улучшение роста бифидобактерий в ферментированных молочных продуктах

Формула изобретения

1. Способ получения ферментированного молочного продукта, включающий:

i) инокулирование молока штаммом Bifidobacterium animalis lactis BB-12© с регистрационным номером DSM 15954, бактериями Lactobacillus bulgaricus и штаммом Streptococcus thermophilus, ST6008 с регистрационным номером DSM 18111;

ii) ферментацию молока; и

iii) упаковывание ферментированного молочного продукта.

2. Способ по п.1, в котором ферментированный молочный продукт содержит по меньшей мере 10⁸ КОЕ/г бифидобактерий.

3. Способ по п.1, в котором ферментированный молочный продукт содержит по меньшей мере 10⁸ КОЕ/г бифидобактерий после 28 дней хранения при температуре +6°C.

4. Способ по п.1, в котором на стадии i) молоко инокулируют от 10⁵ до 3·10⁷ КОЕ/г Bifidobacterium, и инокулируют от 10⁴ до 3,5·10⁶ КОЕ/г штаммом Streptococcus thermophilus ST6008.

5. Способ по п.1, в котором на стадии i) молоко дополнительно инокулируют по меньшей мере штаммом Lactococcus lactis подвид lactis DN224.

6. Способ по любому из пп.1-5, в котором ферментированный молочный продукт упаковывают в герметичную упаковку, содержащую от 25 до 3000 мл продукта.

7. Заквасочная культура, содержащая:

i) от 10⁵ до 10¹² КОЕ/г штамма Bifidobacterium animalis подвид lactis BB-12© с регистрационным номером DSM 15954,

ii) от 10⁵ до 10¹² КОЕ/г штамма Streptococcus thermophilus, ST6008 с регистрационным номером DSM 18111, и

iii) бактерии Lactobacillus bulgaricus.

8. Заквасочная культура по п.7, дополнительно содержащая:

iii) от 10⁵ до 10¹² КОЕ/г штамма Lactococcus lactis подвид lactis DN224.

9. Ферментированный молочный продукт, содержащий штамм Bifidobacterium animalis подвид lactis ВВ-120 с регистрационным номером DSM 15954, бактерии Lactobacillus bulgaricus и штамм Streptococcus thermophilus ST6008 с регистрационным номером DSM 18111.

10. Ферментированный молочный продукт по п.9, содержащий от 10³ до 10¹⁰ КОЕ/г указанного штамма Streptococcus thermophilus.

11. Ферментированный молочный продукт по п.9 или 10, дополнительно содержащий от 10 ³ до 10¹⁰ КОЕ/г бифидобактерий и/или от 10 ³ до 10¹⁰ КОЕ/г штамма Lactococcus lactis подвид lactis DN224.

12. Штамм Streptococcus thermophilus ST6008, депонированный в коллекции DSMZ с регистрационным номером DSM 18111 для получения закваски для приготовления ферментированного молочного продукта.

13. Штамм по п.12 в выделенной форме.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к улучшению роста бифидобактерий в ферментированных молочных продуктах за счет выбора бактериальных штаммов.

Молочные продукты и, в частности продукты, подобные йогурту, несомненно, образуют наибольший сегмент рынка пробиотических продуктов. Молочные продукты представляют собой превосходные продукты для доставки пробиотических бактерий, таких как бифидобактерии, и введения их в желудочно-кишечный тракт.

Bifidobacterium BB-12^® является хорошо известной пробиотической бактерией. В случае BB-12 ^® доступные клинические данные указывают, что требуется, по меньшей мере, 10⁸ КОЕ живых пробиотических бактерий на грамм ферментированного молочного продукта (например, ферментированного молочного йогуртного продукта).

В EP111392B1 описывается выбор штамма дикого типа Streptococcus thermophilus с относительно высоким уровнем потребления кислорода, что позволяет, таким образом, улучшить выживаемость собственно анаэробных видов бифидобактерий при комбинировании их со штаммом Streptococcus в процессе ферментации молока.

