способ получения биологических жидкостей из тканей внутренних органов

Формула изобретения

Способ получения фации из биологической жидкости, включающий гомогенизацию ткани внутренних органов, гомогенат которой центрифугируют, а получившийся супернатант набирают в лабораторную пипетку, и каплю жидкости 2,5 мкл наносят на обезжиренное предметное стекло и получают фацию через 24 ч после высыхания препарата, отличающийся тем, что ткань внутренних органов в виде навески 1,0 г замораживают при -18°С, а затем гомогенизируют в ступке с добавлением 0,5 мл деионизированной воды, вновь замораживают при -18°С, в замерзший гомогенат вводят электрод ультразвукового аппарата и подвергают ультразвуковому воздействию в течение нескольких секунд частотой 44,4 кГц, апмлитудой 30-50 мкм до расплавления гомогената с последующим центрифугированием при +25°С в течение 20 мин с частотой 10.000 g.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальным исследованиям в онкологии, и может быть использовано в экспериментальных и клинических исследованиях для оценки общего состояния организма и состояния отдельных тканей.

Известен «Способ оценки общего состояния организма» (см. Шабалин В.В., Шатохина С.Н «Морфология биологических жидкостей путем клиновидной дегидратации (высыхания) капли сыворотки, помещенной на предметное стекло». - М., 2004 г.). В зависимости от функционального состояния организма (гипоксии, накопления токсических продуктов) в так называемых фациях (образцах) сыворотки, высохшей на предметном стекле, описывают разные морфологические формы (жгуты, трещины, аркады, звездообразные структуры и т.д.). Недостатком способа является то, что описываемый способ используется для обобщающей оценки всех обменных процессов организма. Известно, однако, что каждый орган характеризуется специфическим набором клеточных элементов, определяющих функцию этого органа, и эти особенности обмена находят лишь частичное отражение в сыворотке крови.

Известен «Способ получения биологической жидкости для морфологического исследования» (см. патент RU2293324. Захарова Г.П., Шабалин В.В., Янов Ю.К., Тырнова Е.В., Клячко Л.Л.). Этот способ выбран нами в качестве прототипа. Способ заключается в получении гомогената из ткани полипа с последующим центрифугированием гомогената в течение 15 минут при частоте 900g. Надосадочную жидкость собирают в пипетку, после чего на обезжиренное стекло наносят каплю размером 2,5 мкл и после высыхания в течение 12-72 часов подвергают микроскопированию для оценки структур твердой фазы тканевой жидкости по методу Шабалина В.В. и Шатохиной С.Н. Однако из внутренних органов экспериментальных животных - белых крыс, путем одной гомогенизации и центрифугирования тканей не удается получить биологическую жидкость для получения фаций этой жидкости.

Целью изобретения является получение биологической жидкости из ткани внутренних органов экспериментальных животных, с последующим выделением фации этой жидкости.

Поставленная цель достигается тем, что навеску ткани внутренних органов экспериментального животного 1,0 г замораживают при -18°С, гомогенизируют в ступке с добавлением деионизированной воды (0.5 мл), вновь замораживают при -18°С, после чего подвергают ультразвуковой обработке в течение нескольких секунд частотой 44,4 кГц, апмлитудой 30-50 мкм до расплавления гомогената, после этого гомогенат центрифугируют при +25°С в течение 20 минут с частотой 10.000 g, супернатант набирают в лабораторную пипетку и каплю жидкости 2,5 мкл наносят на обезжиренное предметное стекло, а через 24 часа после высыхания препарат микроскопируют с оценкой твердой фазы биологической жидкости фации.

Пример конкретного выполнения «Способа получения биологических жидкостей из ткани внутренних органов». После декапитации животного (белой крысы) из крови делают мазки, окрашенные по Романовскому, для оценки формулы белой крови (в том числе лейкоцитарного индекса токсичности), из сыворотки получают ее фации. Навески тканей (предстательная железа, семенник, тимус, надпочечники и т.п.) замораживают при -18°С, затем гомогенизируют в ступке с добавлением деионизированной воды (0,5 мл) и вновь замораживают при -18°С. Полученный гомогенат подвергают ультразвуковой обработке в течение нескольких секунд до расплавления гомогената (44,4 кГц и амплитуда 30-50 мкм). Полученную взвесь центрифугируют при +25°С в течение 20 минут с частотой 10.000 g. Супернатант собирают в лабораторную пипетку и каплю жидкости 2,5 мкл наносят на обезжиренное предметное стекло. Через 24 после высыхания препарат подвергают микроскопированию подобно тому, как это делают с фациями сыворотки крови.

Технико-экономическая эффективность «Способа получения биологических жидкостей из ткани внутренних органов» заключается в том, что на основе двукратного замораживания, оттаивания и ультразвуковой обработки ткани внутренних органов белых беспородных крыс, получают более полный объем тканевой жидкости, свободной от мембранных структур клетки. При этом оценивают не только общее состояние организма, но и состояние отдельных тканей, характеризующих специфические обменные свойства конкретных тканей.