смешанные эфиры масляной и муравьиной кислот и кислых полисахаридов и их получение и применение в качестве косметики для кожи

Формула изобретения

1. Кислые полисахариды, выбранные из гиалуроновой кислоты, хондроитинсульфата, дерматансульфата, гепарансульфата и кератансульфата, характеризующиеся одновременным присутствием спиртовых групп, этерифицированных масляной и муравьиной кислотами.

2. Кислые полисахариды по п.1, где карбоксильная группа присутствует в кислой форме или в виде соли со щелочными металлами, в частности натрием.

3. Кислые полисахариды по п.1, где молекулярную массу выбирают из интервала от 10³ до 10⁷ Да.

4. Кислые полисахариды по п.1, где полисахаридом является гиалуроновая кислота с молекулярной массой от 10⁴ до 10⁶ Да.

5. Кислые полисахариды по п.1, отличающиеся тем, что степень этерификации масляной кислоты на спиртовой группе полимера составляет от 0,01 до 1·N, где N равно количеству свободных спиртовых групп, присутствующих в повторяющейся единице, а степень этерификации муравьиной кислоты на спиртовых группах полимера составляет от 0,01 до 0,20.

6. Кислые полисахариды по п.1, отличающиеся тем, что степень этерификации масляной кислоты на спиртовой группе полимера составляет от 0,01 до 0,2·N, где N равно количеству свободных спиртовых групп, присутствующих в повторяющейся единице, а степень этерификации муравьиной кислоты на спиртовых группах полимера составляет от 0,01 до 0,20.

7. Кислые полисахариды по п.1, где кислым полисахаридом является гиалуроновая кислота, отличающаяся тем, что степень этерификации масляной кислоты на спиртовой группе полимера составляет от 0,01 до 0,8, а степень этерификации муравьиной кислоты на спиртовых группах полимера составляет от 0,01 до 0,20.

8. Способ получения кислых полисахаридов по пп.1-7, который включает:

a) растворение кислого полисахарида, образовавшего соль с натрием или другими щелочными металлами, в формамиде при нагревании;

b) добавление масляного ангидрида к полученному раствору при комнатной температуре в присутствии органического основания;

c) разбавление гомогенной вязкой реакционной смеси водным раствором NaCl и нейтрализацию его до pH 6-7,5;

d) очистку разбавленной реакционной смеси диализом или тангенциальной фильтрацией;

e) замораживание очищенного раствора полисахарида и восстановление продукта лиофилизацией и сушкой распылением.

9. Способ по п.8, где основанием является ароматическое или алифатическое органическое основание, содержащее один атом тризамещенного азота, предпочтительно диметиламинопиридина или триэтиламина.

10. Способ по п.8, где температура растворения полисахарида в формамиде составляет от 60°C до 120°C, предпочтительно 95°C.

11. Топические композиции, содержащие производные кислого полисахарида по пп.1-7 и дерматологически приемлемые инертные носители.

12. Топические композиции по п.11, отличающиеся тем, что они включают от 0,05 мас.% до 5 мас.% кислого полисахарида по отношению к массе композиции.

13. Топические композиции по п.11, выбранные из кремов, мазей, гелей, гидрофильных жидкостей, водных или водно-спиртовых лосьонов, эмульсий масло-в-воде или вода-в-масле.

14. Применение топических композиций по пп.11-13 для обработки в качестве увлажняющего, подтягивающего, тонизирующего агента, агента против старения и против акне.

15. Применение топической композиции по пп.11-13 в качестве вспомогательного лечения повреждений кожи.

16. Применение по п.15, где повреждения кожи включают воспаления, хронические язвы, раны, атопический или контактный дерматит, признаки старения или перегрев кожи, вызванный облучением.

Описание изобретения к патенту

В настоящем изобретении раскрыты смешанные эфиры масляной и муравьиной кислот и кислых полисахаридов и их получение способом, в котором формиат получают из формамида в присутствии масляного ангидрида и оснований, очищают и восстанавливают диализом и лиофилизацией, и их применение в качестве повышающих эластичность и увлажняющих веществ для применения в косметике и для защиты кожи.