Проблема, решаемая настоящим изобретением, относится к способу улучшения роста популяции бифидобактерий в молоке в процессе ферментации для получения ферментированных молочных продуктов (например, йогурта) с получением большого количества клеток бифидобактерий в готовом продукте.

Решение основывается на неожиданном открытии авторами настоящего изобретения того, что конкретный штамм Streptococcus thermophilus ST6008 (DSM 18111) значительно улучшает рост бифидобактерий в процессе ферментации молока. Использование этого штамма позволяет получить ферментированный молочный продукт, содержащий более чем 10⁸ КОЕ/г бифидобактерий (непосредственно после ферментации). Следовательно, отсутствует необходимость в добавлении дополнительных бифодобактерий по окончании ферментации для получения продукта с 10⁸ КОЕ/г бифидобактерий.

Авторы настоящего изобретения протестировали ряд различных S. thermophilus (всего 16) и обнаружили, что только штамм Streptococcus thermophilus (ST6008), депонированный как DSM18111, значительно улучшает рост бифидобактерий в процессе ферментации молока. При этом некоторые другие штаммы Streptococcus thermophilic оказывают негативное воздействие на рост бифидобактерий.

Дополнительно, авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что ST6008 имеет уникальную характеристику, заключающуюся в том, что он может быть введен в молоко в очень большом количестве КОЕ/г (и размножается с большим количеством клеток) без изменения характеристик ферментированного молока, таких как pH, и не вызывает нарастания кислотности. Другие тестированные штаммы ST не обладают таким дополнительным преимуществом.

Следовательно, в первом аспекте настоящее изобретение относится к способу получения ферментированного молочного продукта, который включает, по меньшей мере, 10⁸ КОЕ бифидобактерий на грамм ферментированного молочного продукта, включающий:

i) инокулирование молока культурой (такой как йогуртная культура), включающей, по меньшей мере, один штамм Streptococcus thermophilus, по меньшей мере, один штамм бифидобактерий и возможно, по меньшей мере, один штамм Lactobacillus bulgaricus, где один указанный штамм Streptococcus thermophilus выбирают из группы, состоящей из: штамма Streptococcus thermophilus ST6008 с депозитарным номером DSM18111, мутанта ST6008 и варианта ST6008;

ii) ферментацию молока в подходящих условиях; и

iii) возможно, расфасовку подходящего количества ферментированного молочного продукта в подходящую упаковку. В предпочтительном варианте воплощения настоящее изобретение относится к способу получения ферментированного молочного продукта, включающего, по меньшей мере, 10⁸ КОЕ бифидобактерий на грамм ферментированного молочного продукта, включающий:

i) инокулирование молока йогуртной культурой, включающей, по меньшей мере, один штамм Lactobacillus bulgaricus, по меньшей мере, один штамм Streptococcus thermophilus и, по меньшей мере, один штамм бифидобактерий, где один указанный штамм Streptococcus thermophilus представляет собой штамм Streptococcus thermophilus ST6008 с депозитарным номером DSM 18111;

ii) ферментацию молока в подходящих условиях с получением ферментированного молочного продукта, содержащего, по меньшей мере, 10⁸ КОЕ бифидобактерий на грамм ферментированного молока; и

iii) расфасовку подходящего количества ферментированного молочного продукта в подходящую упаковку.

Во втором аспекте настоящее изобретение относится к штамму ST6008 и его мутантам/вариантам, и к культуре (такой как заквасочная культура), включающей штамм по настоящему изобретению, возможно, вместе с другим штаммом, таким как штамм Bifidobacterium (например, BB-12). Предпочтительная композиция включает i) BB-12 от 10⁵ до 10¹² КОЕ/г и ii) ST6008 от 10 ¹⁰ до 10¹² КОЕ/г.

