способ коррекции l-name индуцированного дефицита оксида азота l-норвалином в эксперименте
Классы МПК: | A61K31/197 амино- и карбоксильная группы присоединены к одной и той же ациклической углеродной цепи, например гамма-аминомасляная кислота (ГАМК), бета-аланин, эпсилон-аминокапроновая кислота, пантотеновая кислота A61K31/198 альфа-аминокислоты, например аланин, этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТК) A61P9/08 вазодилататоры для широких показаний |
Автор(ы): | Покровский Михаил Владимирович (RU), Покровская Татьяна Григорьевна (RU), Цепелева Светлана Александровна (RU), Цепелев Василий Юрьевич (RU), Белоус Александр Сергеевич (RU), Корокин Михаил Викторович (RU), Гудырев Олег Сергеевич (RU), Гуреев Владимир Владимирович (RU), Лопатин Дмитрий Владимирович (RU), Корокина Лилия Викторовна (RU), Титарева Людмила Викторовна (RU), Лосенок Полина Игоревна (RU), Денисюк Татьяна Алексеевна (RU), Полянская Оксана Сергеевна (RU) |
Патентообладатель(и): | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (RU) |
Приоритеты: |
подача заявки:
2010-08-02 публикация патента:
10.05.2012 |
Изобретение относится к области медицины. Способ коррекции L-NAME индуцированного дефицита оксида азота заключается в том, что на фоне его моделирования белым крысам самцам линии Wistar с индуцированным дефицитом оксида азота, внутрижелудочно вводят L-норвалин 10 мг/кг ежедневно, в течение 7 суток. Способ позволяет оценить динамику коррекции дефицита оксида азота на данной модели при введении L-норвалина. 2 табл., 1 пр.
Формула изобретения
Способ коррекции L-NAME индуцированного дефицита оксида азота, отличающийся тем, что на фоне его моделирования белым крысам самцам линии Wistar с индуцированным дефицитом оксида азота, внутрижелудочно вводят L-норвалин 10 мг/кг ежедневно, в течение 7 суток.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.
Наиболее близким к заявленному решению является способ вазорелаксирующего воздействия с помощью L-норвалина, относящегося к неселективным ингибиторам аргиназы, изученный in vitro, описанный N.N.Huynh, E.E.Harris, J.F.Chin-Dusting and K.L.Andrews «The vascular effects of different arginase inhibitors in rat isolated aorta and mesenteric arteries», British Journal of Pharmacology, 2009, № 156, стр.84-93, который заключается в увеличении биодоступности оксида азота в эндотелии аорты и мезентериальных артерий крыс за счет повышения содержания внутриклеточного L-аргинина, связанного с торможением активности конкурирующего с NO-синтазой фермента аргиназы за общий субстрат.
Основным недостатком способа является отсутствие оценки функционального состояния сосудистого русла в условиях целостного организма при моделировании дефицита оксида азота в эксперименте.
Техническим результатом изобретения является способ коррекции L-NAME индуцированного дефицита оксида азота in vivo, включающий использование L-норвалина.
Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования дефицита оксида азота в эксперименте проводится его коррекция путем ежедневного внутрижелудочного введения L-норвалина в дозе 10 мг/кг в течение 7 дней.
СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ
Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Biopac". Функциональные пробы: эндотелийзависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелийнезависимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропрусеида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.
При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.
ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ
Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 сек приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных: для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 с развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 с после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 сек. Блокада NO-синтазы с помощью длительного, ежедневного, в течение 7-суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.
Одновременное введение L-NAME и L-норвалина не приводило к снижению показателей исходных значений АД (таблица 1).
Таблица 1 | ||||
Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции дефицита оксида азота L-норвалином. | ||||
Группы животных | Функциональные пробы | САД, мм рт.ст. | ДАД, мм рт.ст. | ЧСС, уд. в мин |
Интактные | Исходные | 137,7±3,7 | 101,9±4,3 | 420,0±9,0 |
ЭЗВ с АХ | 84,3±4,5 | 38,7±2,8 | 416,0±14,0 | |
ЭНЗВ с НП | 83,0±3,7 | 42,1±4,4 | 415,0±10,0 | |
Получавшие L-NAME (25 мг/кг) | Исходные | 190,3±6,7* | 145,0±3,9* | 428,0±11 |
ЭЗВ с АХ | 110,6±5,2* | 82,8±6,6* | 426,0±14,0 | |
ЭНЗВ с НП | 88,7±4,7 | 50,8±4,2 | 426,0±13,0 | |
L-NAME (25 мг/кг) + L-норвалин (10 мг/кг) | Исходные | 180±4,7* | 144,6±10,2* | 371,4±11 |
ЭЗВ с АХ | 106,7±4,9* | 56,1±1,8* | 344,2±15 | |
ЭНЗВ с НП | 129,3±5,1** | 64,6±2,5** | 358,3±12 | |
* - p<0,05 в сравнении с группой интактных; ** - p<0,05 в сравнении с группой L-NAME |
Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привело нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.
Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.
Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение, как показатель коррекции дефицита оксида азота.
Таблица 2 | |||||
Показатели, отражающие коррекцию дефицита оксида азота на фоне введения L-NAME L-норвалином. | |||||
Группы животных | Функциональные пробы | Прирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.) | Время сосудистой реакции (сек.) | Площадь сосудистой реакции (усл. ед) | Отношение площадей сосудистой реакции АХ к НП |
Интактные | АХ | 59,9±2,9 | 42,2±0,8 | 1268,0±74,8 | 1,1±0,1 |
НП | 61,0±3,0 | 45,1±1,0 | 1375,3±93,7 | ||
L-NAME | АХ | 68,0±4,1 | 20,0±1,4 | 695,3±87,6* | |
НП | 98,0±2,0 | 67,4±1,4 | 3322,7±116,7* | 5,4±0,6* | |
L-NAME + L-норвалин | АХ | 83,4±3,5* | 32,3±2,2* | 1360,6±126,9* | |
НП | 78,0±7,0** | 70,5±4,7** | 2827,2±429,1** | 2,1±0,2** | |
* - p<0,05 в сравнении с группой интактных, ** - p<0,05 в сравнении с группой L-NAME |
Таким ооразом, полученные результаты позволяют констатировать коррекцию дефицита оксида азота L-норвалином на фоне введения L-NAME.
Класс A61K31/197 амино- и карбоксильная группы присоединены к одной и той же ациклической углеродной цепи, например гамма-аминомасляная кислота (ГАМК), бета-аланин, эпсилон-аминокапроновая кислота, пантотеновая кислота
Класс A61K31/198 альфа-аминокислоты, например аланин, этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТК)
Класс A61P9/08 вазодилататоры для широких показаний