способ определения иммуномодуляторных свойств косметических средств

Формула изобретения

Способ определения иммуномодуляторных свойств косметических средств, характеризующийся тем, что проводят определение изменений титра антител слюны к дизентерийной группе микробов в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) в слюне, при этом до обработки поверхности кожи лица, рук или тела косметическим средством и после ее нанесения на поверхность кожи в пробах слюны определяют изменение титра антител, при этом делят испытуемых лиц на две группы, у лиц первой группы с низким титром антител 1:128 и ниже после воздействия на кожу лица или тела косметическим средством определяют повышение содержания антител в слюне, т.е. иммуномодуляторные свойства, и, наоборот, у второй группы лиц при титрах антител 1:256 и выше реакция не определяется или отмечается нормализация содержания гуморальных факторов иммунитета в слюне.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к косметологии и медицине, в частности к иммунологии, и предназначено для определения иммуномодуляторных свойств косметических средств, исследования эффективности лечения кожи лица, рук и тела этими средствами, определения индивидуальной и групповой величины неспецифической защиты организма к микробам, для контроля и прогнозирования эффективности воздействия этими средствами, повышающими уровень устойчивости организма к микробам.

В настоящее время в медицине для оценки иммунного статуса и эффективности лечения различных заболеваний применяются в основном способы, основанные на исследовании или количества, или активности факторов иммунитета, циркулирующих в крови. Однако абсолютное большинство этих способов отличается трудоемкостью и недостаточной точностью. При этом необходимо соблюдение стерильных условий, имеется возможность инфицирования СПИДом и другими инфекциями, требуются дорогостоящие реактивы, сложная аппаратура. В связи с этим внимание иммунологов привлекают те способы, которые позволяют оценить величину неспецифической защиты организма по активности и количеству факторов иммунитета слюны, участвующих в иммунитете. В частности, с этой целью применяются способы исследования активности лизоцима (Бухарин О.В., Васильев Н.В., 1974), -лизинов (Gelhard, 1982). Однако они также отличаются трудоемкостью, а для их проведения требуются дорогостоящие реактивы.

Прототипом предлагаемого технического решения является способ определения в слюне и сыворотке крови иммуноглобулинов A, М и G, для чего чаще всего используют способ радиарной иммунодиффузии по Манчини (Шляхов Э.Н., Андриеш Л.Н. Иммунология: справочное пособие. - Кишинев: Штинца, 1985. - С.107). Однако этот способ имеет ряд недостатков. К ним относятся: высокая трудоемкость, недостаточная точность способа, необходимость использования при исследовании дорогостоящих сывороток к иммуноглобулинам, дефицитных агаров, специальных пластинок, камер и т.д.

Изобретение направлено на решение задачи: упрощение процесса при высокой точности, экономичности и безопасности определения иммуномодуляторных свойств косметических средств «Карэль» , оценки индивидуальной и групповой неспецифической защиты организма к микробам, особенно при массовых исследованиях, для контроля и прогнозирования эффективности лечения этими косметическими средствами, регулирующими уровень неспецифической защиты организма к микробам.

Решение задачи достигается способом определения иммуномодуляторных свойств косметических средств, характеризующимся тем, что проводят определение изменений титра антител слюны к дизентерийной группе микробов в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) в слюне, при этом до обработки поверхности кожи лица, рук или тела косметическим средством и после его нанесения на поверхность кожи в пробах слюны определяют изменение титра антител, при этом делят испытуемых лиц на две группы, у лиц первой группы с низким титром антител 1:128 и ниже после воздействия на кожу лица или тела косметическим средством определяют повышение содержания антител в слюне, т.е. иммуномодуляторные свойства, и, наоборот, у второй группы лиц при титрах антител 1:256 и выше реакция не определяется или отмечается нормализация содержания гуморальных факторов иммунитета в слюне.

Технический результат от использования существенных признаков предлагаемого решения состоит в упрощении процесса при высокой точности, экономичности и безопасности определения иммуномодуляторных свойств косметических средств.

Ниже приведена причинно-следственная связь существенных признаков предлагаемого технического решения с достигаемым результатом.

Новизна способа заключается в том, что неспецифическую защиту организма к микробам определяют по титру антител в слюне с использованием РПГА к дизентерийной группе микробов.

Результаты исследований свидетельствуют о том, что предлагаемый способ отражает уровень местного иммунитета и величину неспецифической гуморальной защиты организма в целом и позволяет определять иммуномодуляторные свойства различных видов косметических средств серии «Карэль» .

