или полезной. Кроме того, ссылки в единственном числе не исключают множества. Термины «первый», «второй» и т.д. не исключают множества.

Примеры

Приведенные ниже примеры предназначены только для того, чтобы дополнительно проиллюстрировать данное изобретение, и никоим образом не предназначены для того, чтобы ограничить объем данного изобретения, как определено приложенной формулой изобретения.

Пример 1. МИК пентан-1,5-диола и хлоргексидина против S. aureus

Минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) пентан-1,5-диола и хлоргексидийа против S. aureus определяли с использованием концентраций бактерий 6×10⁶ (20 мкл, нанесенные на чашки с DST-агаром). Результаты описаны ниже в таблице 1 и 2.

Таблица 1
МИК пентан-1,5-диола против S. aureus и Р. acnes
Пентан-1,5-диол (% масс.)	МИК (S. aureus)
5	+++a
6	++
7	++
8	+
9	-
10	-
20	-
30	-
Контроль (без пентан-1,5-диола)	+++
а: +++: Такой же рост, что и на контрольной чашке без какого-либо количества хлоргексидина и/или пентан-1,5-диола
++: Сниженный рост по сравнению с контролем
+: Очень слабый рост
-: Нет роста
Таблица 2
МИК диглюконата хлоргексидина против S. aureus
Хлоргексидин (% масс.)		МИК
0,00001		+++

0,00005	++
0,0001	-
0,0005	-
0,001	-
0,005	-
0,01	-
0,02	-
0,05	-
0,1	-
0,5	-
1
Контроль (без хлоргексина)	+++

Пример 2. МИК пентан-1,5-диола в комбинации с хлоргексидином против S. aureus

Минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) пентан-1,5-диола, объединенного с хлоргексидином, против S. aureus определяли с использованием концентраций бактерий 6×10 ⁶ (20 мкл, нанесенные на чашки с DST-агаром). Результаты описаны ниже в таблице 3.

Таблица 3
МИК пентан-1,5-диола, объединенного с диглюконатом хлоргексидина, против S. aureus
Хлоргексидин 0,0001% и	МИК	Хлоргексидин 0,00005% и	МИК	Хлоргексидин 0,00001% и	МИК
9% пентан-1,5-диол	-	9% пентан-1,5-диол	-	9% пентан-1,5-диол	-
8% пентан-1,5-диол	-	8% пентан-1,5-диол	-	8% пентан-1,5-диол	-
7% пентан-1,5-диол	-	7% пентан-1,5-диол	-	7% пентан-1,5-диол	+
6% пентан-1,5-диол	-	6% пентан-1,5-диол	-	6% пентан-1,5-диол	++
5% пентан-1,5-диол	-	5% пентан-1,5-диол	-	5% пентан-1,5-диол	+++

Как видно из таблиц 1-3, очевидно имеется синергический противобактериальный эффект при объединении пентан-1,5-диола с диглюконатом хлоргексидина. В то время как ни хлоргексидин в концентрации 0,00005% или ниже, ни пентан-1,5-диол в концентрации 8% или ниже не являются эффективными против S. aureus, комбинация 0,00005% хлоргексидина с 5% или более пентан-1,5-диола является эффективной. Кроме того, даже такие низкие концентрации хлоргексидина и пентан-1,5-диола, как 0,00001% и 7%, соответственно, являются эффективными при объединении. Пример 3. МИК пентан-1,5-диола и хлоргексидина против Р. acnes Минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) пентан-1,5-диола и хлоргексидина против Р. acnes определяли с использованием концентраций бактерий 6×10⁶ (20 мкл, нанесенные на чашки с агаром с кровью). Результаты описаны ниже в таблице 4 и 5.