Настоящее изобретение относится к способу получения ферментированного молочного продукта, включающему:

i) инокулирование молока штаммом Bifidobacterium и штаммом Streptococcus thermophilus, выбранным из группы, состоящей из: штамма Streptococcus thermophilus ST6008 с депозитарным номером DSM 18111, мутанта ST6008 и варианта ST6008 (такого как мутант/вариант штамма, который имеет одну или более (предпочтительно все) характеристик штамма S. thermophilus ST6008, например, мутант и/или вариант штамма, способный промотировать рост штамма Bifidobacterium);

ii) ферментацию молока в подходящих условиях; и

iii) возможно, добавление дополнительных микроорганизмов и/или добавок в ферментированное молоко; и

iv) возможно, расфасовку ферментированного молочного продукта. В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения стадия i) дополнительно включает инокуляцию молока штаммом Lactobacillus bulgaricus.

В другом варианте воплощения настоящее изобретение относится к способу получения ферментированного молочного продукта, который включает, по меньшей мере, 10⁸ КОЕ бифидобактерий на грамм ферментированного молочного продукта, включающий:

i) инокулирование молока культурой (такой как йогуртная культура), включающей, по меньшей мере, один штамм Streptococcus thermophilus, по меньшей мере, один штамм Bifidobacterium и возможно, по меньшей мере, один штамм Lactobacillus bulgaricus, где один указанный штамм Streptococcus thermophilus выбирают из группы, состоящей из: штамма Streptococcus thermophilus ST6008 с депозитарным номером DSM 18111, мутанта ST6008 и варианта ST6008;

ii) ферментацию молока в подходящих условиях; и

iii) возможно, расфасовку подходящего количества ферментированного молочного продукта в подходящую упаковку.

В другом варианте воплощения настоящее изобретение относится к способу получения ферментированного молочного продукта, включающего, по меньшей мере, 10⁸ КОЕ бифидобактерий на грамм ферментированного молочного продукта, включающий:

i) инокулирование молока йогуртной культурой, включающей, по меньшей мере, один штамм Lactobacillus bulgaricus, по меньшей мере, один штамм Streptococcus thermophilus и, по меньшей мере, один штамм Bifidobacterium, где один указанный штамм Streptococcus thermophilus представляет собой штамм Streptococcus thermophilus ST6008 с депозитарным номером DSM 18111;

ii) ферментацию молока в подходящих условиях с получением ферментированного молочного продукта, содержащего, по меньшей мере, 10⁸ КОЕ бифидобактерий на грамм ферментированного молока; и

iii) расфасовку подходящего количества ферментированного молочного продукта в подходящую упаковку.

Штамм Bifidobacterium предпочтительно принадлежит к видам, выбранным из группы, состоящей из Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium asteroids, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium catenulatum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium longum и Bifidobacterium pseudocatenulatum, и предпочтительным штаммом Bifidobacterium является штамм подвида lactis Bifidobacterium animalis. Примерами штаммов являются штаммы, выбранные из группы, состоящей из CHCC5445 (BB-12) с депозитарным номером DSM 15954, CHCC 7158 (HN019 депонированный под номером DSM 17280), штамма Bifidobacterium с депозитарным номером ATCC 27536, штамма Bifidobacterium infantis Bbi99 (DSM 13692), BB-420, BI-04, CHCC2037, LAFTI B-94, DN 173 010, STB- 2938, R0071, R0175, и BB-46, и мутанта любого из этих штаммов.

В предложенном варианте воплощения настоящего изобретения полученный ферментированный молочный продукт содержит, по меньшей мере, 10⁸ КОЕ бифидобактерий на грамм ферментированного молочного продукта по окончании ферментации и/или ферментированный молочный продукт содержит, по меньшей мере, 10⁸ КОЕ/г бифидобактерий после 28 дней хранения при температуре +6ºC.

