способ коррекции l-name индуцированного дефицита оксида азота комбинацией тадалафила и l-норвалина в эксперименте

Формула изобретения

Способ коррекции L-NAME индуцированного дефицита оксида азота, отличающийся тем, что на фоне его моделирования белым крысам самцам линии Wistar с индуцированным дефицитом оксида азота внутрижелудочно вводят тадалафил 0,09 мг/кг и L-норвалин 10 мг/кг ежедневно в течение 7 суток.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является «Способ коррекции эндотелиальной дисфункции тадалафилом при L-NAME индуцированном дефиците оксида азота» (Патент на изобретение № 2364395), который заключается в использовании селективного ингибитора фосфодиэстеразы (ФДЭ5) недлительного действия тадалафила в дозе 0,9 мг/кг для восстановления вазорелаксирующей функции на фоне блокады эндотелиальной NO-синтазы.

Основным недостатком способа является то, что монотерапия тадалафилом в дозе 0,9 мг/кг является менее безопасной с точки зрения возникновения побочных эффектов, а также направлена только на одно звено патогенетического механизма развития эндотелиальной дисфункции - активность пути NO/цГМФ. В то же время не учитывается возможность фармакологического воздействия на другую точку приложения в патогенезе эндотелиальной дисфункции - блокады фермента аргиназы, снижающей биодоступность оксида азота.

Техническим результатом изобретения является способ коррекции L-NAME индуцированного дефицита оксида азота in vivo, включающий использование комбинации тадалафила и L-норвалина.

Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO L-нитро-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг проводится ее коррекция внутрижелудочным введением малой дозы тадалафила 0,09 мг/кг и L-норвалина в дозе 10 мг/кг однократно в сутки.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на белых крысах-самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин-метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Biopac". Функциональные пробы: эндотелийзависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелийнезависимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 сек приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных: для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 сек развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 сек после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 сек. Блокада NO-синтазы с помощью длительного, ежедневного, в течение 7-суток, внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин-метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.

Одновременное введение L-NAME и комбинации тадалафила (0,09 мг/кг с L-норвалином 10 мг/кг приводило к снижению показателей исходных значений АД (САД - 174,4±1,9, ДАД - 111,2±0,7 мм рт.ст.) (таблица 1).

Таблица 1
Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции комбинацией тадалафила с L-норвалином
Группы животных	Функциональные пробы	САД, мм рт.ст.	ДАД, мм рт.ст.	ЧСС, уд. в мин.
Интактные	Исходные	137,7±3,7	101,9±4,3	420,0±9,0
	ЭЗВ с АХ	84,3±4,5	38,7±2,8	416,0±14,0
	ЭНЗВ с НП	83,0±3,7	42,1±4,4	415,0±10,0
Получавшие L-NAME (25 мг/кг)	Исходные	190,3±6,7*	145,0±3,9*	428,0±11
	ЭЗВ с АХ	110,6±5,2*	82,8±6,6*	426,0±14,0
	ЭНЗВ с НП	88,7±4,7	50,8±4,2	426,0±13,0
L-NAME (25 мг/кг) + тадалафил (0,09 мг/кг) + L-норвалин (10 мг/кг)	Исходные	174,4±1,9**	111,2±0,7**	449,1±34,8
	ЭЗВ с АХ	72,6±4,5**	51,5±3,2**	444,2±39,4*
	ЭНЗВ с НП	93,9±3,6	55,2±3,6	467,5±35,5*
* - p<0,05 в сравнении с группой интактных, ** - p<0,05 в сравнении с группой L-NAME

Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привело к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.

Рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.

Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ использовано это отношение как показатель коррекции дефицита оксида азота. Так в группе, где на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME вводилась комбинация тадалафила с L-норвалином, это отношение соответствовало значению 1,8±0,1, при этом концентрация нитрит-ионов (NOx) увеличивалась до 4,8±0,2 мкМ/л (таблица 2).

Таблица 2
Показатели, отражающие коррекцию L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота комбинированным введением L-норвалина и тадалафила
Группы животных	Функциональные пробы	Прирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.)	Время сосудистой реакции (сек.)	Площадь сосудистой реакции (усл. ед.)	NOx (мкМ/л)	Отношение площадей сосудистой реакции АХ кНП
Интактные	АХ	59,9±2,9	42,2±0,8	1268,0±74,8	7,2±0,6	1,1±0,1
	НП	61,0±3,0	45,1±1,0	1375,3±93,7
L-NAME	АХ	68,0±4,1	20,0±1,4*	695,3±87,6*	2,3±0,6*	5,4±0,6*
	НП	98,0±2,0*	67,4±1,4*	3322,7±116,7*
L-NAME + тадалафил + L-норвалин	АХ	87,0±7,7**	30,2±4,7*	1205,7±121,4**	4,8±0,2**	1,8±0,1**
	НП	69,0±6,0**	62,0±2,5*	2128,1±197,4**
* - p<0,05 в сравнении с группой интактных, ** - p<0,05 в сравнении с группой L-NAME

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать эффективную коррекцию L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота комбинацией тадалафила и L-норвалина.