способ лечения заболеваний роговицы, сетчатки и зрительного нерва у собак

Формула изобретения

Способ лечения заболеваний роговицы у собак, заключающийся в ретробульбарном введении лекарственного вещества в непосредственной близости от патологического очага, отличающийся тем, что в качестве лекарственного средства используют мезенхимальные стволовые клетки пуповины или плаценты, взятые после нормальных родов, при этом осуществляют ретробульбарное введение клеток путем инъекции 1-2 мл физиологического раствора, содержащего 0,075-0,20×10 ⁶ клеток/кг веса одномоментно 1-2 раза в год.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к разделу офтальмологии, в частности консервативного лечения заболеваний зрительного нерва у собак.

Наиболее распространенные формы введения лекарственных препаратов - пероральное, внутривенное и внутримышечное - на пути доставки к органу-мишени (глазу) проходят через множество барьеров, подвергаются пресистемной и системной элиминации, разведению в кровеносном русле, и в конечном счете ничтожная часть лекарственного вещества не способна осуществить необходимого лечебного эффекта. Повышение же концентрации препаратов нередко приводит к токсическим или нежелательным проявлениям, а стремление ввести большее количество лекарства местно ограничено анатомическими особенностями органа зрения.

Основной причиной слепоты у животных является неспособность введения препаратов в глаз и поддержания указанных препаратов в терапевтически эффективной концентрации в нем.

Известны следующие группы фармакологических препаратов, применяемых при заболеваниях зрительного нерва, биогенные стимуляторы - торфот, плацентарная кровь, стекловидное тело, цитотоксическая сыворотка, АТФ, средства, улучшающие состояние сосудистой стенки и микроциркуляцию - продектин, трентал.

Однако, несмотря на разнообразие применяемых препаратов, практически отсутствуют лекарственные средства, способные воздействовать на зрительный нерв и вызывать стойкое улучшение зрительных функций, эффект оказывается кратковременным и нестойким.

Известен способ лечения различных заболеваний глаз путем введения лекарственного препарата в теноново пространство глаза для создания постоянной концентрации препарата в тканях глаза, для чего вводят трубку, соединенную микрокапельницей, закрепленной в области надбровья, при этом конец трубки соединяют с полоской коллагеновой гемостатической губки (пат. РФ 2008858).

Известен способ лечения возрастной дегенерации желтого пятна, дегенерации сетчатки, пролиферативной витреоретинопатии путем продолжительной доставки активного лекарства в область глаза млекопитающего за счет субконъюнктивального или периокулярного введения эффективного количества лекарственного средства ретиноида (пат. РФ № 2353393). Недостаток - недостаточная эффективность лекарственного средства.

Наиболее близкий к заявляемому способу лечения заболеваний роговицы, сетчатки и зрительного нерва у собак является способ, включающий депонирование в тканях глаза лекарственного препарата путем ретробульбарного введения в непосредственной близости от патологического очага 1 раз в 5 дней (пат. РФ № 2268689). В качестве лекарственного средства используют эритроцитарную массу, выделенную от больного животного, которую насыщают лекарственным препаратом, например гентамицином, деринатом, эмоксипином или тауфоном. Данный способ не позволяет добиться полного выздоровления, например избежать внезапной слепоты у собак.

Задача - создание эффективного способа лечения внезапной слепоты у собак.

Поставленная цель - повышение качества лечения заболеваний зрительного нерва у собак путем создания лекарственного депо в тканях глаза, расположенного в непосредственной близости около патологического очага.

Технический результат достигается за счет использования способа лечения заболеваний роговицы, сетчатки и зрительного нерва у собак, заключающегося в ретробульбарном введении лекарственного вещества в непосредственной близости от патологического очага, при этом в качестве лекарственного средства используют мезенхимальные стволовые клетки пуповины или плаценты, взятые после нормальных родов человека, при этом осуществляют ретробульбарное введение клеток путем инъекции 1-2 мл физиологического раствора, содержащего 0,075-0,20×10⁶ клеток/кг веса одномоментно 1-2 раза в год.

Мезенхимальные стволовые клетки пуповины или плаценты были получены в соответствии со стандартной методикой следующим образом. Образцы пуповины или плаценты человека собирали после нормальных родов на 39-40 неделе гестации. Вены пуповины и плаценты канюлировали и промывали сначала раствором Хенкса, а затем 0,1% раствором коллагеназы I типа, приготовленным на среде DMEM без сыворотки, и инкубировали при 37°С 30 мин. Затем сосуды вновь промывали раствором Хенкса, ткань подвергали непродолжительному мягкому механическому воздействию и собирали отделившиеся клетки. Полученные клетки осаждали центрифугированием. Осадок ресуспендировали в среде DMEM, содержащей 10% сыворотки, 100 ед./мл пенициллина, 100 ед./мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, 10 нг/мл базального фактора роста фибробластов ( -FGF), переносили в культуральные чашки и культивировали до формирования монослоя, сменяя среду 2 раза в неделю. При достижении монослоя клетки пересевали в соотношении 1:3.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Терапевтическая эффективность предложенного способа оценена на лечении 3 собак с атрофией зрительного нерва различного генеза. Контрольная группа - 2 собаки, получали на протяжении 2 месяцев традиционный базисный метод терапии (магнитофорез с тауфоном, солкосерил местно и внутривенно, инстилляции баларпана, корнерогеля, дерината), но выздоровление не наступало.

У собак, которым осуществляли ретробульбарное введение мезенхимальных стволовых клеток пуповины или плаценты в заявленном количестве на 5 сутки, наступила полная эпителизация роговицы, на 8-10 день - резорбция инфильтрации и купирование признаков воспаления. Через 1 месяц у больных собак роговица стала более прозрачной, острота зрения повысилась. Признаков рецидива заболевания в период наблюдения не зафиксировано.