способ прогнозирования исхода беременности при угрозе невынашивания поздних сроков

Формула изобретения

Способ прогнозирования исхода беременности при угрозе невынашивания поздних сроков путем определения в периферической венозной крови иммунокомпетентных клеток, отличающийся тем, что в сроке беременности 22-33 недели определяют относительное содержание CD62L+ нейтрофилов и при его значении, равном или более 65%, прогнозируют преждевременные роды.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования преждевременных родов у беременных женщин с угрозой невынашивания в сроке гестации 22-33 недели.

Актуальность заявленного способа определяется тем, что преждевременные роды - одна из основных причин перинатальной заболеваемости и смертности. Частота этого осложнения беременности составляет 5-12% (Сидорова И.С., Макаров И.О. Течение и ведение беременности по триместрам. - М.: ООО "Медицинское информационное агентство", 2007. - С.304; Goldenberg R. et al. The Alabama preterm birth. Prevention project // Obstet. Gynecol. - 1990. - Vol.75. - P.933-939). Развитие этой патологии приводит к высокой частоте осложнений со стороны матери: аномалиям родовой деятельности (слабость, дискоординация родовой деятельности), гипо- и атоническим кровотечениям, травматизму, инфекции; со стороны плода - инфекционным осложнениям, неврологическим нарушениям (Сидельникова В.М. Преждевременные роды. Недоношенный ребенок. - М.: ГОЭТАР-Медиа, 2006. - С.207).

Прогнозирование преждевременных родов позволит снизить частоту осложнений со стороны матери и плода.

Известен способ прогнозирования исхода беременности при угрожающих преждевременных родах, включающий исследование периферической крови беременной с 28 недель гестации, в котором до и после проведения курса сохраняющей терапии определяют количественный показатель нитрат-ионов и при его увеличении на 10% и более относительно первоначального значения прогнозируют исход беременности в виде преждевременных родов (патент № 2272574. Российская Федерация. Способ прогнозирования исхода беременности при угрожающих преждевременных родах. / Посисеева Л.В., Назаров С.Б., Назарова А.О., Кузьменко Г.Н., Воробьева Ю.С. // Изобретения. Полезные модели, 2006. - № 9).

Способ имеет недостатки:

- прогнозирование исхода беременности лишь с третьего триместра;

- необходимость обследования пациентки дважды;

Известен способ прогнозирования преждевременных родов при урогенитальной инфекции, который включает исследование цервикального канала, при этом исследуют эпителиальные клетки слизистой оболочки, в которых с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени определяют уровень экспрессии гена Toll-подобного рецептора 2 (TLR2), и при его увеличении более чем в пять раз по сравнению с его уровнем, установленным при нормально протекающей беременности, прогнозируют преждевременные роды (патент № 2334233. Российская Федерация. Способ прогнозирования преждевременных родов при урогенитальной инфекции./ Ганковская Л.В., Макаров О.В., Ковальчук Л.В., Бахарева И.В., Романовская В.В., Ганковская О.А. // Изобретения. Полезные модели. - 2008. - № 26).

Способ имеет недостатки:

- проводимое исследование связано с проведением манипуляций в области влагалища и шейки матки, что может провоцировать несвоевременное излитие околоплодных вод и преждевременные роды;

- применение способа ограничивается обследованием женщин с урогенитальной инфекцией (УГИ);

- необходимость определения лабораторных норм уровня экспрессии TLR2 в цервикальном канале беременных женщин;

- неспецифичность метода, поскольку неосложненная беременность тоже может протекать на фоне УГИ, которая в свою очередь влияет на экспрессию TLR2 в цервикальном канале.

Известен способ прогнозирования исхода беременности при угрожающих преждевременных родах путем исследования в периферической крови беременных женщин с угрозой преждевременных родов содержания CD16+ и CD3+ клеток. Вычисляют показатель их соотношения по формуле CD16+/CD3+. При значении показателей меньше или равных 0,11 прогнозируют наступление преждевременных родов (патент № 2132069. Российская Федерация. Способ прогнозирования исхода беременности при угрожающих преждевременных родах. / Крошкина Н.В., Сотникова Н.Ю., Букина Е.А., Анциферова Ю.С., Кудряшова А.В. // Изобретения. - 1999. - № 17, Ч.2. - С.407).