Таблица 4
МИК пентан-1,5-диола против Р. acnes
Пентан-1,5-диол (% масс.)	МИК
1	+++
3	++
5	+
6	-
7	-
10	-
20	-
30	-
Контроль (без пентан-1,5-диола)	+++
Таблица 5
МИК диглюконата хлоргексидина против Р. acnes
Хлоргексидин (% масс.)		МИК
0,00001		+++
0,00005		++
0,0001		-
0,0005		-
0,001		-
0,005		-
0,01		-
0,02		-

0,05	-
0,1	-
0,5	-
1	-
Контроль (без хлоргексидина)	+++

Пример 4. МИК пентан-1,5-диола в комбинации с хлоргексидином против Р. acnes

Минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) пентан-1,5-диола, объединенного с хлоргексидином, против Р. acnes определяли с использованием концентраций бактерий 6×10⁶ (20 мкл, нанесенные на чашки с агаром с кровью). Результаты описаны ниже в таблице 6.

Таблица 6
МИК пентан-1,5-диола, объединенного с диглюконатом хлоргексидина, против Р. acnes
Хлоргексидин 0,0001% и	МИК	Хлоргексидин 0,00005% и	МИК	Хлоргексидин 0,00001% и	МИК
6% пентан-1,5-диол	-	6% пентан-1,5-диол	-	6% пентан-1,5-диол	+
5% пентан-1,5-диол	-	5% пентан-1,5-диол	-	5% пентан-1,5-диол	++
3% пентан-1,5-диол	-	3% пентан-1,5-диол	-	3% пентан-1,5-диол	+++
1% пентан-1,5-диол	-	1% пентан-1,5-диол	++	1% пентан-1,5-диол	+++

Как видно из таблиц 4-6, очевидно имеется синергический противобактериальный эффект при объединении пентан-1,5-диола с диглюконатом хлоргексидина. В то время как ни Хлоргексидин в концентрации 0,00005% или ниже, ни пентан-1,5-диол в концентрации 5% или ниже не являются эффективными против Р. acnes, комбинация 0,00005% хлоргексидина с 3% или более пентан-1,5-диола является эффективной.

Пример 5. МИК пентан-1,5-диола в комбинации с хлоргексидином против S. pvogenes A CCUG 4208

Минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) пентан-1,5-диола, объединенного с хлоргексидином, против S. pvogenes A CCUG 4208 определяли с использованием концентраций бактерий 6×10⁷ (20 мкл, нанесенные на чашки с агаром с кровью). Результаты описаны ниже в таблице 7 и 8.

Таблица 7
МИК диглюконата хлоргексидина и 1,5-пентандиола против S. pyogenes
	1,5-пентандиол (%)	МИК	Диглюконат хлоргексидина (%)			МИК
2		+++	0,00001			+++
4		++	0,00005			+++
6		+	0,0001			+
7		-	0,0005			-
8		-	0,001			-
9		-	0,005			-
10		-	0,01			-
15		-	0,05			-
			0,1			-
			0,5			-
Положительный контроль (чашки с агаром без вещества) показал значение МИК, соответствующее +++.
Таблица 8
МИК пентан-1,5-диола, объединенного с диглюконатом хлоргексидина против S. pyogenes
1,5-пентандиол (2%)					МИК
#1 диглюконат хлоргексидина				0,00001%	++
#2 диглюконат хлоргексидина				0,00005%	+
#3 диглюконат хлоргексидина				0,0001%	-
1,5-пентандиол (4%)					МИК
#4 диглюконат хлоргексидина				0,00001%	+
#5 диглюконат хлоргексидина				0,00005%	-
#6 диглюконат хлоргексидина				0,0001%	-
1,5-пентандиол (6%)					МИК
#7 диглюконат хлоргексидина				0,00001%	-
#8 диглюконат хлоргексидина				0,00005%	-
#9 диглюконат хлоргексидина				0,0001%	-

Как видно из таблицы 7 и 8, очевидно имеется синергический противобактериальный эффект при объединении пентан-1,5-диола с диглюконатом хлоргексидина. В то время как ни хлоргексидин в концентрации 0,0005% или ниже, ни пентан-1,5-диол в концентрации 6% или ниже не являются эффективными против S. pyogenes, комбинация 0,00001% хлоргексидина с 4% или более пентан-1,5-диола является эффективной.