Согласно предпочтительному варианту воплощения способа по настоящему изобретению молоко на стадии i) инокулируют от 10⁵ до 3×10⁷ КОЕ/г Bifidobacterium и/или от 10⁴ до 3,5×10 ⁶ КОЕ/г Streptococcus thermophilus. Молоко может быть одновременно инокулировано этими видами бактерий.

Предпочтительно инокулировать молоко заквасочной культурой, включающей оба вида бактерий.

В другом варианте воплощения настоящего изобретения молоко дополнительно инокулируют, по меньшей мере, одним штаммом, таким как штамм Lactococcus lactis subs, lactis (например, выбранный из группы, состоящей из Lactococcus lactis subs, lactis DN224; Lactococcus lactis subs, lactis DN223; и мутантом или вариантом штамма любого из них). Предпочтительно, чтобы этот дополнительный организм-помощник представлял собой штамм Lactococcus lactis subs, lactis, выбранный из группы, состоящей из Lactococcus lactis subs, lactis DN224, Lactococcus lactis subs, lactis DN223.

Продукт, полученный способом по настоящему изобретению, может быть определен, как «йогурт», то есть, когда молоко инокулировано обоими штаммами: и штаммом Lactobacillus bulgaricus, и штаммом Streptococcus thermophilus.

Ферментированный молочный продукт (такой как йогурт) предпочтительно расфасован в укупоренную упаковку, содержащую от 25 до 3000 мл продукта, такую как от 50 до 1000 мл.

Также настоящее изобретение относится к культуре (такой как заквасочная культура), включающей BB-12 от 10⁵ до 10¹² КОЕ/г и ST6008 от 10⁵ до 10¹² КОЕ/г. Дополнительно культура может включать DN224 или DN223 от 10⁵ до 10¹² КОЕ/г.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к ферментированному молочному продукту, получаемому способом по настоящему изобретению, и ферментированному молочному продукту, включающему штамм Streptococcus thermophilus, выбранный из группы, состоящей из ST6008 (DSM18111); мутанта ST6008; и варианта ST6008. Предпочтительно ферментированный молочный продукт по настоящему изобретению включает от 10³ до 10¹⁰ КОЕ/г штамма Streptococcus thermophilus. Ферментированный молочный продукт по настоящему изобретению дополнительно может включать от 10³ до 10¹⁰ КОЕ/г бифидобактерий и/или от 10³ до 10¹⁰ КОЕ/г штамма Lactococcus lactis subs, lactis (такого как DN224 или DN223).

В последнем аспекте настоящее изобретение относится к штамму Streptococcus thermophilus, выбранному из группы, состоящей из ST6008 (DSM18111), мутанта ST6008 и варианта ST6008 (такого как мутант/вариант штамма, который имеет одну или более (предпочтительно все) характеристик штамма S. thermophilus ST6008, например, мутант/вариант штамма способен промотировать рост штамма Bifidobacterium (в частности, BB-12). Штамм может быть выделен, например, по существу свободен от других штаммов бактерий.

Бифидобактерии

В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения бифидобактерии представляеют собой, по меньшей мере, одну бифидобактерию, выбранную из группы, состоящей из Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium asteroids, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium catenulatum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium longum и Bifidobacterium pseudocatenulatum. Также может быть использована смесь, включающая два или более указанных выше штаммов.

В предпочтительном варианте способа по изобретению штамм Bifidobacterium представляет собой штамм Bifidobacterium animalis подвида lactis. В частности, штамм Bifidobacterium animalis подвида lactis ВВ-12 (CHCC5445), депонированный под номером DSM 15954.

Другой предпочтительный штамм Bifidobacterium animalis подвида lactis представляет собой штамм HN019 (также известный как DR-10^ТМ или HOWARU ^ТМ). Штамм выделен из коммерчески доступной смеси для детского питания под торговой маркой Fernleaf DR-10 bifidus, продававшейся в Тайване в 2000 году. Он имеет депозитарный номер CHCC7158 в коллекции культур Hansen и депонирован в DSMZ под номером DSM 17280.

