способ диагностики опухолей костной системы

Формула изобретения

Способ диагностики опухолей костной системы, характеризующийся тем, что после клинического обследования осуществляют взятие венозной крови, готовят образцы проб сыворотки крови, исследуют полученные образцы методом твердофазного иммуноферментного анализа ИФА на планшетах, спектрофотометрически осуществляют определение количественного значения уровня неоптерина в сыворотке крови и при значении выше 2,6 нг/мл до 7,0 диагностируют доброкачественный опухолевый процесс, при значении выше 7,1 нг/мл - злокачественный опухолевый процесс.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно онкологии, травматологии, ортопедии, и может быть использовано при диагностике злокачественных новообразований среди лиц с доброкачественной патологией и злокачественными опухолями костной системы.

В структуре причин смертности населения по России и в мире онкологическая патология занимает 3-е место после сердечно-сосудистых заболеваний и травм. Ежегодно в стране более 120 тысяч человек признаются инвалидами по этой причине, что свидетельствует о чрезвычайно высокой значимости ранней диагностики, профилактики и лечения этих заболеваний.

Известен способ диагностики злокачественных опухолевых процессов опорно-двигательного аппарата [патент RU на изобретение № 2323685]. Проводят внутривенное введение ¹⁹⁹ Tl-хлорида, последующую в раннюю фазу планарную сцинтиграфию через 20 минут и в отсроченную фазу через 180 минут после инъекции, визуально определяют область повышенного накопления маркера, количественную оценку его аккумуляции в патологическом очаге в раннюю и отсроченную фазы исследования, вычисляют индекс ретенции RI, равный DR/ER, и при наличии не менее двух из трех следующих признаков: RI<-0,047ER+0,979 в раннюю и отсроченную фазы исследования, большей четкости контуров участка гиперфиксации маркера в раннюю фазу исследования по сравнению с отсроченной, однородности структуры участка гиперфиксации маркера в отсроченную фазу исследования диагностируют неспецифический воспалительный процесс, а при наличии не менее двух из трех признаков, таких как RI>-0,047ER+0,979 в раннюю и отсроченную фазы исследования, меньшей четкости контуров участка гиперфиксации маркера в раннюю фазу исследования по сравнению с отсроченной или существенно неизмененной в зависимости от фазы исследования, неоднородной структуре участка гиперфиксации маркера в отсроченную фазу исследования, диагностируют злокачественный опухолевый процесс.

Однако данный способ диагностики достаточно продолжителен по времени его проведения, что является ограничением к использованию его в работе с большим количеством больных.

Известен также способ диагностики опухолей костной системы, в частности хондром [патент RU на изобретение № 2275851]. В данном способе проводят магнитно-резонансную томографию, анализ и оценку нативных Т1 ВИ и Т2 ВИ. При этом оценивают нативные Т1 ВИ в импульсной последовательности (ИП) SE и Т2 ВИ в ИП GRE. При визуальном выявлении на Т1 ВИ в ИП SE гипоинтенсивной области, а на Т2 ВИ в ИП GRE гиперинтенсивной области определяют озлокачествление хондромы.

Известен также способ диагностики множественной миеломы и метастазов рака в кости [патент RU на изобретение № 2210773]. Проводят исследование сыворотки крови, при этом проводят инфракрасную спектрометрию сыворотки крови, определяют коэффициенты пропускания в девяти поддиапазонах инфракрасного спектра электромагнитного излучения: 3500-3200 см^-1 , 3085-2832 см^-1, 2120-1800 см^-1, 1710-1610 см^-1, 1600-1535 см^-1, 1543-1425 см ^-1, 1430-1210 см^-1, 1127-1057 см^-1 , 1067-930 см^-1 в течение 1 мин через 1 с, высчитывают критерий Маханалобиса и при его значении менее 20 усл.ед. диагностируют множественную миелому, а при значении от 25,5 до 33, 3 усл.ед. - метастазы рака в кости.

Однако использование данного способа диагностики, как и предшествующего ему, требует дорогостоящего оборудования.

Известен также способ диагностики метастатического поражения скелета [Тартратрезистентная кислая фосфатаза - биохимический критерий костного мета-стазирования. /Н.В.Любимова [и др.] // Сибирский онкологический журнал. 2004. № 4. С.22-25]. В данном способе используют в качестве маркера определение уровня тартратрезистентной кислой фосфатазы 5b.

Известен также способ диагностики злокачественных новообразований [Некоторые закономерности изменения уровня неоптерина у пациентов со злокачественными опухолями. / Б.С.Хышиктуев [и др.], информационные материалы прилагаются, сайт: http://www.medacadem.chita.ru/zmv/index.php?option=com_phoca]. характеризующийся изучением уровня неоптерина. Изменение концентрации неоптерина в крови отражает совместное действие различных цитокинов на популяцию моноцитов/макрофагов, стимулированных -интерфероном. Повышение уровня неоптерина происходит при многих онкологических заболеваниях - раке поджелудочной железы, легких, печени, яичников, молочной железы.

Однако данный способ не предназначен для использования при осуществлении диагностики опухолей костной системы.

Задачей заявляемого изобретения является повышение простоты осуществления способа диагностики опухолей костной системы при сохранении высокой точности результата.

