способ прогнозирования "созревания" шейки матки

Формула изобретения

Способ прогнозирования «созревания» шейки матки после проведения традиционной медикаментозной подготовки к родам путем иммунологического исследования периферической венозной крови у женщин 38-39 недель беременности с «незрелой» шейкой матки, отличающийся тем, что определяют функциональную активность нейтрофилов методом НСТ-теста и при значениях, равных 31% или более, прогнозируют «созревание» шейки матки к моменту начала родовой деятельности, а при значении менее 31% - отсутствие «созревания» шейки матки.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования «созревания» шейки матки при доношенной беременности к моменту начала спонтанной родовой деятельности.

Актуальность предлагаемого способа определяется тем, что современные принципы подготовки к родам и их ведения должны обеспечивать рождение не только живого, но и здорового ребенка. Для эффективного начала и дальнейшего прогрессирования нормальной родовой деятельности одним из важных условий является наличие «зрелой» шейки матки. Этот критерий готовности организма матери к родам является наиболее достоверным. В современном акушерстве, с целью уменьшения степени субъективизма и удобства в практической работе, состояние шейки матки оценивают по международной классификации - шкале Е.Н.Бишопа (Чернуха Е.А. Родовой блок: руководство для врачей. - М.: Триада-Х, 2005. - С.79-80). При этом способов прогнозирования созревания шейки матки в литературе немного, что говорит об актуальности проблемы. При отсутствии биологической готовности организма беременной женщины к родам возрастает частота аномалий родовой деятельности, внутриутробной гипоксии плода, родового травматизма для матери и новорожденного, повышается частота оперативного родоразрешения, возрастает перинатальная заболеваемость и смертность. Достоверный способ прогнозирования «созревания» шейки матки поможет врачу выбрать оптимальный метод подготовки к родам в той или иной ситуации и минимизировать медикаментозную нагрузку на женщину, когда это возможно.

Ранее был предложен способ прогнозирования «созревания» шейки матки и времени наступления родов по одновременному определению в цервиковагинальном секрете содержания IL-6, IL-8, хорионического гонадотропина, длины шейки матки и величины раскрытия внутреннего зева с помощью ультразвукового исследования трансвагинальным датчиком, при этом при высоких показателях IL-6, IL-8, хорионического гонадотропина и показателях длины шейки матки менее или равных 30 мм прогнозируют «созревание» шейки матки и наступление родов в течение 7 дней (Jian L., Mu X, Wu W, Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi. Comparison study on transvaginal ultrasonographic measurement and cytokine in prediction of the cervical ripening and the onset time of term labor // 2002. - Vol.37 (12). - P.708-711.

Способ имеет ряд недостатков:

1. Определение заявленных показателей в цервикальной слизи является дорогостоящим, трудоемким и требует стандартизации;

2. Определение цитокинов и хорионического гонадотропина обычно проводится методом ИФА, который имеет плохую воспроизводимость;

3. Одновременное проведение ультразвукового обследования и изучение концентрации в цервикальной слизи цитокинов затрудняет интерпретацию результатов;

4. Точность способа не известна.

Известен способ прогнозирования «созревания» шейки матки, сущность которого заключается в том, что у беременных в 38-39 недель гестации в периферической крови определяют концентрацию гликоделина, суммарную антиоксидантную активность крови (АОА), активность креатинфосфокиназы (КФК) и концентрацию калия. На основании полученных данных рассчитывают дискриминантную функцию Y. При значении Y<0 прогнозируют «созревание» шейки матки, а при значении Y>0 - отсутствие «созревания» шейки матки к 40 неделям гестации после проведения традиционной медикаментозной подготовки к родам (Патент № 2360249. Российская Федерация. Способ прогнозирования «созревания» шейки матки / Л.В.Посисеева, С.Б.Назаров, А.О.Назарова, О.Г.Ситникова, И.А.Панова, Г.Н.Кузьменко, И.Г.Попова, О.В.Панова, И.Г.Парыгина // Изобретения. Полезные модели. - 2009. - № 18).