Данный способ был выбран нами в качестве прототипа. Однако он имеет ряд недостатков:

- способ трудоемок, т.к. требует исследования нескольких видов клеток и расчет показателя по формуле;

- точность способа 78%.

Техническим результатом является повышение точности прогнозирования преждевременных родов у беременных женщин в сроке 22-33 недели с угрозой невынашивания.

Заявляемый технический результат достигается тем, что у беременных женщин с угрозой невынашивания в сроке 22-33 недели гестации определяют относительное содержание CD62L+ нейтрофилов в периферической крови и при его значении, равном или более 65%, прогнозируют преждевременные роды с точностью 90%, чувствительностью 90% и специфичностью 90%.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать исход беременности при угрозе невынашивания в сроке гестации 22-33 недели по определению относительного содержания CD62L+ нейтрофилов в периферической крови.

По данным литературы роль CD62L+ нейтрофилов мало изученна. Известно, что относительное содержание CD62L+нейтрофилов в периферической крови повышается после проведения хирургических манипуляций за счет регулирующей роли провоспалительных цитокинов (Ball C.J., King M.R., 2011). По данным Kourtis A.P. et al. (2003) молекула CD62L является маркером генерализованной инфекции в неонатальном периоде. Изучается роль CD62L+ нейтрофилов в инициации и развитии аллергических реакций (Monteseirín J., Chacón P. et al., 2005). Существуют данные о повышении относительного содержания CD62L+ нейтрофилов в околоплодных водах при интраамниотической инфекции (Hsu C.D., Meaddough E. et al., 1998). Ранее определение CD62L+ нейтрофилов в периферической крови женщин с угрозой невынашизания в сроке 22-33 недели беременности с целью прогнозирования развития преждевременных родов не использовалось. В литературе отсутствуют данные об изменении содержания CD62L+ нейтрофилов при угрозе невынашивания беременности в зависимости от ее исхода. Установлено, что нейтрофилы как основные продуценты протеолитических молекул играют непосредственную роль в подготовке организма к родам. Известно, что молекулы CD62L определяют взаимодействие клеток с эндотелиоцитами, регулируя процессы выхода клеток из сосудистого русла в ткань (Laudanna С., 2006). Вероятно, повышение экспрессии CD62L молекул на поверхности нейтрофилов периферической крови у женщин с угрозой невынашивания в 22-33 недели беременности является одним из механизмов, определяющих усиленную миграцию нейтрофилов в ткань шейки матки непосредственно перед развязыванием родовой деятельности.

Способ осуществляется по стандартной методике следующим образом:

1. К 3 мл гепаринизированной крови из кубитальной вены добавляют 3 мл Среды 199 и выделяют обогащенную популяцию нейтрофилов стандартным методом скоростного центрифугирования в двойном градиенте плотности фиколл-верографина (Bourn A. Isolation of mononuclear cells and granulocytes from human blood and bone marrow // Scand. J. Clin. Invest. - 1968. - V.21. - N 97. - P.77).

2. Суспензию нейтрофилов дважды отмывают физраствором, доводят концентрацию клеток до 1×10⁶ кл/мл. К 0,1 мл полученной суспензии одновременно добавляют 5 мкл моноклональных антител anti-human CD62L, коньюгированных с FITC (BD Bioscience Pharmingen, США). Клетки инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, отмывают в 1 мл физраствора и фиксируют в 0,5 мл фиксирующего раствора CellFix (BD Biosciences, Belgium).

3. Определяют относительное (процентное) содержание CD62L+ клеток в нейтрофильном гейте на проточном цитометре, и при его значении, равном или более 65%, прогнозируют преждевременные роды.

Использование предлагаемого способа позволяет с высокой точностью 90% прогнозировать исход беременности у женщин при угрозе невынашивания в сроке 22-33 недели.