Уровень техники

В свете их физико-химических и биологических характеристик, глюкозаминогликаны (ГАГ) являются продуктами, вызывающими большой интерес в области их применения благодаря критической роли, которую они играют в определенных частях тела человека, где они обычно присутствуют в форме протеогликанов. Указанные молекулы являются сложными системами, где полисахаридные цепи могут быть связаны ковалентно или не ковалентно с белками. Они осуществляют множество биологических функций, начиная с регулирования количества воды в тканях, в качестве модуляторов диффузии ионов во внеклеточном матриксе, заканчивая регулированием подвижности клеток и другими функциями, от участия в репродуктивной системе до действия в качестве простой несущей конструкции.

ГАГом, который является наиболее изученным и подвергался химическим модификациям, является гиалуроновая кислота (ГК).

В общем, модификации ГК относятся к применению новых производных, в основном в биомедицинской отрасли, включающей биоматериалы, контролируемое выделение лекарственных средств, продукты для усиления вязкости, послеоперационные антиадгезивные устройства и т.д. В косметике ГК в основном применяют в качестве увлажняющего средства в не модифицированной природной форме, характеризуемой определенной молекулярной массой.

Согласно литературе, основные попытки с недавних пор сфокусированы на способах поперечного сшивания ГК с получением новых биосовместимых молекул с определенными биологическими характеристиками (вязкоэластичность); например, в EP 341745 описаны продукты, полученные автопоперечным сшиванием ГК для применения при внутрисуставной обработке, для повышения вязкости, а также для послеоперационных антиадгезивных устройств.

В других патентах, таких как US 4582865 и US 4713488, заявлены указанные свойства при применении экзогенных молекул в качестве поперечно-сшивающих агентов.

Производные сложных эфиров с карбоксилом описаны в ЕР 216453 для применения модифицированной ГК в области биоматериалов и контролируемого выделения лекарственных средств.

Существует еще несколько патентов, относящихся к спиртовым сложным эфирам ГК с органическими кислотами. Например, в US 5679657 заявлен ацетилат ГК со степенью замещения от 0,6 до 3,6, начиная с ГК с низкой вязкостью и низкой молекулярной массой, для применения в косметологии в качестве разглаживающего агента; в US 6017901 заявлено применение производных ГК с полусукцинатным сложным эфиром для введения дополнительных отрицательных зарядов в полисахаридную цепь.

В ЕР 941253 описан синтез производных ГК с масляным ангидридом в щелочной среде с получением продуктов, этерифицированных на уровне спиртовых функциональных групп.

Другие функционализации других ГАГ для применения в дерматологии/косметологии по данным авторов изобретения не известны. Одновременное присутствие бутиратных и формиатных остатков в результате оригинального процесса синтеза, применяемого и заявленного, не описано ни в одной из указанных ссылок.

Описание изобретения

Настоящее изобретение относится к производным кислого полисахарида, полностью или частично этерифицированным масляной и муравьиной кислотами на свободных спиртовых группах кислого полисахарида, принадлежащего к семейству глюкозаминогликанов (ГАГ), в частности, гиалуроновой кислоты, хондроитинсульфата, дерматансульфата, гепарансульфата и Кератансульфата. Изобретение также относится к способу их получения.

Продукты в соответствии с изобретением используют в местных (косметических или медицинских) препаратах, которые оказывают увлажняющее, разглаживающее, тонизирующее действие, действие против старения и против акне, и в качестве адъювантов при лечении повреждений кожи, таких как воспаления, язвы и повреждения вследствие перегревания, вызванного облучением, таким как УФ, рентгеновские и гамма-лучи.