Недостатки способа:

1. Для выполнения способа требуются дорогостоящие реактивы;

2. Способ является трудоемким, т.к. требует одновременного определения нескольких показателей.

Наиболее близким по техническому решению к заявляемому способу является способ прогнозирования «созревания» шейки матки путем определения в периферической крови в 38-39 недель гестации относительного содержания CD49e позитивных нейтрофилов, и при его значении, равном 24,6% или более, прогнозируют «созревание» шейки матки, а при значении менее 24,6% - отсутствие «созревания» шейки матки к 40 неделям гестации после проведения традиционной медикаментозной подготовки к родам (Патент № 2383022. Российская Федерация. Способ прогнозирования «созревания» шейки матки / Л.В.Посисеева, Н.Ю.Сотникова, Н.К.Дорофеева, И.А.Панова, Ю.С.Анциферова // Изобретения. Полезные модели. - 2010. - № 6). Данный способ выбран нами в качестве прототипа.

Однако этот способ имеет ряд недостатков:

1. Для выполнения данной методики необходимо дорогостоящее оборудование - проточный цитометр и наличие моноклональных антител.

2. Метод обладает более низкой специфичностью и точностью (точность способа 82%).

Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе.

Техническим решением заявляемого способа является повышение точности прогнозирования «созревания» шейки матки. Заявленный технический результат достигается тем, что определяют функциональную активность нейтрофилов периферической крови в 38-39 недель беременности методом НСТ-теста и при значениях, равных 31% или более, прогнозируют «созревание» шейки матки к моменту начала родовой деятельности, а при значении менее 31% - отсутствие «созревания» шейки матки с точностью 87,5%.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать «созревание» шейки матки при доношенной беременности по определению функциональной активности нейтрофилов в периферической крови женщин.

Определение функциональной активности нейтрофилов методом восстановления нитросинего тетразолия до диформазана (НСТ-тест) применяется во многих областях медицины.

Определение функциональной активности нейтрофилов методом НСТ-теста широко используется в пульмонологии для дифференциальной диагностики круглых теней в легком у больных хронической обструктивной болезнью легких (Патент № 2400149. Российская Федерация. Способ дифференциальной диагностики круглых теней в легком у больных хронической обструктивной болезнью легких / С.Ф.Афлятунова, Х.Х.Ганцева, Д.М.Габитова // Изобретения. Полезные модели. - 2010 - № 27); в случае превышения значения показателей биоцидной активности нейтрофилов до 19,3% диагностируют туберкулезную инфекцию (Патент № 2399055. Российская Федерация. Способ диагностики туберкулезной инфекции / Т.Е.Тюлькова, А.С.Корначев, Ю.П.Чугаев, Э.А.Кашуба, Л.Б.Козлов // Изобретения. Полезные модели. - 2010 - № 25). В общей хирургии при определении относительного количества формазан-позитивных клеток - нейтрофильных гранулоцитов периферической крови выше 18% определяют высокую степень риска развития генерализованных осложнений (Патент № 2393771. Российская Федерация. Способ прогнозирования развития генерализованных осложнений при остром деструктивном панкреатите / И.В.Нестерова, И.Н.Швыдченко, В.А.Роменская, Е.В.Фомичева, С.В.Синьков // Изобретения. Полезные модели. - 2010 - № 19). Известно об определении функциональной активности нейтрофилов методом НСТ-теста в онкологии, дерматовенерологии и травматологии. В гинекологии определяют спонтанную НСТ-активность нейтрофилов после их инкубации с ПАМГ-2 и при показателях ее 24% и более диагностируют наружный генитальный эндометриоз (Патент № 2164687. Российская Федерация. Способ диагностики наружного генитального эндометриоза / Л.В.Посисеева, Н.Ю.Сотникова, А.Л.Шор, Ю.С.Анциферова // Изобретения. Полезные модели. - 2001 - № 9). В акушерстве разработан метод определения индекса функционального резерва нейтрофилов у женщин в 38-39 недель гестации, позволяющий прогнозировать развитие аномалий родовой деятельности (Патент № 2204139. Российская Федерация. Способ прогнозирования развития аномалий родовой деятельности у женщин с гестозом / Н.В.Крошкина, И.А.Панова, Н.Ю.Сотникова, Н.Р.Тихомирова // Изобретения. Полезные модели. - 2003 - № 13).

