способ определения содержания аскорбиновой кислоты

Формула изобретения

Способ определения содержания аскорбиновой кислоты в растворах, растительном и животном материале, заключающийся в том, что аскорбиновую кислоту экстрагируют из анализируемых образцов раствором HCl или какой-либо другой кислоты, отличающийся тем, что к 1 мл полученного экстракта добавляют 1 мл 1 мМ раствора хлорного железа и 1 мл 3 мМ раствора феррицианида калия, перемешивают, переносят в кювету спектрофотометра, измеряют оптическую плотность при 693 нм и по калибровочному графику рассчитывают содержание аскорбиновой кислоты в анализируемом образце.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области аналитической химии и биохимической клинической лабораторной диагностики и может быть использовано для определения содержания аскорбиновой кислоты в растворах, растительном и животном материале.

Существует йодометрический метод определения содержания аскорбиновой кислоты в различном материале, основанный использовании йода и крахмального индикатора. Йод реагирует с аскорбиновой кислотой и когда вся аскорбиновая кислота прореагирует, йод, находящийся в избытке, формирует иссиня-черный комплекс с крахмальным индикатором. Это указывает момент окончания титрования (1). Недостатком способа является низкая чувствительность.

Наиболее близким к предлагаемому способу является метод количественного определения содержания аскорбиновой кислоты путем титрования 0,001N раствором дихлорфенолиндофенола (2). Метод заключается в том, что аскорбиновую кислоту экстрагируют из анализируемых образцов раствором HCl или какой-либо другой кислоты. Аликвоту полученного экстракта титруют 0,001N раствором дихлорфенолиндофенола. В присутствии аскорбиновой кислоты добавляемый раствор дихлорфенолиндофенола обесцвечивается. Окончанию титрования соответствует появление слабо-розовой окраски, сохраняющейся на протяжении 30 сек.

Недостатками способа являются субъективность в определении окончания титрования и низкая чувствительность - минимальное количество определяемой аскорбиновой кислоты составляет несколько сотен нмолей.

Целью изобретения является создание способа определения содержания аскорбиновой кислоты, лишенного перечисленных недостатков.

Поставленная цель достигается определением аскорбиновой кислоты на основе ее способности восстанавливать ионы Fe³⁺ в ионы Fe²⁺. Количество образовавшихся ионов Fe²⁺ эквимолярно количеству аскорбиновой кислоты в анализируемом образце и определяется по цветной реакции с феррицианидом калия (3).

Предлагаемый способ прост в осуществлении, объективен и достаточно чувствителен (минимальное количество аскорбиновой кислоты в образце - 10 нмоль).

Определение аскорбиновой кислоты в растворах, растительном и животном материале по предлагаемому способу проводят следующим образом. Аскорбиновую кислоту экстрагируют из анализируемых образцов раствором HCl или какой-либо другой кислоты. К 1 мл полученного экстракта добавляют 1 мл 3 мМ раствора феррицианида калия и 1 мл 1 мМ раствора хлорного железа. Перемешивают, переносят в кювету спектрофотометра и измеряют оптическую плотность при 693 нм. По калибровочному графику рассчитывают содержание аскорбиновой кислоты в анализируемом образце.

Пример

В две центрифужные пробирки вносят по 1 мл крови. В каждую их пробирок приливают по 3 мл 30% трихлоруксусной кислоты. Тщательно перемешивают.

Центрифугируют и собирают надосадочные жидкости. При определении содержания аскорбиновой кислоты согласно прототипу весь экстракт переносят в стеклянный стаканчик объемом 50 мл и титруют 0,001N раствором дихлорфенолиндофенола. Окончанию титрования соответствует появление слабо-розовой окраски, сохраняющейся на протяжении 30 сек. Содержание аскорбиновой кислоты в образце крови рассчитывают по объему пошедшего на титрование 0,001N раствора дихлорфенолиндофенола. При определении содержания аскорбиновой кислоты по предлагаемому способу к 1 мл полученного экстракта добавляют 1 мл 3 мМ раствора феррицианида калия и 1 мл 1 мМ раствора хлорного железа. Перемешивают, переносят в кювету спектрофотометра и измеряют оптическую плотность при 693 нм. По калибровочному графику рассчитывают содержание аскорбиновой кислоты в анализируемом образце. В таблице представлены результаты определения содержания аскорбиновой кислоты в образце крови согласно прототипу и предлагаемому способу.

Способ определения аскорбиновой кислоты	Прототип	Предлагаемый
Содержание аскорбиновой кислоты в крови	Не определяется	25 мкмоль/л

Результаты свидетельствуют, что предлагаемый способ позволяет количественно определить содержание аскорбиновой кислоты в крови в отличие от прототипа вследствие низкой чувствительности последнего.

Литература

1. Гуськова В.П., Сизова Л.С.Определение содержания витамина С йодометрическим методом // Химические методы исследования свойств сырья и продукции. Кемерово: Кемеровский технологический институт пищевой промышленности. 2007. С.29.

2. Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения витамина С. ГОСТ 24556-89. http://www.gosthelp.ru/gost/gost11266.html.

3. Попков В.А., Пузаков С.А. Общая химия. Учебник для вузов. М.: ГЭОТАР-Медиа. 2007. С.525.