Степень замещения (СЗ) спиртовых групп каждого "полисахаридного мономера может варьировать, в случае масляных эфиров, от 0,01 до 1*N, предпочтительно, от 0,01 до 0,2*N, где N является количеством свободных спиртовых групп, присутствующих в повторяющейся единице, а степень этерификации муравьиной кислоты на спиртовых группах полимера составляет от 0,01 до 0,2 (а именно, от 1% до 20%).

Степень этерификации, которая является регулируемой и воспроизводимой, может варьировать и зависит от характеристик исходного полисахарида и условий применяемой реакции, таких как стехиометрические соотношения между полисахаридным субстратом, типа используемого каталитического основания и масляного ангидрида.

Любые не этерифицированные карбоксильные функциональные группы могут присутствовать в кислой форме или в форме соли со щелочными металлами, особенно натрием.

Молекулярная масса кислых полисахаридов обычно составляет от 10³ до 10⁷ дальтон; если полисахаридом является гиалуроновая кислота, молекулярная масса предпочтительно составляет от 10⁴ до 10⁶ дальтон.

В случае гиалуроновой кислоты, степень этерификации масляной кислоты на спиртовых группах полимера предпочтительно составляет от 0,01 до 0,8, а степень этерификации муравьиной кислоты на полимере составляет от 0,01 до 0,20.

Изменение степени этерификации отдельных компонентов может изменить физико-химические и реологические характеристики производных в соответствии с изобретением, и они могут использоваться в местных композициях для лечения в качестве увлажняющих, разглаживающих, тонизирующих кожу агентов или агентов против старения и против акне, или в качестве адъювантов для лечения повреждений кожи, таких как воспаления, раны, дерматиты и перегревание кожи, вызванное облучением.

Изобретение также относится к способу получения указанных производных.

Указанный способ включает:

a) растворение кислого полисахарида, образовавшего соль с натрием или другими щелочными металлами, в формамиде при нагревании при температурах от 60°C до 120°C, предпочтительно, 95°C;

b) добавление масляного ангидрида к полученному раствору при комнатной температуре в присутствии органического основания;

c) разбавление гомогенной вязкой реакционной смеси водным раствором NaCl и нейтрализация его до pH 6-7,5;

d) очистку разбавленной реакционной смеси диализом или тангенциальной фильтрацией;

e) замораживание очищенного раствора полисахарида и восстановление продукта лиофилизацией и сушкой распылением.

Органическим основанием является ароматическое или алифатическое основание, включающее по крайней мере один атом тризамещенного азота, предпочтительно, диметиламинопиридина или триэтиламина.

Одним из преимуществ соединений в соответствии с изобретением по сравнению, например, с природной (не модифицированной) коммерческой гиалуроновой кислотой является то, что присутствие масляных и муравьиных эфирных заместителей модифицированного полимера защищает от ферментативного разложения гиалуронидазами, присутствующими в тканях. Такое новое свойство соединений в соответствии с изобретением иллюстрируется в представленном ниже эксперименте.

Коммерческая натриевая соль ГК и полученные образцы, описанные в примерах 2 и 4, применяют в эксперименте.

Маточный раствор полисахарида (10 мг/мл) оставляют при осторожном механическом перемешивании на один час при температуре 37°C до добавления фермента. Начиная с этого раствора, получают 10 мл разбавленного раствора (1 мг/мл), содержащего 0,1 мг/мл фермента (гиалуронидаза бычьих яичек 1060 Ед/мг). Второй разбавленный раствор получают с дозой фермента в десять раз ниже. Оба раствора инкубируют при 37°C. 0,6 мл образцы берут с регулярными интервалами и помещают в водяную баню при 100°C на 5 минут, фильтруют для удаления фермента и затем замораживают.

Определение распределения средневзвешенной молекулярной массы с применением ВЭ-ГХ-ТДА хроматографией

Образцы подвергают гель-хроматографии с применением сочетания четырех показателей (светорассеяние при 90° и 8°, коэффициент преломления и вискозиметр). Обработка хроматограммы позволяет определить распределение молекулярных масс Мм (Processing of the chromatogram allows the distribution of molecular weights Mw (весомые молекулярные массы).