Измерение КОЕ/г бифидобактерий

Измерение количества клеток бифидобактерий КОЕ/г проводят, подсчитывая количество колониеобразующих единиц (КОЕ) в сериях разведений ферментированного продукта, колонии подсчитывают на агаровых пластинах, согласно стандартным способам, известным из предшествующего уровня техники. Подходящая среда и условия инкубирования приведены ниже:

Среда: MRS (de Man et al. 1960. J. Appl. Bacteriol. 23: 130) без кислоты + 1% диклоксациллин (SIGMA D-9016) + 1% цистеин (MERCK n° 2839); и

Инкубирование: 3 дня при температуре 37ºC в анаэробных условиях.

Как указанно выше, применение ST6008 обеспечивает возможность получения более чем 10⁸ КОЕ/г бифидобактерий непосредственно за счет роста бифидобактерий в процессе ферментации. Следовательно, по меньшей мере, 10⁸ КОЕ/г бифидобактерий стадии ii) первого аспекта относятся к КОЕ/г бифидобактерий, полученных непосредственно после ферментации.

Как показано в демонстрационных примерах, Bifidobacterium BB-12 имеет хороший показатель выживаемости при совместном росте с ST6008.

Следовательно, в предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения ферментированный молочный продукт содержит, по меньшей мере, 10⁸ КОЕ/г бифидобактерий после 1 дня хранения при температуре +6ºC, более предпочтительно, по меньшей мере, 10⁸ КОЕ/г бифидобактерий после 7 дней хранения при температуре +6ºC, еще более предпочтительно, по меньшей мере, 10⁸ КОЕ/г бифидобактерий после 14 дней хранения при температуре +6ºC, даже еще более предпочтительно, по меньшей мере, 10⁸ КОЕ/г бифидобактерий после 21 дня хранения при температуре +6ºC, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 10⁸ КОЕ/г бифидобактерий после 28 дней хранения при температуре +6ºC.

Подходящие условия ферментации

Специалисту в области техники, к которой относится настоящее изобретение, известны подходящие условия для ферментации молока соответствующими бактериями.

Подходящие условия включают, например, такие, при которых молоко инокулируют бактериями и ферментируют при температуре от 38ºC до 43ºC, оптимально при температуре 40ºC, до достижения pH от 4,4 до 4,6 (после около 8 часов).

Охлаждение молока до температуры +6ºC останавливает ферментацию и рост соответствующих бактерий, таких как бифидобактерии.

В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения улучшенный рост достигается инокулированием от 10 ⁵ до 3×10⁷ КОЕ/г Bifidobacterium; и одновременным инокулированием ST6008 в концентрации от 10⁴ до 3,5×10 ⁶ КОЕ/г.

Если требуется, могут быть добавлены дополнительные бактерии (например, дополнительные Bifidobacterium) в некоторых случаях (например, по окончании ферментации).

Ферментированный молочный продукт

Как известно специалисту в области техники, к которой относится настоящее изобретение, при ферментации молока может быть получено множество различных ферментированных молочных продуктов.

В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения ферментированный молочный продукт представляет собой продукт, выбранный из группы, состоящей из йогурта, питьевого йогурта, йогурта с нарушенным сгустком, не перемешенного натурального йогурта и йогурта, аналогичного питьевому, простокваши, кефира, сметаны, свежего сыра и сыра. Ферментированное молоко включает, по меньшей мере, 10⁸ КОЕ/г бифидобактерий, как указанно выше, а также может быть использовано в качестве пищевой добавки, например, в другие пищевые продукты, такие как творожный сыр, шоколад, соки, мясные продукты и сухие молочные смеси для детского питания.

Lactobacillus bulgaricus

В контексте настоящего изобретения Lactobacillus bulgaricus может быть любым подходящим (например, коммерчески доступным) штаммом Lactobacillus bulgaricus.