Отличительными признаками заявленного способа являются:

- установлен новый прогностический параметр относительного содержания CD62L+ нейтрофилов в сроке 22-33 недели беременности, при значении которого 65% или более прогнозируют развитие преждевременных родов.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами:

Пример 1. Пациентка Р., 25 лет, беременность четвертая, желанная, в зарегистрированном браке. В анамнезе 1 своевременные роды без осложнений, 2 медицинских аборта без осложнений, из экстрагенитальной патологии - хронический пиелонефрит. Течение беременности осложнилось угрозой прерывания в сроке 22 недели, по поводу чего находилась на стационарном лечении.

В сроке 22 недели было проведено обследование по заявленному способу:

Относительное содержание CD62L+ нейтрофилов составило 65%, что равно заявляемому параметру (=65%).

Заключение: Прогнозируется развитие преждевременных родов. Проводилась сохраняющая терапия с эффектом. На момент выписки признаки угрозы прерывания беременности отсутствовали.

В сроке 28 недель вновь госпитализирована в родовый блок. Диагноз: Беременность 28 недель. Головное предлежание плода. Первый период преждевременных родов. Хронический пиелонефрит вне обострения.

Начата сохраняющая терапия, без эффекта.

Родился живой недоношенный мальчик массой 930 г., ростом 34 см, оценкой по шкале Апгар 4 балла, по шкале Доунс - 6 баллов, новорожденный переведен в отделение детской реанимации.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 2. Пациентка Н., 26 лет. Беременность вторая, желанная. В анамнезе 1 медицинский аборт, без осложнений. Течение беременности осложнилось угрозой прерывания в сроке 12 недель, проводилось стационарное лечение, с эффектом. В сроке 33 недели по поводу угрозы преждевременных родов госпитализирована в отделение патологии беременности.

Было проведено обследование по заявленному способу:

Относительное содержание CD62L+ нейтрофилов составило 23%, что ниже заявляемого параметра (<65%).

Заключение: Прогнозируются роды в срок.

Проводилась сохраняющая терапия, с эффектом.

Беременность закончилась своевременными родами в 39-40 недель гестации. Родилась живая доношенная девочка, массой 3350 г, ростом 51 см, оценкой по шкале Апгар 8-9 баллов.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 3. Пациентка З., 24 лет. Беременность вторая, желанная. В анамнезе 1 медицинский аборт, без осложнений, вегетососудистая дистония. Течение беременности осложнилось угрозой прерывания в сроке 8 недель, проводилось амбулаторное лечение с эффектом. В сроке 16 недель перенесла ОРВИ. В сроке 28 недель поступила в отделение патологии беременности с угрозой преждевременных родов.

Было проведено обследование по заявленному способу:

Относительное содержание CD62L+ нейтрофилов составило 92%, что выше заявляемого параметра (>65%).

Заключение: Прогнозируется развитие преждевременных родов. Проводилась сохраняющая терапия с эффектом. На момент выписки признаки угрозы прерывания беременности отсутствовали.

В 36 недель поступила в акушерскую клинику с регулярной родовой деятельностью. Выставлен диагноз: Беременность 36 недель. Головное предлежание плода. 1 период родов. Вегетососудистая дистония.

Произошли первые преждевременные роды в 36 недель.

Родилась живая недоношенная девочка массой 2400 г, ростом 46 см, оценкой по шкале Апгар 7-8 баллов, по шкале Доунс - 2 балла. Из родильного дома новорожденная была переведена на второй этап выхаживания недоношенных детей.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Результаты исследований сведены в таблицу.

Показатель	Количество обследованных
Всего женщин	30
Истинно-положительный результат	9
Ложно-положительный результат	2
Истинно-отрицательный результат	18
Ложно-отрицательный результат	1
Итого: точность заявляемого способа - 90%
Чувствительность заявляемого способа - 90%
Специфичность заявляемого способа - 90%

Преимущества заявляемого способа:

1. Высокая точность - 90%;

2. Хорошая воспроизводимость метода;

3. Простота в интерпретации результатов обследования;

4. Способ позволяет в определенные сроки беременности (22-33 недели) прогнозировать преждевременные роды, что дает возможность профилактировать данное осложнение беременности и предотвратить возникновение как осложнений родовой деятельности, так и перинатальной патологии.