Условия хроматографии

Инструмент: насос Viscotek, модель VE1121; встроенный двухканальный дегазатор, Gastorr 150.

Колонки: 2 × GMPWXL колонки со смешанным слоем, 7,8 мм ВД × 30 см, Viscotek; температура 40°C.

Подвижная фаза: 0,1 М NaNO₃.

Скорость потока: 0,6 мл/мин.

Датчик: Viscotek модель 302 TDA, оборудован средствами для определения коэффициента преломления, капиллярным вискозиметром и средствами для определения светорассеяния при 90° и 8° и работает при температуре 40°C.

Впрыскиваемый объем 100 мкл.

На фиг.1 и 2 показаны значения молекулярной массы Мм, относящиеся к образцам, полученным из полимерных растворов, инкубированных с ферментом в течение 0-4 часов. Образцы, содержащие природную, не замещенную, гиалуроновую кислоту, показывают более быструю скорость распада, чем частично этерифицированные масляной/муравьиной кислотой в соответствии с изобретением. Степень деполимеризации, достигнутая на плато, также больше для природного полимера. Оба эффекта модулируются степенью замещения масляных/муравьиных сложных эфиров.

При соотношении полимер:фермент 10:1 (фиг.1) соединение, относящееся к примеру 4, с высокой степенью этерификации, сохраняет скорость полимеризации в конце эксперимента (4 часа) более чем в десять раз больше, чем скорость природного полимера. При соотношении полимер:фермент 100:1 (фиг.2) соединение в соответствии с изобретением не деполимеризуется вообще, в то время как молекулярная масса природной ГК снижается на две трети.

Оценка эффективности in viva на здоровых добровольцах

Сложные эфиры кислых полисахаридов в соответствии с изобретением демонстрируют сильное разглаживающее действие в экспериментах, проводимых in vivo на здоровых добровольцах.

Пример, иллюстрирующий изобретение, представлен ниже.

Получают гель, содержащий 0,1% смешанного бутирата/формиата натриевой соли ГК, полученного, как описано в примере 2, в деионизированной воде (98,35%), вместе с другими наполнителями, а именно, загустителем (0,5%) и консервантами (1,05%).

Гель, имеющий такой же состав, содержащий коммерческую натриевую соль ГК в той же концентрации (0,1%) и с теми же наполнителями, используют для сравнения.

Целью эксперимента является оценка эффективности гелевой композиции, содержащей соединение в соответствии с изобретением (обработанная группа А), по сравнению с не модифицированной коммерческой натриевой солью ГК (обработанная группа В), с применением инструментальных измерений увлажнения и эластичности.

24 добровольца (средний возраст 49,8 лет) наносят каждый продукт на половину лица дважды в день каждый день в течение четырех недель.

В начале периода тестирования (To) и в конце четырехнедельной обработки (Tf) инструментальные измерения увлажнения кожи и эластичности в окологлазничной области проводят в местах нанесения. Добровольцы полностью удаляют продукт промыванием водой за три часа до измерения.

Степень увлажнения рогового слоя кожи лица измеряют с применением корнеометра, инструмента, который измеряет уровень увлажнения поверхности кожи, а эластичность кожи измеряют методом эластомерного отсасывания с использованием кутометра, инструмента, который измеряет деформацию поверхности кожи после всасывания в измерительный зонд. Постоянное отрицательное давление 350 мбар создают на одну секунду внутри зонда при контакте с кожей. Эксперимент включает три цикла всасывания/высвобождения, в которых измеряют изменение характеристик эластичности кожи, указанных как параметр R2.

Полученные результаты суммированы в представленной ниже таблице:

Определение биологической эластичности (Параметр R2)
	To	Tf	Изменение	% изменения	t-тест (To-Tf)
Группа А	0,460	0,574	0,114	24,8	P<0,001
руппа В	0,511	0,523	0,012	2,3	P>0,05

Показанные в таблице данные указывают на то, что препарат, полученный в соответствии с изобретением (Группа A) вызывает значительное увеличение параметра R2 (биологическая эластичность), а сравнительный продукт (Группа B) не оказывает какого-либо значительного эффекта параметр R2.

