способ диагностики бруцеллеза

Формула изобретения

Способ диагностики бруцеллеза, включающий внесение в лунку диагностической пластины свежего или консервированного формалином молока, добавление антигена в дозе 0,015 мл, перемешивание компонентов, покачивание пластины в течение 4 мин, учет результатов реакции, отличающийся тем, что в качестве антигена используют антиген для кольцевой реакции с молоком, молоко вносят в количестве 0,03-0,04 мл, положительный результат оценивают по образованию агглютината, собирающегося в виде колец различной ширины и интенсивности окрашивания по краю лунки.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано в серологической диагностике бруцеллеза животных.

Известен способ выявления бруцеллезных антител в молоке крупного рогатого скота с помощью кольцевой реакции (КР) с антигеном, окрашенным гематоксилином или тетразолием [Наставление по диагностике бруцеллеза животных. Утверждено Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ, М., 2003, 64 с.].

Недостатком способа является необходимость проведения дополнительных исследований животных на мастит в целях исключения неспецифических показаний КР, за счет чего снижается охват диагностическими исследованиями поголовья животных, кроме того, обследованию в КР с молоком подлежат животные, непривитые противобруцеллезными вакцинами.

Наиболее близким по техническому решению является способ диагностики бруцеллеза, включающий внесение в лунки диагностической пластины свежего или консервированного формалином молока, добавление к 0,05-0,06 молока 0,015 мл 8-9%-ного раствора калия фосфорнокислого двухзамещенного трехводного на физиологическом растворе pH 8,0-9,7 и добавление 0,015 мл. антигена для Роз-бенгал пробы [SU 1697827 A1, 17.11.88]

Однако из-за разбавления молока раствором соли способ обладает недостаточной активностью, т.е. недовыявляет больных бруцеллезом животных, а у здоровых в отношении бруцеллезной инфекции коров с заболеванием молочной железы маститом проявляются неспецифические реакции.

Техническим результатом изобретения является повышение диагностической чувствительности, специфичности, а также возможность осуществления диагностики бруцеллеза у животных, привитых противобруцеллезными вакцинами при упрощении способа диагностики.

Технический результат достигается тем, что способ диагностики бруцеллеза включает внесение в лунки диагностической пластины свежего или консервированного формалином молока, добавление антигена в дозе 0,015 мл, перемешивание компонентов, покачивание пластины в течение 4 минут, учет результатов реакции, в качестве антигена используют антиген для кольцевой реакции с молоком, молоко вносят в количестве 0,03-0,04 мл, положительный результат оценивают по образованию агглютината, собирающегося в виде колец различной интенсивности окрашивания по краю лунки.

Способ осуществляется следующим образом. Проводят постановку реакции агглютинации (РА) пластинчатой, для чего в чистую эмалированную диагностическую пластину на дно лунки вносят 0,03-0,04 мл свежего или консервированного формалином молока и добавляют рядом с молоком антиген для кольцевой реакции в дозе 0,015 мл. Антиген в каждой лунке тщательно смешивают с молоком смесителем до получения однородной жидкости, после чего его промывают в горячей воде и промокают фильтровальной бумагой. Пластину с пробами молока и антигеном покачивают в течение 4 минут и учитывают результат. При положительном результате образуется агглютинат, собирающийся по краю лунки в виде кольца различной ширины и интенсивности окрашивания с просветлением жидкости в лунке, при отрицательном результате жидкость в лунке окрашена равномерно, по краю лунки кольцо отсутствует.

Результаты сравнительного испытания чувствительности и специфичности РА пластинчатой с разными объемами компонентов представлены в таблице 1.

Данные таблицы 1 показывают, что оптимальными дозами компонентов при постановке РА пластинчатой являются: молоко - 0,03-0,04 мл, антиген для кольцевой реакции - 0,015 мл, т.к. в этих соотношениях выявлено наибольшее количество реагирующих животных с четкими и ярко выраженными реакциями (оценка ++ и +++ креста).

Результаты сравнительного изучения чувствительности разных диагностических тестов представлены в таблице 2.

Анализ данных таблицы 2 показывает, что предлагаемый способ диагностики бруцеллезных антител в молоке - РА пластинчатая с антигеном для КР обладает более высокой диагностической чувствительностью и специфичностью в сравнении с аналогом - РБП с K₂HPO₄ при обследовании непривитых противобруцеллезными вакцинами животных, а также иммунизированных противобруцеллезными вакцинами в хозяйствах с различной эпизоотической обстановкой по бруцеллезу.

Более высокая диагностическая чувствительность и специфичность достигнуты за счет применения в пластинчатой РА антигена для КР с молоком. Результаты исследований проб молока от непривитых противобруцеллезными вакцинами коров, больных клиническими и субклиническими формами маститов из благополучных по бруцеллезу хозяйств, представлены в таблице 3.

Таблица 3.
Результаты исследований молока коров, больных маститами, из благополучных по бруцеллезу хозяйств
№ хозяйств	Количество обследованных коров	Реагировали в тестах с молоком:			Положительная проба с мастидином
		КР с цельным молоком	РА пластинчатая с антигеном для КР (испыт.)	РБП с K2HPO 4 (аналог)
1	56	29	-	14	56
2	38	16	-	10	38
3	19	4	-	4	19
итого	113	49	-	28	113
		43,4%	-	24,8%	100%

Данные таблицы 3 показывают, что предлагаемый способ диагностики - РА пластинчатая с антигеном для кольцевой реакции с молоком является специфичным, поскольку позволяет проводить обследование на бруцеллез лактирующих коров с заболеванием молочной железы маститами в отличие от КР с молоком и РБП с K₂ HPO₄.

Заявленный способ диагностики бруцеллеза относится к экспресс-тестам диагностики бруцеллеза, для его проведения не требуется лабораторное оборудование, реакцию можно осуществлять в полевых условиях, на животноводческих фермах.

Способ обладает специфичностью и более высокой чувствительностью, внедрение его обеспечит повышение эффективности диагностики бруцеллеза при обследовании непривитых животных и иммунизированных противобруцеллезными вакцинами за счет оперативного и более полного выявления больных коров, удешевит и ускорит осуществление теста за счет исключения дополнительных исследований молока на наличие маститов. Способ диагностики бруцеллеза апробирован в хозяйствах Омской области с высоким противоэпизоотическим эффектом.