Для прогнозирования «созревания» шейки матки этот показатель ранее не применяли.

Перед родами в шейке матки усиливается лейкоцитарная инфильтрация, преимущественно нейтрофильная. По функциональной активности нейтрофилы цервикальной слизи превосходят гранулоциты других секретов гениталий (Абрамовских О.С. Показатели функциональной активности нейтрофилов при патологии шейки матки, ассоциированной с папилломовирусной инфекцией. // Медицинская иммунология. - 2010. - Т.12, № 4-5. - С.409-412). Известно, что в течение секунд после активации, нейтрофилы способны активно поглощать кислород и продуцировать активные формы кислорода, что позволяет нейтрофилам решать чисто эффекторные задачи, нарабатывая комплекс молекул, атакующих объекты фагоцитоза и внеклеточные субстраты (Маянский А.Н. НАДФН-оксидаза нейтрофилов: активация и регуляция // Цитология и воспаление. - 2007. - Т.6, № 3. - С.3-11). Субстратами в данном случае будут коллагеновые волокна шейки матки, расщепление которых приведет к «созреванию» шейки матки. Для оценки функциональной активности нейтрофилов мы предлагаем использовать цитохимический метод бессубстратного восстановления нитросинего тетразолия до диформазана, т.к. этот процесс так же связан с поглощением кислорода и переводом его в супероксидный анион. НСТ-тест дает возможность судить о фагоцитарной и метаболической функции нейтрофилов по образованию в цитоплазме гранул формазана. При недостаточной инфильтрации шейки матки нейтрофилами и снижении их функциональной активности не происходит достаточного «созревания» шейки матки, несмотря на медикаментозную подготовку.

Способ осуществляется по стандартной методике следующим образом:

1. К 3 мл гепаринизированной крови из кубитальной вены добавляют 3 мл Среды 199 и выделяют обогащенную популяцию нейтрофилов стандартным методом скоростного центрифугирования со скоростью 1500 об/мин в течение 45 минут в двойном градиенте плотности фиколл-верографина (Boum A. Isolation of mononuclear cells and granulocytes from human blood and bone marrow // Scand. J. Clin. Invest. - 1968. - Vol.21, № 97. - P.77.).

2. Клетки выделенных нейтрофилов отмывают и доводят концентрацию до 2×10⁶ кл/мл. К 0,1 мл суспензии клеток добавляют 0,05 мл 2% нитросинего тетразолия и 0,05 мл фосфатного буфера PBS. Клетки с красителем инкубируют 30 минут в термостате при 37°C.

3. Взвесь клеток фиксируют 5 сек в 0,05 мл 3% глютарового альдегида и делают мазки на предметное стекло. Мазки после просушивания фиксируют 96% этиловым спиртом и окрашивают 0,2% раствором нейтрального красного.

4. Методом светового микроскопирования в мазках определяют процент нейтрофилов, восстановивших нитросиний тетразолий до фиолетовых гранул формазана.

Использование предлагаемого способа позволяет с высокой точностью 87,5% прогнозировать «созревание» шейки матки.

Отличительными признаками метода являются: установлен прогностический параметр функциональной активности нейтрофилов методом НСТ-теста, при значении которого 31% или более, прогнозируют «созревание» шейки матки к моменту начала родовой деятельности, а при значении менее 31% - отсутствие «созревания» шейки матки.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами:

Пример 1.