Выявленные результаты исследований свидетельствуют о высокой информативности предлагаемого способа, позволяющего оценить иммуномодуляторные свойства различных видов косметических средств серии «Карэль» .

Установлено, что предлагаемый способ позволяет оценить как величину местного гуморального иммунитета, так и уровень неспецифической защиты организма к микробам.

Использование РПГА для определения величины титра антител к дизентерийной группе микробов в слюне основано на результатах исследований, в которых нами установлена высокая прямая корреляционная связь между титрами антител слюны к шигеллам Зонне, Ньюкестла и Флекснера. У лиц с низкой исходной величиной титра антител к шигеллам Зонне отмечается невысокий аналогичный показатель в слюне к шигеллам Ньюкестла и Флекснера и, наоборот, у испытуемых с высоким титром антител к шигеллам Зонне определяется высокая концентрация гуморальных факторов в слюне к другим микробам.

Полученные результаты исследований с использованием предлагаемого способа полностью подтверждают выявленный универсальный характер изменения неспецифической защиты организма при лечении больных. Эта универсальность проявляется в том, что независимо от нозологической формы заболевания и способа лечения, в том числе иммуномодуляторами, определяется обратная корреляционная зависимость между исходной величиной неспецифической защиты организма и уровнем ее повышения (В.А.Черешнев, В.П.Рочев, Н.И.Аверьянова. Способ отбора лиц для лечения иммуностимуляторами. Патент № 2007722 от 15.02.1994 г.; Черешнев В.А., Рочев В.П., Мозговая Л.А., Черешнева М.В., Фокина Н.Б., Чупракова Е.В., Платова О.А. Оценка неспецифической зашиты организма по определению гуморальных факторов в слюне: методические рекомендации. - Пермь, 1998. - 20 с.).

Полученные данные соответствуют правилу Вильдера или «закону исходного уровня», который состоит в том, что относительное или абсолютное приращение величины того или иного показателя находится в обратной зависимости от его исходного уровня (Васильев Н.В., Коляда Т.И. Закон исходного уровня и влияние иммуномодуляторов на иммунитет. Реабилитация иммунной системы: Тезисы 2-го Международного симпозиума. - Цхалтубо, 1990. - С.15).

Приведенные выше данные свидетельствуют о значительных преимуществах предлагаемого способа в сравнении с прототипом, которые заключаются, прежде всего, в том, что предлагаемый способ отличается простотой исполнения, высокой точностью, экономичностью и безопасностью для обследуемых лиц. В серийных исследованиях для определения иммуномодуляторных свойств косметических средств серии «Карэль» требуется не более 3-5 часов, из них на оценку титра антител в слюне до и после воздействия этих средств приходится 15-20 мин на одного испытуемого. Высокая точность исследования - процент ошибки в различных сериях исследований опытов составляет 1-3%, 100% воспроизводимость способа связана с тем, что титр антител в слюне определяется в РПГА с использованием коммерческих антигенных эритроцитарных диагностикумов. Экономичность способа основана на том, что не требуется стерильная посуда, инструменты для взятия крови, дорогостоящие дефицитные препараты, сыворотки к иммуноглобулинам, агары и стерильные условия для постановки опытов. В связи с этим способ можно использовать для определения иммуномодуляторных свойств различных косметических средств серии «Карэль» по месту работы, учебы обследуемых.

Дополнительным преимуществом предлагаемого способа является его безопасность для обследуемых лиц, что является очень важным в связи с широким распространением различных инфекций среди населения, в том числе ВИЧ-инфекции.

Осуществление изобретения

Результаты исследований о возможности использования предлагаемого способа для определения иммуномодуляторных свойств косметических средств (на примере средства «Карэль» ), оценки индивидуальной и групповой величины неспецифической защиты организма к микробам, контроля и прогнозирования эффективности оздоровления (лечения) кожи этими средствами изложены в нижеописанных примерах.

Пример 1. Общие условия проведения процесса

Способ осуществляется следующим образом: у обследуемого забирают слюну в пробирку в объеме 0.6-1.5 мл. Затем кожу лица или тела тщательно обрабатывают косметическим средством «Карэль» , слюну повторно забирают через 30 мин - 1 час после обработки кожи кремом. Слюну дозатором переносят в объеме 0.5 мл в лунку первого ряда планшета для макроварианта постановки РПГА. Добавляют в первую лунку и в последующие лунки по 0.5 мл физиологического раствора и раститровывают дозатором путем последовательного двукратного разведения в объеме 0.5 мл. В каждую лунку приливают по 0.2 мл 1% взвеси эритроцитарного антигенного диагностикума к шигеллам Зонне, Ньюкестла или Флекснера. Планшеты осторожно встряхивают и выдерживают при t 10-20°С 18-24 час, затем оценивают результаты. Титром антител считают максимальное ее разведение, в котором гемагглютинация оценивается не менее чем в три креста, и при тифе антител 1:128 и ниже определяют повышение содержания антител в слюне, и, наоборот, при титрах антител 1:256 и выше реакция не определяется или отмечается снижение титра антител.