Пример 6. МИК пентан-1,5-диола в комбинации с хлоргексидином

В данном исследовании использовали раствор диглюконата хлоргексидина (CHG), 20%-ный в воде, C9394-25ML (Sigma, St. Louis, USA) и PD (BASF AG, Ludwigshafen, Germany) и тестировали следующие контрольные штаммы: С. albicans (CCUG 5594), S. aureus (CCUG 17621) и Р. acnes (CCUG 1794).

Минимальную ингибирующую концентрацию CHG и пентан-1,5-диола (PD) определяли методом разведении в агаре. Серию разведении каждого соединения готовили в среде с агаром и кровью для Р. acnes и в агаре для диагностического теста на чувствительность (DST) (Oxoid, Basingstoke, UK) для С. albicans и S. aureus. Серию разведении с каждым агентом делали со свежеприготовленным агаром при 48-50°С. Интервалы конечных концентраций были следующими: раствор CHG от 0,00001 до 1% (масс./об.) и PD 1-30% (об./об.). Полученные чашки использовали немедленно после затвердевания агара.

Для каждого организма получали инокулят путем выращивания организмов на агаре с кровью. Колонии суспендировали в фосфатно-солевом буферном растворе (PBS), и суспензии доводили приблизительно до 6×10⁶ КОЕ/мл (колониеобразующая единица/мл) для С. albicans и Р. acnes, и 6×10⁵ КОЕ/мл для S. aureus. Чашки инокулировали 20 мкл бляшек и инкубировали в течение одних суток для С. albicans и S. aureus и трех суток для Р. acnes. Затем определяли МИК как наименьшую концентрацию соединения, ингибирующую рост изолятов.

Во-первых, для каждого микроорганизма определяли МИК CHG и PD, соответственно. Затем на каждом микроорганизме тестировали интервал объединенных концентраций CHG и PD для определения того, существовала ли синергическая активность. Определение синергического эффекта представляет собой: «эффект, который больше, чем сумма эффектов двух лекарственных средств, такая как уравнение: 1+1 ». Каждый изолят тестировали дважды.

CHG был эффективным против всех микроорганизмов (Таблица 9). МИК CHG составляли 0,0005 (% масс./об.) против С. albicans и 0,0001 (% масс./об.) против S. aureus и Р. acnes.

PD демонстрировал активность против С. albicans, S. aureus и Р. acnes в 5, 9 и 6% об./об., соответственно. МИК CHG была значительно ниже, чем для PD с множителем 1×10^-4 для С. albicans, 6×10^-5 для S. aureus и 9×10^-5 для Р. acnes (Таблица 9).

При объединении CHG и PD в меньших концентрациях, чем их соответствующие МИК, их противомикробная активность возрастала. МИК CHG снижалась от 0,0005 до 0,00005 (%, масс./об.), и МИК PD от 5 до 3 (%, об./об.) для полного предотвращения роста С. albicans. МИК CHG снижалась от 0,0001 до 0,00001 (%, масс./об.), и МИК PD - от 9 до 8 (%, об./об.) для S. aureus. МИК CHG снижалась от 0,0001 до 0,00005 (%, масс./об.), и МИК PD от 6 до 3 (%, 06./об.) для полного предотвращения роста Р. acnes (Таблица 9).

Таблица 9
Минимальная ингибирующая концентрация (МИК) диглюконата хлоргексидина (CHG) (% масс./об.) и пентан-1,5-диола (PD) (% об./об.) по отдельности или в комбинации против С.albicans, S. aureus и Р. acnes методом разведении в агаре. Отношение показывает уменьшение МИК CHG и PD по отдельности и в комбинации
Штаммы	МИК одного		МИК объединенных		Отношение (одного/объединенных)
	CHG	PD	CHG	PD	CHG/CHG+PD	PD/PD+CHG
С.albicans CCUG 5594	0,0005	5	0,0005	3	10	2
S. aureus CCUG 17621	0,0001	9	0,00001	8	10	1
P. acnes CCUG 1794	0,0001	6	0,00005	3	2	2