Как известно специалисту в области техники, к которой относится настоящее изобретение, он может быть инокулирован в адекватных количествах с получением адекватного количества Lactobacillus bulgaricus в готовом ферментированном молочном продукте.

Добавление других видов бактерий, таких как штаммы-помощники.

В способе по настоящему изобретению могут быть добавлены интересующие бактерии. Такие бактерии могут быть добавлены во время ферментации или по ее окончании.

Примеры таких дополнительных бактерий включают бактерии, выбранные из группы, состоящей из Lactococcus и Lactobacillus.

Предпочтительным Lactobacillus является штамм Lactobacillus acidophilus, такой как LA-5 ^® (коммерчески доступный от Chr. Hansen A/S, Дания).

Как описано в WO98/54337 (Chr. Hansen, запатентовано как EP0985043 Bl), организм-помощник, представляющий молочнокислую бактерию, дефектную по пируватному метаболизму, может быть добавлен во время ферментации, что позволяет получить множество преимуществ, включая увеличение срока хранения бактерии. Штаммы DN224 (депонированный как DSM 11037) и DN223 (депонированный как DSM 11036), дефектные по пируватному метаболизму, как описано, являются примерами подходящих бактериальных организмов-помощников.

Следовательно, в предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения молочнокислый бактериальный организм-помощник, дефектный по пируватному метаболизму, также добавлен в молоко для ферментации, как описано здесь.

В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения молочнокислый бактериальный организм-помощник представляет собой бактерию, выбранную из группы, состоящей из штамма Lactococcus lactis подвида lactis DN223, депонированного под номером DSM 11036 и штамма Lactococcus lactis подвида lactis DN224 (депонированный как DSM 11037). Наиболее предпочтительно молочнокислый организм-помощник представляет собой DN224.

Вариант воплощения настоящего изобретения относится к культуре, включающей:

i) BB-12 от 10⁵ до 10¹² КОЕ/г и

ii) ST6008 от 10 ⁵ до 10¹² КОЕ/г

iii) DN224 от 10⁵ до 10¹² КОЕ/г

Депонированные микроорганизмы

Штамм Streptococcus thermophilus ST6008

Образец штамма (ST) Streptococcus thermophilus (ST) штамм ST6008, депонированного в DSMZ (Немецкая коллекция микроорганизмов и культур клеток, Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen, GmbH, Mascheroder Weg Ib, D- 38124 Braunschweig, Германия) под номером DSM 18111 29 марта 2006. Депонирование осуществлено согласно условиям Будапештского Договора о признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры.

Заявитель указывает, чтобы образец депонированных организмов мог быть доступен только для выдачи образца эксперту, уполномоченному заявителем и/или патентным ведомством.

Определения

В контексте настоящего изобретения йогуртная заквасочная культура представляет собой бактериальную культуру, включающую, по меньшей мере, один штамм Lactobacillus bulgaricus и, по меньшей мере, один штамм Streptococcus thermophilus. В соответствии с терминологией описания настоящего изобретения йогурт представляет собой ферментированный молочный продукт, получаемый инокулированием и ферментацией молока штаммом Lactobacillus bulgaricus и штаммом Streptococcus thermophilus.

В контексте настоящего изобретения термин «расфасовка» (подходящее количество) ферментированного молока в подходящую упаковку относится к готовому расфасованному ферментированному молоку с получением продукта, который может быть потреблен, например, потребителем. В этом случае ферментированный молочный продукт представляет собой питьевой йогурт, расфасованный, например, в маленький контейнер, например, 100 мл.