Способ предусматривает деление испытуемых лиц на две группы, у лиц первой группы с низким титром антител 1:128 и ниже после воздействия на кожу лица или тела косметическим средством определяют повышение содержания антител в слюне, т.е. иммуномодуляторные свойства, и, наоборот, у второй группы лиц при титрах антител 1:256 и выше реакция не определяется или отмечается нормализация содержания гуморальных факторов иммунитета в слюне.

Пример 2. Исследование иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль» крема дневного увлажняющего для сухой и нормальной кожи

Исследования иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль» крема дневного увлажняющего для кожи лица и шеи проведены со слюной 18 служащих в возрасте от 18 до 61 года до начала и после воздействия на кожу этого косметического средства.

Основным действующим началом крема «Карэль» для кожи лица и шеи является сложный комплекс биологически активных веществ экстракта шиповника, сверхкритических углекислотных экстрактов косточки облепихи и зародышей пшеницы. Экстракты, полученные с применением новых инновационных технологий, являются натуральными, экологически чистыми и эффективными компонентами косметического средства. Это активные поливитаминные препараты, в которых содержатся: каротиноиды ( -, -, -каротин, ликопин); витамины Е ( -, -, -, -токоферолы и др.); аскорбиновая кислота, витамины группы В (фолиевая кислота, пантотеновая кислота, рибофлавин и др.); флавоноиды (вещества Р-витаминного действия); витамин К (викасол), витамин F (полиненасыщенные жирные кислоты: линолевая, линоленовая); витамин Д, а также углеводы, гликофосфолипиды и фосфолипиды, жирные кислоты, стерины, органические и аминокислоты, дубильные вещества и др.

Благодаря сбалансированному составу крем дневной увлажняющий «Карэль» повышает регенерирующие свойства кожи, оказывает противовоспалительное, противотоксическое и антиоксидантное действие, способствует укреплению капилляров, заживлению кожи после ожогов и воспалений, восстановлению барьерных функций эпидермиса и сохранению влаги в коже, улучшает обмен веществ.

Состав средства: вода, масло оливковое, стеарин, глицерин, моноглицериды, цетиариловый спирт, экстракты зародышей пшеницы, облепихи и шиповника, ланолин, триэтаноламин, отдушка и катон.

Показания для применения. Косметический крем «Карэль» дневной увлажняющий успешно используется для профилактики увядания (старения) и поддерживания здорового состояния кожи. Это средство легко впитывается в кожу и удобно в применении в течение дня. Крем рекомендуется для сухой, увядающей или нормальной кожи, подвергающейся неблагоприятному воздействию вредных факторов внешней среды.

Противопоказания: индивидуальная непереносимость компонентов крема.

Способ применения: крем наносят тонким слоем на предварительно очищенную, сухую кожу лица и шеи. При этом не остается жирного блеска. Это средство может служить основой для макияжа.

Результаты исследований иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль» крема дневного увлажняющего для сухой и нормальной кожи у 18 пациентов отражены в табл.1.

Исследование иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль» крема дневного увлажняющего для сухой и нормальной кожи
№ группы	Число испытуемых	Влияние крема «Карэль» дневного увлажняющего для сухой и нормальной кожи на титры антител слюны
до начала воздействия (М±m)	после воздействия
М±m	в % к исходной величине
I	15			257.33
II	3			120.00
I-II	18			142.52
Примечание: 1) в числителе отражена средняя величина титра антител слюны (М) и средняя ошибка (±m), в знаменателе - индивидуальные его показатели;
2) *Р<0.05 по сравнению с титром антител слюны до начала воздействия косметического средства «Карэль» крема дневного увлажняющего для сухой и нормальной кожи.