Что касается параметра увлажнения, не существует значительного различия между временем To и Tf для любой обработанной группы; этот результат объясняется типом применяемого протокола эксперимента, в котором прописано смывание препарата за три часа до инструментальных измерений.

Оценка, смягчающего действия на кожу, подвергнутую тепловому стрессу при облучения

Восемь пациенток, страдающих раком молочной железы, имеющих средний возраст 52 года, лечат радиотерапией с применением линейного ускорителя гамма-частиц.

Цикл лечения включает 15 обработок, включающих введение 2 Гр фракций, пять дней в неделю, при общей дозе введения 30 Гр.

Целью анализа является оценка возможности проведения всех требуемых циклов лечения, переносимости продукта и его защитного действия.

Мазь, полученную как описано в примере 9, наносят на облученную область каждый день, три раза в день, с интервалом 8 часов между нанесениями, всегда начиная через 2 часа до радиотерапии и продолжая в течение 5 дней после окончания радиотерапии. Облученную часть кожи оценивают на этой стадии.

Все пациентки перенесли запланированный цикл лечения (30 Гр), что демонстрирует превосходное защитное действие и переносимость применяемого препарата.

Эффективность лечения также оценивают подсчетом побочных реакций на облученной коже. Более конкретно, для оценки применяли следующие баллы:

0: отсутствие реакции

1: легкое покраснение

2: среднее покраснение

3: сильное покраснение

4: шелушение.

У одной пациентки из 8 присутствовало шелушение, у 1 среднее покраснение, у 1 легкое покраснение и у 5 реакция отсутствовала.

Вывод: это предварительное испытание с применением кремообразного препарата в соответствии с изобретением демонстрирует хорошую переносимость и превосходное местное защитное действие против дерматита, вызванного радиотерапией.

Эти открытия четко показывают, что производные в соответствии с изобретением могут предпочтительно использоваться в качестве активных ингредиентов топических композиций, смешанных с дерматологически приемлемыми инертными носителями.

Производные в соответствии с изобретением могут присутствовать в количества от 0,05% до 5% массовых. Подходящие композиции включают кремы, мази, гели, гидрофильные жидкости, водные или водно-спиртовые лосьоны, эмульсии масло-в-воде или вода-в-масле.

Получение смешанных масляных/муравьиных сложных эфиров кислых полисахаридов представлено в следующих примерах.

Пример 1: Синтез масляного и муравьиного сложного эфира натриевой соли гиалуроновой кислоты (BUT07005)

5,00 г гиалуроната натрия молекулярной массой приблизительно 300 кДа солюбилизируют в 100 мл формамида при 95°С, в потоке азота при механическом перемешивании в течение приблизительно 1 часа.

Полученный раствор полисахарида охлаждают до комнатной температуры и по каплям добавляют раствор 503,3 мг 4-диметиламинопиридина в 5 мл формамида со скоростью 1,67 мл/мин. Через 15 минут добавляют 734 мкл масляного ангидрида и оставляют взаимодействовать в течение 40 минут.Реакционную смесь, которая является гомогенной и очень вязкой, переносят в 1,2 л 0,9% NaCl (масс./об.).

Раствор фильтруют при пониженном давлении через фильтр из пористого стекла и затем далее разбавляют 0,9% раствором NaCl (масс./об.) до конечного объема 2,5 л.

Продукт очищают тангенциальной фильтрацией через фильтрующую мембрану с пористостью 10 кДа сначала с 0,9% NaCl (масс./об.) и затем тщательно с ультрачистой водой.

Наконец раствор замораживают, и продукт восстанавливают лиофилизацией; получают 4,03 г белого лиофилизата.

Лиофилизат анализируют ¹H ЯМР.