Сущность заявляемого изобретения характеризуется тем, что после клинического обследования осуществляют взятие венозной крови, готовят образцы проб сыворотки крови, исследуют полученные образцы методом твердофазного иммуноферментного анализа ИФА на планшетах, спектрофотометрически производят определение количественного значения уровня неоптерина в сыворотке крови и при значении выше 2,6 до 7,0 нг/мл диагностируют доброкачественный опухолевый процесс, при значении выше 7,1 нг/мл - злокачественный опухолевый процесс.

Технический результат заявляемого изобретения.

Использование данного способа позволяет повысить точность дифференциальной и ранней диагностики злокачественных новообразований костной системы. Простота его осуществления за счет проведения исследования по крови и малые затраты по времени на его проведение исключает возможность возникновения травматичных ситуаций и позволяет использовать его в работе с большим количеством больных.

Способ техничен и технологичен с первой манипуляции до, практически, последней операции - обработки полученных данных, поскольку все манипуляции: забор крови, выбор и приготовление проб, воздействие реактивами на пробы, порядок действий в заявляемом способе - признаки технически осуществляемого действия.

С 2005 г.по 2010 г. в рамках реализации Национального проекта «Здоровье» было выделено финансирование на оснащение поликлинических учреждений оборудованием и наборами реагентов для проведения иммуноферментного анализа. В связи с этим описанный в данной заявке способ диагностики опухолей костной системы является доступным для использования не только в специализированных учреждениях, но и в муниципальных поликлиниках.

Подробное описание способа.

Первоначально осуществляют клиническое обследование больных с помощью стандартных методов, т.е. с оценкой жалоб и соматического статуса, детальным сбором анамнеза с выявлением факторов, влияющих на имунный статус, и проведением обзорной рентгенографии исследуемой части скелета не менее чем в двух взаимоперпендикулярных проекциях. При необходимости результаты рентгенологического исследования дополняют прицельными снимками и томограммами.

После клинического обследования у больных с подозрением на опухоль кости производят взятие образца венозной крови в пробирку 5 мл. С помощью центрифугирования получают сыворотку крови.

Определяют количественное значение уровня неоптерина в полученной сыворотке крови путем проведения иммуноферментного твердофазного анализа. Вносят в лунки планшета с помощью автоматической пипетки по 25 мкл стандартов неоптерина, контролей, приготовленных с использованием в качестве матрикса сыворотки человека, содержащей консервант тимеросал, и образцов сыворотки крови больных. В лунки планшета, предназначенные для измерения неспецифического связывания вносят 25 мкл нулевого стандарта и 100 мкл раствора для проведения конъюгата, представляющего собой фосфатно-солевой буферный раствор, содержащий сыворотку человека, сыворотку кролика и тимеросал в качестве консерванта. Добавляют в каждую лунку, кроме лунки для измерения неспецифического связывания, по 100 мкл разведенного конъюгата фермента неоптерина с пероксидазой хрена. Закрывают планшет и инкубируют в течение 2 часов на ротационном горизонтальном шейкере при комнатной температуре со скоростью порядка 200 об/мин. Вытряхивают жидкость из лунок, остатки жидкости удаляют, постукивая перевернутым планшетом по листу впитывающей бумаги. Промывают планшет 3 раза разведенным 1:10 дистилированной водой фосфатно-солевым буферным раствором, содержащим Твин. Повторно удаляют остатки жидкости из лунок, постукивая перевернутым планшетом по месту впитывающей бумаги. Добавляют во все лунки по 100 мкл хромогенного субстрата, представляющего собой раствор 3,3 ,5,5 -тетраметилбензидина, и инкубируют в течение 30 минут на ротационном горизонтальном шейкере при комнатной температуре в защищенном от света месте. Вносят во все лунки для остановки ферментативной реакции по 100 мкл стоп-реагента в виде раствора разбавленной серной кислоты. Измеряют с помощью планшетного спектрофотометра оптическую плотность раствора в лунках при длине 450 нм и расчитывают количественное значение уровня неоптерина в сыворотке крови больного, используя, например, автоматическую обработку данных. При значении выше 2,6 до 7,0 нг/мл диагностируют доброкачественный опухолевый процесс, при значении выше 7,1 нг/мл - злокачественный опухолевый процесс.

Продолжительность способа составляет порядка 3 часов. Одновременно может быть обработано до 48 образцов сыворотки крови больных.

Пример 1

Больной К., 26 лет поступил в стационар ортопедического отделения с жалобами на боль, увеличение объема, нарушение функции правого коленного сустава, хромоту. После клинического обследования выявлено подозрение на наличие новообразования. У больного было взято 5 мл венозной крови. Произвели определение количественного значения неоптерина в сыворотке крови по описанному в данной заявке способу ИФА-методом на ридере «Anthos 2020» (Австрия) с помощью наборов «Bender MedSystems» (Австрия). Оно составило 5,8 нг/мл. Больному диагностировали доброкачественный опухолевый процесс. Диагноз доброкачественной опухоли у больного был подтвержден морфологически.

Пример 2

Больная М., 32 лет поступила в стационар ортопедического отделения с жалобами на боль, нарушение функции правого тазобедренного сустава. После клинического обследования выявлено подозрение на наличие новообразования. У больной было взято 5 мл венозной крови. Произвели определение количественного значения неоптерина в сыворотке крови по описанному в данной заявке способу ИФА-методом на ридере «Anthos 2020» (Австрия) с помощью наборов «Bender MedSystems» (Австрия). Оно составило 7,5 нг/мл. Больной диагностировали злокачественный опухолевый процесс. Диагноз злокачественной опухоли у больной был подтвержден морфологически.