способ предпосевной обработки патологического материала для выделения l-форм микобактерий

Формула изобретения

Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения L-форм микобактерий, включающий измельчение патологического материала в ступке ножницами, выдерживание в 2%-ном растворе серной кислоты 15 мин, отмывание физиологическим раствором, растирание с кварцевым песком и фильтрование взвеси через мембраны с диаметром пор 0,2 мкм.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано для выделения L-форм микобактерий из патологического материала от животных. Способ основан на обработке патологического материала и посеве на полужидкую питательную среду.

Известен способ, при котором предпосевную обработку патологического материала проводят с применением 5%, 6%, 10% раствора серной кислоты, с последующим центрифугированием при 3000 об/мин или измельчают в ступке без центрифугирования, с экспозицией кислоты 20-30 мин, а полученную взвесь высевают на плотную питательные среду [Наставление по диагностике туберкулеза животных / МСХ РФ департамент ветеринарии. 18.11.2002 г., с.17-16; «Ветеринарная лабораторная практика» / Т.1. Москва. 1963 г., с. 279-280].

Недостатком этого способа является пагубное действие кислоты, а также концентрирование путем центрифугирования, потому что при центрифугировании происходит концентрирование не только микобактерий, но и банальной микрофлоры, что усложняет выделение культур.

Известен «Способ выделения L-форм микобактерий из проб патологического материала» [UA 39178 U, G01N 33/50, 10.02.2009]. Предпосевную обработку патологического материала проводят следующим образом: патологический материал измельчают в ступке и обрабатывают 3% раствором серной кислоты, затем материал отмывают физиологическим раствором, а полученную взвесь фильтруют через мембраны с диаметром пор 0,45 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой или Дорожковой. Недостатком этого способа является применение повышенной концентрации кислоты, а также фильтрация через фильтры с диаметром пор 0,45 мкм, через такой диаметр пор может проходить как L-формы микобактерий, так и другие виды бактерий.

Задача изобретения - повышение эффективности выделения L-форм микобактерий из патологического материала, уменьшение количества проростов посторонней микрофлоры, а также время проведения работы.

Для этого предложен способ предпосевной обработки для выделения L-форм микобактерий из патологического материала, который заключается в следующем: патологический материал измельчают в ступке ножницами и обрабатывают 2% раствором серной кислоты с последующим двухкратным отмыванием. Затем патологический материал растирают до однородной массы с кварцевым песком и добавляют стерильный физиологический раствор, полученную взвесь фильтруют через стерильные мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой или Дорожковой. Посевы культивируют в термостате при температуре 37°С.

Пример 1. Предпосевная обработка патологического материала: патологический материал измельчают в ступке ножницами, заливают 2% раствором серной кислоты, экспозиция кислоты 15 минут. Затем дважды отмывают физиологическим раствором, полученную взвесь фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой и Дорожковой.

Пример 2. Предпосевная обработка патологического материала: патологический материал измельчают в ступке ножницами, заливают 3% раствором серной кислоты, экспозиция кислоты 15 минут. Затем дважды отмывают физиологическим раствором, полученную взвесь фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой и Дорожковой.

Пример 3. Предпосевная обработка патологического материала: патологический материал измельчают в ступке ножницами, заливают 5% раствором серной кислоты, экспозиция кислоты 15 минут. Затем дважды отмывают физиологическим раствором, полученную взвесь фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой и Дорожковой.

Пример 4. Предпосевная обработка патологического материала: патологический материал измельчают в ступке ножницами, заливают 10% раствором серной кислоты, экспозиция кислоты 15 минут. Затем дважды отмывают физиологическим раствором, полученную взвесь фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой и Дорожковой.

Результаты, полученные при сравнении четырех примеров представлены в таблице 1.

Пример	Раствор кислоты	Количество проб	Выделение культур L-форм микобактерий	Количество пророста
количество	процент
1	2%	60	35	58,3%	1%
2	3%	60	20	33,3%	4%
3	5%	60	9	15%	2%
4	10%	60	0	-	0%

При предпосевной обработке патологического материала предложенным способом с применением 2% раствора серной кислоты (пример 1) выделено 35 (58,3%) культур L-форм микобактерий, тогда как рост посторонней микрофлоры отмечен только в 1% посевов.

При предпосевной обработке патологического материала предложенным способом с применением 3% раствора серной кислоты (пример 2) выделено 20 (33,3%) культур L-форм микобактерий, тогда как рост посторонней микрофлоры отмечен только в 4% посевов.

При предпосевной обработке патологического материала предложенным способом с применением 5% раствора серной кислоты (пример 3) выделено 9 (15%) культур L-форм микобактерий, тогда как рост посторонней микрофлоры отмечен только в 2% посевов.

При предпосевной обработке патологического материала предложенным способом с применением 10% раствора серной кислоты (пример 4) культуры в L-форме микобактерий и проростов не выявлены.

Результаты проведенных исследований в сравнении с прототипом: предложенный способ для выделения L-форм микобактерий из патологического материала дает возможность повысить выделение L-форм микобактерий, так как через фильтры с диаметром пор 0,2 мкм не проходят другие виды бактерий, а также снизить процент пророста посевов. Предложенный способ предпосевной обработки для выделения L-форм микобактерий из патологического материала отвечает современным требованиям при работе с заразным материалом, безопасный и эффективный при работе.

Источники информации

1. Наставление по диагностике туберкулеза животных / МСХ РФ департамент ветеринарии. 18.11.2002 г., с.17-16.

2. «Ветеринарная лабораторная практика» / Т.1. Москва 1963 г., с.279-280.

3. «Способ выделения L-форм микобактерий из проб патологического материала» (UA 39178 U, G01N 33/50, 10.02.2009).