Степень замещения масляного эфира (СЗ масл.): 0,13, степень замещения муравьиного эфира (СЗ мур.): 0,07.

Пример 2: Синтез масляного и муравьиного сложного эфира натриевой соли гиалуроновой кислоты (BUT07002)

5,00 г гиалуроната натрия молекулярной массой приблизительно 300 кДа солюбилизируют в 100 мл формамида при 95°C, в потоке азота при механическом перемешивании в течение приблизительно 1 часа.

Полученный раствор полисахарида охлаждают до комнатной температуры и по каплям добавляют раствор 0,76 г 4-диметиламинопиридина в 5 мл формамида со скоростью 1,67 мл/мин. Через 15 минут добавляют 1,0 мл масляного ангидрида и оставляют взаимодействовать в течение 40 минут. Реакционную смесь, которая является гомогенной и очень вязкой, переносят в 1,2 л 0,9% NaCl (масс./об.).

Раствор фильтруют при пониженном давлении через фильтр из пористого стекла и затем далее разбавляют 0,9% раствором NaCl (масс./об.) до конечного объема 2,5 л.

Продукт очищают тангенциальной фильтрацией через фильтрующую мембрану с пористостью 10 кДа сначала с 0,9% NaCl (масс./об.) и затем тщательно с ультрачистой водой.

Наконец раствор замораживают, и продукт восстанавливают лиофилизацией; получают 4,90 г белого лиофилизата.

Лиофилизат анализируют ¹H ЯМР.

Степень замещения масляного эфира (СЗ масл.): 0,23, степень замещения муравьиного эфира (СЗ мур.): 0,07.

Пример 3: Синтез масляного и муравьиного сложного эфира натриевой соли гиалуроновой кислоты (BUT07004)

5,00 г гиалуроната натрия молекулярной массой приблизительно 300 кДа солюбилизируют в 100 мл формамида при 95°С, в потоке азота при механическом перемешивании в течение приблизительно 1 часа.

Полученный раствор полисахарида охлаждают до комнатной температуры и по каплям добавляют раствор 1,26 г 4-диметиламинопиридина в 8 мл формамида со скоростью 1,67 мл/мин. Через 15 минут добавляют 1,7 мл масляного ангидрида и оставляют взаимодействовать в течение 40 минут. Реакционную смесь, которая является гомогенной и очень вязкой, переносят в 1,2 л 0,9% NaCl (масс./об.).

Раствор фильтруют при пониженном давлении через фильтр из пористого стекла и затем далее разбавляют 0, 9% раствором NaCl (масс./об.) до конечного объема 2,5 л.

Продукт очищают тангенциальной фильтрацией через фильтрующую мембрану с пористостью 10 кДа сначала с 0,9% NaCl (масс./об.) и затем тщательно с ультрачистой водой.

Наконец раствор замораживают, и продукт восстанавливают лиофилизацией; получают 4,79 г белого лиофилизата.

Лиофилизат анализируют ¹H ЯМР.

Степень замещения масляного эфира (СЗ масл.): 0,50, степень замещения муравьиного эфира (СЗ мур.): 0,06.

Пример 4: Синтез масляного и муравьиного сложного эфира натриевой соли гиалуроновой кислоты (BUT07001)

5,00 г гиалуроната натрия молекулярной массой приблизительно 300 кДа солюбилизируют в 100 мл формамида при 95°C, в потоке азота при механическом перемешивании в течение приблизительно 1 часа.

Полученный раствор полисахарида охлаждают до комнатной температуры и по каплям добавляют раствор 1,67 г 4-диметиламинопиридина в 10 мл формамида со скоростью 1,67 мл/мин. Через 15 минут добавляют 2,25 мл масляного ангидрида и оставляют взаимодействовать в течение 40 минут. Реакционную смесь, которая является гомогенной и очень вязкой, переносят в 1,2 л 0,9% NaCl (масс./об.).

