модифицированные антигенсвязывающие молекулы с измененной клеточной сигнальной активностью

Формула изобретения

1. Модифицированное антитело к CD20 или его антигенсвязывающий фрагмент, включающее(ий):

а) первый выделенный полипептид, включающий последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 128, и второй выделенный полипептид, включающий последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 48;

б) первый выделенный полипептид, включающий последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 129, и второй выделенный полипептид, включающий последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 48; или

в) первый выделенный полипептид, включающий последовательность

вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 12, и второй выделенный полипептид, включающий последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 134.

где указанное модифицированное антитело индуцирует при объединении с CD20 более высокий уровень апоптоза по сравнению с мышиным антителом В-Ly1

2. Антитело по п.1, где указанное антитело включает первый выделенный полипептид, включающий последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 128, и второй выделенный полипептид, включающий последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 48.

3. Антитело по п.1, где указанное антитело включает первый выделенный полипептид, включающий последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 129, и второй выделенный полипептид, включающий последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 48.

4. Антитело по п.1, где указанное антитело включает первый выделенный полипептид, включающий последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 12, и второй выделенный полипептид, включающий последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 134.

5. Антитело по любому из пп.1-4, где указанное антитело включает область Fc IgG, которая подвергнута гликоинженерингу для увеличения количества комплексных бисекционных олигосахаридов.

6. Антитело по любому из пп.1-5, где указанное антитело включает область Fc IgG, которая подвергнута гликоинженерингу для снижения доли остатков фукозы.

7. Антитело по любому из пп.1-6, где указанное антитело включает область Fc IgG с N-связанными олигосахаридами, которые модифицированы для усиления по меньшей мере одной эффекторной функции и/или увеличения аффинности к Fc рецептору.

8. Композиция, включающая популяцию антител по п.7, для усиления по меньшей мере одной эффекторной функции и/или увеличения аффиности к Fc-рецептору, где по меньшей мере 20% олигосахаридов в областях Fc указанной популяции антител являются бисекционными, нефуколизированными.

9. Композиция, включающая популяцию антител по п.7, для усиления по меньшей мере одной эффекторной функции и/или увеличения аффиности к Fc-рецептору, где по меньшей мере 50% олигосахаридов в областях Fc указанной популяции антител являются нефуколизированными.

10. Клетка-хозяин, экспрессирующая антитело по любому из пп.5-7, где указанная клетка-хозяин включает один или более полинуклеотидов, кодирующих вариабельную область указанной тяжелой цепи и вариабельную область указанной легкой цепи, и по меньшей мере один полинуклеотид, кодирующий полипептид с активностью (1,4)-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы III, который экспрессируется в количестве, достаточном для гликоинженеринга в области Fc.

11. Клетка-хозяин по п.10, где указанная клетка-хозяин дополнительно экспрессирует нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, обладающий активностью маннозидазы II.

12. Клетка-хозяин по п.10 или 11, в которой указанное антитело, продуцируемое указанной клеткой-хозяином, проявляет повышенную связывающую Fc рецептор аффинность в результате указанного гликоинженеринга.

13. Клетка-хозяин по п.12, где Fc рецептором является Fc RIIIA рецептор.

14. Клетка-хозяин по п.10 или 11, в которой указанное антитело, продуцируемое указанной клеткой-хозяином, проявляет повышенную эффекторную функцию в результате указанного гликоинженеринга.

15. Клетка-хозяин по п.14, в которой указанная повышенная эффекторная функция является повышенной Fc опосредуемой клеточной цитотоксичностью.

16. Клетка-хозяин по п.14 или 15, в которой указанная повышенная эффекторная функция является повышенной антитело зависимой клеточной цитотоксичностью.

17. Клетка-хозяин по п.10 или 11, где полинуклеотид, кодирующий вариабельную область тяжелой цепи, дополнительно включает последовательность, кодирующую, область, эквивалентную Fc области человеческого иммуноглобулина.

18. Фармацевтическая композиция, включающая эффективное количество антитела по одному из пп.1-7 или композиции по любому из пп.8 и 9 и фармацевтически приемлемый носитель для лечения расстройств, которые лечатся истощением В-клеток.

19. Применение антитела по любому из пп.1-7 или композиции по любому из пп.8 и 9 для получения лекарственного средства для лечения расстройств, которые лечатся истощением В-клеток.

20. Применение антитела или композиции по п.19, при котором указанным расстройством является злокачественное заболевание крови или аутоиммунное заболевание.

21. Применение антитела или композиции по п.20, при котором злокачественным заболеванием крови является В-клеточная лимфома, неходжкинская лимфома или В-клеточная хроническая лимфоцитарная лейкемия.

22. Применение антитела или композиции по п.20, где указанным аутоиммунным заболеванием является ревматоидный артрит или системная красная волчанка.

23. Применение антитела или композиции по п.21, при котором злокачественным заболеванием крови является В-клеточная лимфома.

24. Антитело по любому из пп.1-7 для применения в качестве лекарственного средства для лечения В-клеточной лимфомы.

25. Композиция по любому из пп.8 и 9 для применения в качестве лекарственного средства для лечения В-клеточной лимфомы.

26. Выделенный полинуклеотид, который кодирует первый выделенный полипептид п.1, где указанный первый выделенный полипептид включает последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 128.

27. Выделенный полинуклеотид, который кодирует второй выделенный полипептид п.1, где указанный второй выделенный полипептид включает последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 48.

28. Выделенный полинуклеотид, который кодирует первый выделенный полипептид п.1, где указанный первый полипептид включает вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 129.

29. Выделенный полинуклеотид, который кодирует второй выделенный полипептид, где указанный второй выделенный полипептид включает вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 134.

30. Выделенный полинуклеотид, кодирующий первый выделенный полипептид п.1, где указанный первый выделенный полипептид включает вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 12.

31. Вектор экспрессии, включающий полинуклеотид по любому из пп.26-30.

32. Клетка-хозяин, включающая вектор экспрессии по п.31.

33. Способ получения в клетке-хозяине антитела к CD20, имеющего Fc область с модифицированными олигосахаридами и измененного для повышения эффекторной функции, причем указанный способ включает:

(а) культивирование клетки-хозяина для экспрессии одной или более нуклеиновых кислот, кодирующих указанное антитело, и по меньшей мере одной нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с активностью (1,4)-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы III, в условиях, допускающих продукцию указанного антитела и осуществление модификации олигосахаридов, представленных в Fc области указанного антитела; и

(б) выделение указанного антитела,

где указанное антитело является модифицированным антителом по любому из пп.1-7.

34. Способ по п.33, где указанная клетка-хозяин дополнительно изменена для экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, обладающий активностью маннозидазы II.

35. Способ по п.33 или 34, где модифицированные олигосахариды обладают пониженным количеством остатков фукозы по сравнению с немодифицированными олигосахаридами.

36. Способ по любому из пп.33-35, где указанное антитело, продуцируемое указанной клеткой-хозяином, имеет повышенное относительное содержание бисекционных, нефукозилированных олигосахаридов в Fc области указанного полипептида.

Описание изобретения к патенту

Текст описания приведен в факсимильном виде.