Беременная Л., 25 лет, первобеременная, первородящая. Беременность осложнилась угрозой прерывания в 1-ом триместре. При поступлении на дородовую госпитализацию поставлен диагноз: Беременность 38-39 недель, головное предлежание плода. Миопия средней степени. НЦД по смешенному типу. При влагалищном исследовании шейка матки оценена по шкале Бишопа как «незрелая».

У женщины по заявленному способу определяют функциональную активность нейтрофилов в периферической венозной крови. Функциональная активность нейтрофилов - 32%, что указывает на «созревание» шейки матки к моменту родов.

Проведен курс традиционной медикаментозной подготовки к родам. При влагалищном исследовании перед родами шейка матки оценена по шкале Бишопа как «зрелая». Беременность завершилась родами в 40-41 неделю через естественные родовые пути, без осложнений. Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 2.

Беременная А., 31 год, первобеременная, первородящая. Беременность осложнилась во 2-ом триместре перенесенной острой вирусной инфекцией, плацентарной недостаточностью и анемией в 3-ем триместре. При поступлении на дородовую госпитализацию поставлен диагноз: Беременность 38-39 недель, головное предлежание плода. Плацентарная недостаточность. Анемия I степени. Хронический гайморит, ремиссия. При влагалищном исследовании шейка матки оценена по шкале Бишопа как «незрелая».

У женщины по заявленному способу определяют функциональную активность нейтрофилов в периферической венозной крови. Функциональная активность нейтрофилов - 30%, что указывает на отсутствие «созревания» шейки матки к моменту родов.

Проведен курс традиционной медикаментозной подготовки к родам. При влагалищном исследовании в 40 недель гестации шейка матки оценена по шкале Бишопа как «незрелая». В связи с отсутствием готовности организма к родам в 41 неделю гестации, дородовым излитием околоплодных вод, отсутствием эффекта от родовозбуждения женщина была родоразрешена путем операции кесарево сечение в экстренном порядке. Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 3.

Беременная Б., 23 года, первобеременная, первородящая. Беременность осложнилась угрозой прерывания в 1-ом и 2-ом триместре, отеками беременных в 3-ем триместре. При поступлении на дородовую госпитализацию поставлен диагноз: Беременность 38 недель, головное предлежание плода. Отеки беременных. НЦД по гипотоническому типу. При влагалищном исследовании шейка матки оценена по шкале Бишопа как «незрелая».

У женщины по заявленному способу определяют функциональную активность нейтрофилов в периферической венозной крови. Функциональная активность нейтрофилов - 31%, что указывает на «созревание» шейки матки к моменту родов.

Проведен курс традиционной медикаментозной подготовки к родам. При влагалищном исследовании перед родами шейка матки оценена по шкале Бишопа как «зрелая». Беременность завершилась родами через естественные родовые пути в 40 недель гестации, без осложнений. Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Указанным способом обследовано 32 женщины. Данные исследований приведены в таблице 1.

Таблица 1
Показатель	Количество обследованных
Всего женщин	32
истинно-положительный результат	18
ложно-положительный результат	2
истинно-отрицательный результат	10
ложно-отрицательный результат	2

Итого:

точность заявляемого способа - 87,5%;

чувствительность заявляемого способа - 90,0%;

специфичность заявляемого способа - 83,3%.

Преимущества заявляемого способа:

1. Высокая точность - 87,5%, специфичность - 83,3%.

2. Метод исследования относится к тестам первого уровня и не требует дополнительной подготовки специалистов.

3. Способ не является трудоемким, на его проведение требуется 2 часа.

4. Дешевизна способа.

5. Способ расширяет арсенал диагностических возможностей прогнозирования «созревания» шейки матки и позволяет корректировать медикаментозную нагрузку при подготовке женщины к родам.