В контексте настоящего изобретения термин «мутант» относится к штамму, полученному из штамма по настоящему изобретению, например, генной инженерией, облучением и/или обработкой химическими реагентами. Предпочтительно мутант представляет собой функциональный эквивалент штамма, например, мутант по существу обладает теми же свойствами промотировать рост Bifidobacterium, что и материнский штамм. Такой мутант является частью настоящего изобретения. В частности, термин «мутант» относится к штамму, полученному обработкой штамма ST6008 по настоящему изобретению любой традиционной обработкой, вызывающей мутацию, включающей обработку химическим мутагеном, таким как этан-метан-сульфонат (EMS) или N-метил-N'-нитро-N-нитрогуанидин (NTG), УФ-светом или спонтанно происходящая мутация.

В контексте настоящего изобретения термин «вариант» относится к штамму, который представляет собой функциональный эквивалент материнского штамма. Например, под вариантом ST6008 можно понимать штамм Streptococcus thermophilus, являющийся функциональным эквивалентом ST6008, например, обладающий теми же свойствами или по существу теми же свойствами промотировать рост Bifidobacterium, как и материнский штамм. Такой вариант является частью настоящего изобретения.

В настоящем документе и формуле изобретения глагол «включать» и его формы следует интерпретировать в открытом, а не закрытом значении, если ясно не указано иное. Использованные здесь и в приложенной формуле изобретения формы единственного числа включают и множественное число, если в контексте ясно не просматривается иное. Кроме того, единственное число подразумевает, по меньшей мере, один. Указанные здесь пределы показателей включают каждый из них отдельно, если ясно не указано иное, и каждый из них входит в объем притязаний по настоящему изобретению. Все способы, описанные здесь, могут быть осуществлены любым подходящим образом, если ясно не указано иное или это не противоречит контексту. Все приведенные здесь примеры, в том числе введенные словами, например, «такой как», используются здесь только для иллюстрации и не ограничивают объем притязаний настоящего изобретения. Любые элементы, приведенные в описании настоящего изобретения или заявленные в приложенной формуле изобретения, не ограничивают объем притязаний настоящего изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1: Улучшение роста при использовании Streptococcus thermophilus ST6008

Материалы и методы

Количество бактерий на 100л молока:

В 100 (10⁵ мл) литров молока добавляют 10 г BB-12^® 10¹¹ КОЕ/г. Это дает, в результате, в молоке 10⁷ КОЕ/г BB-12^® . Для ST6008 используется та же процедура, 2 г ST6008 содержат от 10⁹ до 10¹⁰ КОЕ/г в тех же 100 литрах молока, достигая, таким образом, конечной концентрации от 2×10 ⁴ до 2×10⁵ КОЕ/г ST6008. Для DN224, 10 ¹¹ КОЕ/г добавляют 3 грамма (или мл) в 100 литров (10 ⁵ мл), таким образом, 3×10⁶ КОЕ/г.

Ферментируют при температуре 40ºC до достижения pH 4,55 в течение около 8 часов. Затем продукт перемешивают и расфасовывают в стаканчики, хранят при температуре +6ºC для исследования лежкоспособности (вплоть до 45 дней). Эксперименты проводят с образцами йогурта объемом 200 мл и 3 литра.

Таблица 1 Йогуртные культуры, используемые в экспериментах
Название эксперимента	Уровень инокуляции йогуртной культуры	Название йогуртной культуры	ST6008, 2 г/100 л молока	DN224, 3 г/100 л молока	Bifidobacterium BB-12®, 10 г/100 л молока конечная
CH YT1	20 г/100 л молока	F-DVS YFL-702			х
CH YT1+DN224	20 г/100 л молока	F-DVS YFL-702		х	х
Special YT, включая DN224 и ST6008	20 г/100 л молока	Special YT			х
CH YT1+ST6008	20 г/100 л молока	F-DVS YFL-702	х		х
CH YT2	20 г/100 л молока	F-DVS Y-051054			х
CH YT2+DN224	20 г/100 л молока	F-DVS Y-051054		х	х
CH YT2+ST6008	20 г/100 л молока	F-DVS Y-051054	х		х

F-DVS YFL-702 представляет собой коммерческую йогуртную культуру, доступную от Chr. Hansen A/S, Дания, содержащую Lactobacillus bulgaricus и Streptococcus thermophilus.