Раствор фильтруют при пониженном давлении через фильтр из пористого стекла и затем далее разбавляют 0,9% раствором NaCl (масс./об.) до конечного объема 2,5 л.

Продукт очищают тангенциальной фильтрацией через фильтрующую мембрану с пористостью 10 кДа сначала с 0,9% NaCl (масс./об.) и затем тщательно с деминерализованной водой.

Наконец раствор замораживают, и продукт восстанавливают лиофилизацией; получают 5,15 г белого лиофилизата.

Лиофилизат анализируют ¹H ЯМР.

Степень замещения масляного эфира (СЗ масл.): 0,69, степень замещения муравьиного эфира (СЗ мур.): 0,04.

Пример 5: Синтез масляного и муравьиного сложного эфира натриевой соли гиалуроновой кислоты (BUT07007)

23,00 г гиалуроната натрия молекулярной массой приблизительно 300 кДа солюбилизируют в 0,46 л формамида при 95°C, в потоке азота при механическом перемешивании в течение приблизительно 1 часа.

Полученный раствор полисахарида охлаждают до комнатной температуры и по каплям добавляют раствор 5,47 г 4-диметиламинопиридина в 20 мл формамида со скоростью 2,0 мл/мин. Через 15 минут добавляют 7,3 мл масляного ангидрида и оставляют взаимодействовать в течение 40 минут. Реакционную смесь, которая является гомогенной и очень вязкой, переносят в 2,5 л 0,9% NaCl (масс./об.).

Раствор фильтруют при пониженном давлении через фильтр из пористого стекла и затем далее разбавляют 0,9% раствором NaCl (масс./об.) до конечного объема 8,0 л.

Продукт очищают тангенциальной фильтрацией через фильтрующую мембрану с пористостью 10 кДа сначала с 0,9% NaCl (масс./об.) и затем тщательно с ультрачистой водой.

Наконец раствор замораживают, и продукт восстанавливают лиофилизацией; получают 22,26 г белого лиофилизата. Лиофилизат анализируют ¹H ЯМР. Степень замещения масляного эфира (СЗ масл.): 0,41, степень замещения муравьиного эфира (СЗ мур.): 0,07.

Пример 6: Синтез масляного и муравьиного сложного эфира натриевой соли гиалуроновой кислоты (BUT07008)

23,00 г гиалуроната натрия молекулярной массой приблизительно 300 кДа солюбилизируют в 0,46 л формамида при 95°C, в потоке азота при механическом перемешивании в течение приблизительно 1 часа.

Полученный раствор полисахарида охлаждают до комнатной температуры и по каплям добавляют раствор 7,71 г 4-диметиламинопиридина в 35 мл формамида со скоростью 3,5 мл/мин. Через 15 минут добавляют 10,3 мл масляного ангидрида и оставляют взаимодействовать в течение 40 минут. Реакционную смесь, которая является гомогенной и очень вязкой, переносят в 7,0 л 0,9% NaCl (масс./об.).

Раствор фильтруют при пониженном давлении через фильтр из пористого стекла и затем далее разбавляют 0,9% раствором NaCl (масс./об.) до конечного объема 8,0 л.

Продукт очищают тангенциальной фильтрацией через фильтрующую мембрану с пористостью 10 кДа сначала с 0,9% NaCl (масс./об.) и затем тщательно с ультрачистой водой.

Наконец раствор замораживают, и продукт восстанавливают лиофилизацией; получают 23,50 г белого лиофилизата. Лиофилизат анализируют ¹H ЯМР.

Степень замещения масляного эфира (СЗ масл.): 0,54, степень замещения муравьиного эфира (СЗ мур.): 0,10.

Пример 7: Синтез масляного и муравьиного сложного эфира натриевой соли гиалуроновой кислоты (BUT07014)

150,00 г гиалуроната натрия молекулярной массой f приблизительно 300 кДа солюбилизируют в 3 л формамида при 95°С, в потоке азота при механическом перемешивании в течение приблизительно 1 часа 45 минут.