Как видно из табл.1, исходная средняя величина титра антител составляет 170.11±66.22, индивидуальные его показатели равняются от 2 до 1024. После воздействия крема дневного увлажняющего «Карэль» титр антител повышается до 242.44±132.44, что составляет 142.52% к исходному титру антител. При этом определяется обратная корреляционная зависимость между исходной величиной титра антител и уровнем его повышения под влиянием косметического крема «Карэль» дневного увлажняющего для сухой и нормальной кожи. У лиц первой группы с низким исходным титром антител, составляющим 128 и менее, отмечается существенное повышение средней величины титра антител слюны от 33.47 до 86.13±18.77 (257.33% к исходной величине титра антител слюны), и это повышение носит статистически достоверный характер (Р<0.05). И наоборот, у испытуемых второй группы с высоким исходным титром антител, составляющим 256 и выше, наблюдается тенденция к незначительному повышению средней величины титра антител в слюне от 853.33±175.12 до 1024.00±525.36 (120.00% к исходной величине титра антител слюны).

Результаты исследований свидетельствуют о том, что предлагаемый способ отражает уровень местного иммунитета и величину неспецифической гуморальной защиты организма в целом. Использование предлагаемого способа помогло установить, что воздействие на поверхность кожи лица и шеи косметического средства «Карэль» крема дневного выявляет его иммуномодуляторные свойства. При этом у лиц с низким тиром антител, составляющим 128 и ниже, определятся существенное статистически достоверное повышение содержания антител в слюне как гуморального фактора иммунитета, как местного, так и общего иммунитета.

Пример 3. Исследование иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль» крема для рук

Проведены исследования иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль» крема для рук со слюной у 15 пациентов в возрасте от 17 до 61 года. Слюну брали до начала и после воздействия на кожу косметического средства «Карэль» крема для рук.

Показания к применению. Косметическое средство «Карэль» крем для рук используется для ухода за кожей, повышения сопротивляемости кожи рук к неблагоприятным факторам внешней среды, улучшения процесса регенерации, профилактики преждевременного старения и восстановления эластичности кожи.

Состав: вода, масло оливковое, стеарин, глицерин, моноглицериды, цетиариловый спирт, ланолин, воск пчелиный, экстракты облепихи и календулы, триэтаноламин, парфюмерная композиция и катон.

Способ применения: средство наносят тонким слоем на кожу вымытых рук и проводят легкий массаж.

Противопоказания: индивидуальная непереносимость компонентов средства.

Результаты исследований представлены в табл.2.

Исследование иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль» крема для рук
№ группы	Число испытуемых	Влияние косметического средства «Карэль» крема для рук на титры антител слюны
до начала воздействия (М±m)	после воздействия
М±m	в % к исходной величине
I	7			357.16
II	8			45.16
I-II	15			64.26
Примечание: 1) в числителе отражена средняя величина титра антител слюны (М) и средняя ошибка (±m), в знаменателе - индивидуальные его показатели;
2) *Р<0.05 по сравнению с титром антител слюны до начала воздействия косметического средства «Карэль» крема для рук.

Как видно из табл.2, у 15 служащих средняя исходная величина титра антител составляет 561.07±151.32, индивидуальные его показатели равняются от 16 до 2048. После воздействия косметического средства «Карэль» для рук средняя величина титра антител имеет тенденцию к снижению до 360.53±74.51 (до 64.26% к исходной величине). При этом, как и в примере 1, определяется обратная корреляционная связь между исходной величиной тира антител и уровнем его повышения в слюне: у лиц первой группы с низкой исходной величиной титра антител, равняющейся 128 и ниже, средний показатель составляет 32.00±6.71. Под влиянием воздействия косметического средства «Карэль» крема для рук средняя величина титра антител в слюне у них повышается существенно - до 114.29±31.31 (357.16%), и это повышение имеет статистически достоверный характер (Р<0.05). И наоборот, у испытуемых второй группы с высоким исходным титром антител, составляющим 256 и выше, наблюдается тенденция к снижению средней величины титра антител в слюне от 1133.71±222.18 до 512.00±119.03 (45.16% к исходной величине тира антител).

Таким образом, подтверждаются данные исследования, изложенные в примере 2, свидетельствующие об обратной корреляционной связи между исходной величиной титра антител и уровнем его изменения под влиянием косметических средств серии «Карэль» . У лиц первой группы с низким исходным титром антител, составляющим 128 и менее, отмечается существенное повышение его уровня, и, наоборот, у испытуемых второй группы с высоким исходным титром антител, составляющим 256 и выше, наблюдается тенденция к снижению, реакция не определяется или отмечается несущественное повышение титра антител в слюне.

Результаты исследований свидетельствуют о том, что предлагаемый способ отражает уровень местного иммунитета и величину неспецифической гуморальной защиты организма в целом и позволяет определять иммуномодуляторные свойства различных видов косметических средств серии «Карэль» .