Special YT: экспериментальная йогуртная культура, содержащая Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus thermophilus ST6008, Lactococcus lactis DN224.

F-DVS Y-051054 представляет собой коммерческую йогуртную культуру, доступную от Chr. Hansen A/S, Дания, содержащую Lactobacillus bulgaricus и Streptococcus thermophilus.

Подсчет количества клеток BB-12 проводят, разводя образцы йогурта в триптоновом разбавителе, с последующим посевом соответствующих титров на некислый MRS агар с добавлением 1% диклоксациллина (Sigma D-9016) и 1% цистеина HCI. Агаровые пластинки инкубируют в течение 3 дней при температуре 37ºС в анаэробных условиях.

Результаты

Результаты приведены в Таблице 2

Результаты показывают, что ST6008 значительно улучшает рост BB-12. D+l, D+7,...., D+45 показывает количество бифидобактерий (КОЕ/г) после 1, 7...., 45 дней хранения при температуре +6 градусов Цельсия. Результаты показали улучшенный рост и стабильность BB-12 в ферментированном молочном продукте, полученном при использовании заквасочной культуры, включающей ST6008 по настоящему изобретению, по сравнению с коммерчески доступными заквасочными культурами без ST6008. Как видно из Таблицы 2, при использовании ST6008 может быть получено более 10⁸ КОЕ/г Bifidobacterium (здесь BB-12).

Улучшение роста BB-12 добавлением ST6008

Из Таблицы 2 ясно видно, что ST6008 оказывает улучшающее воздействие на рост при получении йогурта CHYTl.

Объем 3 л:

Как указано для CHYTl, сразу после дня D+l, уровни BB-12 значительно возросли при использовании ST6008 (1,37×10⁸ КОЕ/г с ST6008) по сравнению с 7,8×10⁷ КОЕ/г без ST6008. Кроме того, этот уровень10⁸ КОЕ/г продержался затем вплоть до 28 дней хранения.

Аналогичное воздействие отмечено для CHYT2

Заключение:

ST6008 улучшает рост Bifidobacterium BB-12^® во время ферментации, по меньшей мере, до 10⁸ КОЕ/г в ферментированных молочных продуктах.

Указанные здесь предпочтительные варианты воплощения настоящего изобретения включают наилучшие способы их воплощения, известные авторам настоящего изобретения. Варианты этих предпочтительных выполнений по настоящему изобретению будут ясны для специалиста в области, к которой относится настоящее изобретение, при чтении указанного выше описания. Специалист в области техники, к которой относится настоящее изобретение, может использовать такие варианты как подходящие, то есть настоящее изобретение может быть осуществлено иными способами, чем указано выше. Следовательно, в объем настоящего изобретения входят все модификации и эквиваленты приведенных вариантов воплощения настоящего изобретения в рамках, позволенных законом. Дополнительно, любые комбинации указанных выше элементов во всех возможных вариантах входят в объем притязаний настоящего изобретения, если ясно не указано иное или это не противоречит контексту.

ССЫЛКИ:

1. EP111392B1

2. WO98/54337 (Chr. Hansen) 3. Saxelin M. et al.: The technology of probiotics. Trends in food science and technology, vol. 10, 1991, pages 387-392

4. Martin-Diana A. B. et al.: Development of a fermented goat's milk containing probiotic bacteria. Int. Dairy J., vol. 13, 2003, pages 827-833 5. US 4588595 A (Okonogi Shigeo (JP) et al)

6. US 2005/031735 Al (Serata Masaki (JP) et al)

7. US 4187321 A (Mada Mitsuo (JP) et al)

8. US 5230912 A (Yajima Masako (JP) et al)

Все ссылки, приведенные в настоящем патентном документе, приведены здесь в полном объеме.