Полученный раствор полисахарида охлаждают до комнатной температуры и по каплям добавляют раствор 32,00 г 4-диметиламинопиридина в 200 мл формамида со скоростью 20,0 мл/мин. Через 15 минут добавляют 43,0 мл масляного ангидрида и оставляют взаимодействовать в течение 45 минут. Реакционную смесь, которая является гомогенной и очень вязкой, переносят в 4,0 л ультрачистой воды.

Раствор фильтруют при пониженном давлении через фильтр из пористого стекла и затем далее разбавляют ультрачистой водой до конечного объема 30,0 л.

Продукт очищают тангенциальной фильтрацией через фильтрующую мембрану с пористостью 10 кДа сначала с 0,9% NaCl (масс./об.) и затем тщательно с ультрачистой водой.

Затем раствор стерилизуют пропусканием под давлением (2 бара) через 0,22 мкм фильтровальную мембрану и затем замораживают.

Продукт восстанавливают лиофилизацией с получением 140 г белого лиофилизата.

Лиофилизат анализируют ¹H ЯМР.

Степень замещения масляного эфира (СЗ масл.): 0,32, степень замещения муравьиного эфира (СЗ мур.): 0,07.

Пример 8: Синтез масляного и муравьиного сложного эфира натриевой соли хондроитинсульфата (BUT07015)

201,9 мг хондроитинсульфата молекулярной массой приблизительно 20 кДа солюбилизируют в 1 мл формамида при 95°C, в потоке азота при механическом перемешивании в течение приблизительно 20 минут.

Полученный раствор полисахарида охлаждают до комнатной температуры и по каплям добавляют раствор 49,2 мг 4-диметиламинопиридина в 0,5 мл формамида. Через 15 минут добавляют 65 мкл масляного ангидрида и оставляют взаимодействовать в течение 40 минут.

Продукт восстанавливают осаждением в 20 объемах ацетона, промывают 3 раза ацетоном и затем сушат при низком давлении.

Получают 180,0 мг белого твердого вещества. Образец анализируют ¹H ЯМР.

Степень замещения масляного эфира (СЗ масл.): 0,50, степень замещения муравьиного эфира (СЗ мур.): 0,03.

Пример 9: Получение М/В подтягивающего крема

Не ограничивающий пример данного изобретения, который иллюстрирует получения композиции для крема, содержащей один из масляных/муравьиных сложных эфиров в соответствии с изобретением, представлен ниже.

М/В композиция для крема содержит соединение, описанное в примере 2, в качестве подтягивающего и увлажняющего агента, в концентрации 0,1%, подходящим образом смешанное с обычными наполнителями, применяемыми в косметике для кожи, такими как эмульгаторы, загустители, масла, увлажнители, гелеобразующие агенты, консерванты и т.д.

Вкратце, способ получения является следующим.

Приблизительно 600 мл деминерализованной воды (соответствует приблизительно 60% масс. от общей массы композиции) загружают в турбоаппарат для приготовления эмульсий и предварительно расплавленную жировую фазу добавляют при перемешивании, при температуре приблизительно 70°C. Смесь эмульгируют и медленно охлаждают до температуры 35-40°C. Термолабильные и летучие компоненты добавляют при этой температуре, затем добавляют масляный/муравьиный сложный эфир натриевой соли ГК, описанный в примере 2, растворенный в подходящем количестве воды. Смесь медленно перемешивают до тех пор, пока те будет достигнута температура 25-30°C, и конечный продукт затем выгружают в подходящий контейнер.

В результате получают крем со следующей композицией (% масс./масс.):

Масляный/муравьиный сложный эфир натриевой соли ГК	0,1
(пример 2)
Масла (пальмитиновые/каприловые глицериды-триглицериды)	12
Неионные эмульгаторы	6
Цетиловый спирт	2
Диметикон	4
Силикат MgAl	2
Глицерин	3
Ксилит	2
Парабены	0,7
H2O q.s.p.	100