Пример 4. Исследование иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль» - крема для тела с охлаждающим эффектом

Показания к применению. Косметическое средство «Карэль» крем для тела с охлаждающим эффектом применяется в качестве вспомогательного или профилактического средства при различных заболеваниях и повреждениях костно-мышечной системы. Данное средство используется для восстановления работоспособности людей, занимающихся физическим трудом, особенно лиц пожилого возраста. Механизмы оздоровления с помощью данного средства связаны с нормализацией крово- и лимфообращения в костно-мышечной системе, восстановлением в ней нормального обмена веществ, ускоренным выведением в мышцах продуктов метаболизма, уменьшением или прекращением болей в костно-мышечной системе. Средство обладает антимикробным, противовоспалительным, тонизирующим, улучшающим регенерацию поврежденных тканей, обезболивающим, противозудным, иммуностимулирующим и охлаждающим действием. Особенно показано применение при острых закрытых травмах в первые двое суток.

Состав: масло пихтовое, содержащее эфирное масло, дубильные вещества, аскорбиновую кислоту, каротин, токоферолы и др.;

- масло кедровое и облепиховое, содержащие насыщенные и ненасыщенные жирные кислоты (витамин F), в т.ч. линолевую, линоленовую; каротиноиды (провитамин А) и токоферолы (витамин Е), стерины, фосфолипиды и др.;

- сверхкритический углекислотный экстракт хвои содержит хлорофилл, -каротин, терпены, терпеноиды, дубильные вещества, витамины (С, Е, К, Р, группы В, РР), флавоноиды и др.;

- воск пчелиный является комплексной смесью органических веществ, содержит жирные кислоты, витамин А и др.;

- экстракт прополиса содержит: душистую смолу, состоящую из аминокислот, белков, углеводов, бальзаминов и др.; ферменты, витамины, микроэлементы и др.;

- ментол;

- камфора.

Способ применения: средство наносят тонким слоем на чистую сухую кожу легкими массажными движениями.

Противопоказания: индивидуальная непереносимость компонентов средства.

Проведены исследования иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль» с охлаждающим эффектом со слюной 17 человек в возрасте от 18 до 60 лет. Результаты исследований введены в табл.3.

Исследование иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль» крема для тела с охлаждающим эффектом
№ группы	Число испытуемых	Влияние косметического средства «Карэль» крема для тела с охлаждающим эффектом на титры антител слюны
до начала воздействия (М±m)	после воздействия
М±m	в % к исходной величине
I	13			276.49
II	4			102.66
1-II	17			143.01
Примечание: в числителе отражена средняя величина титра антител слюны (М) и средняя ошибка (±m), в знаменателе - индивидуальные его показатели.

Как видно из табл.3, исходная средняя величина титра антител слюны равняется 196.12±69, индивидуальные его показатели колеблются от 2 до 1024. После воздействия косметического средства «Карэль» крема для тела с охлаждающим эффектом средняя величина титра антител имеет тенденцию к повышению до 280.47±138 (143.01% к исходной величине). При этом, как и в примерах 2 и 3, определяется обратная корреляционная связь между исходной величиной титра антител и уровнем его повышения в слюне: у лиц первой группы с низкой исходной величиной титра антител, равняющейся 128 и ниже, средний показатель составляет 59.54±10.45. После воздействия на поверхность кожи косметического средства «Карэль» с охлаждающим эффектом средняя величина титра антител в слюне повышается очень существенно - до 164.62±84.60 (276.49%). И наоборот, у испытуемых второй группы с высоким исходным титром антител, составляющим 256 и выше, со средней величиной титра антител (640.00±155.34) средний уровень реакции со стороны гуморальных факторов иммунитета слюны носит незначительный характер: средняя величина титра антител после воздействия косметического крема равняется 657.00±159.47 (102.66% к исходной величине титра антител слюны).

Таким образом, полностью подтверждаются данные исследования, изложенные в примерах 2 и 3, свидетельствующие об обратной корреляционной связи между исходной величиной титра антител и уровнем его изменения под влиянием косметических средств серии «Карэль» . У лиц первой группы с низким исходным титром антител, составляющим 128 и менее, отмечается существенное повышение его уровня, и, наоборот, у испытуемых второй группы с высоким исходным титром антител, составляющим 256 и выше, наблюдается тенденция к снижению, реакция не определяется или отмечается несущественное повышение титра антител в слюне.

С учетом вышеизложенного, предлагаемый способ можно рекомендовать для широкого использования при исследовании иммуномодуляторных свойств различных косметических средств серии «Карэль» , при исследовании индивидуальной величины гуморального фактора иммунитета и уровня неспецифической защиты организма к микробам, а также в других областях медицины и косметологии.