лечебно-косметическое средство

Формула изобретения

Лечебно-косметическое средство, содержащее биологически активные вещества, отличающееся тем, что оно в свой состав включает жизнеспособные бактерии штамма Bacillus subtilis 534 и основу, состоящую из эмульгатора Т₂, вазелина, подсолнечного масла и воды, при этом соотношение компонентов составляет, вес.%:

Штамм Bacillus subtilis 534	10-1015 КОЕ в 100 г
Эмульгатор Т2	6-10
Масло подсолнечное	8-15
Вазелин	25-36
Натрия хлорид	0,2-7
Вода	остальное

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и косметологии, к способам и средствам лечения гнойных ран, пролежней, ожогов, трофических язв, герпетического и кандидозного поражения кожи и слизистых, а также для ухода за сухой кожей.

В настоящее время для лечения гнойных ран, ожоговых ран, пролежней, трофических язв используется большое число отвечающих современным требованиям многокомпонентных мазей (Б.М.Даценко с соавт., 1984; Л.А.Блатун, 2002; F.W.Peter et al., 2002). Они созданы на гидрофильной основе, оказывают антимикробное, дегидратирующее, противовоспалительное и неполитическое действие. Например, это мази «Левосин» (левомицетин, сульфадиметоксин, метилурацил, тримекаин, полиэтилеигликоль с молекулярным весом 400 и 1500); «Левомеколь» (левомицетин, метилурацил, полиэтиленгликоль с молекулярным весом 400 и 1500); «Диоксиколь» (диоксидин, метилурацил, тримекаин, полиэтиленгликоль с молекулярным весом 400 и 1500). К сожалению, данные мази вызывают такие же нежелательные побочные осложнения, как антибиотики и антисептики: аллергию, токсические реакции, дисбактериозы за счет подавление нормальной микрофлоры кожи и слизистых. Кроме того, эти мази убивают в ране бактерии-сапрофиты, которые, по последним данным, в области повреждения могут оказывать выраженное лечебное действие. Данные препараты неэффективны при вирусных инфекциях, необходимо дополнительно использовать мази с ацикловиром, например «Зовиракс». Невозможно их применение в косметологии. В современной практике используются мази без антисептиков, содержащие биологически активные вещества. Так, мазь «Солкосерил» производства фармацевтической компанией АЛКАЛОИД (Македония) в сотрудничестве с Solco Basel AG (Швейцария) включает гидрофильную основу и депротеинизированный гемодиализах из крови телят. Однако данное лекарственное средство не подавляет рост бактерий, вирусов и грибов, возбудителей инфекции. До настоящего времени не разработаны мази, убивающие нежелательные микроорганизмы, но в то же время не вызывающие дисбактериозов кожи, слизистых и полостей.

В качестве прототипа выбрано изобретение RU 2185840. Был предложен лекарственный препарат для профилактики и лечения инфекционных заболеваний, содержащий в качестве активного начала микробную массу бактерий, фармацевтические целевые добавки и биологически активные ингредиенты, отличающийся тем, что он в качестве микробной массы содержит бактерии и споры рода Bacillus, дополнительно содержит основу, препятствующие микробной контаминации. К сожалению, сама по себе биологически нейтральная основа из вазелина, ланолина, эмульгатора не может предупреждать контаминацию посторонними бактериями. Добавленные вещества, обладающие антисептическими действиями (лизоцим, метронидазол, цитокины, витамины и др.), способствуют гибели бактерий. Однако описанные штаммы бактерий сенной палочки очень чувствительны к антибиотикам и антисептикам и погибают ранее, чем контаминирующая микрофлора. Попутно можно отметить, что бифидобактерии и лактобактерии являются неклостридиальными анаэробами, для которых кислород является ядом. В связи с этим в предложенном лекарстве они могут оставаться живыми только в течение очень короткого времени. В то же время для лекарства важным является стабильность входящих в него действующих компонентов.

Новизной исследования является разработанная возможность создания мази, содержащей кроме основы живые бактерии штамма Bacillus subtilis 534. В данной мази решены задачи сохранения жизнеспособности микроорганизмов в мази (не менее года) и в ране, а также обеспечения длительного контакта действующего вещества (живых, а не погибших бактерий) в области ран, кожи, слизистых. Штамм Bacillus subtilis 534 является основой лекарственного препарата споробактерина жидкого (патент на изобретение (RU 1723116). Это взвесь бактерий на 7% растворе натрия хлорида. Споробактерин жидкий по лицензии Министерства здравоохранения и социального развития выпускается и реализуется на территории Российской Федерации (регистрационное удостоверение № Р № 000792/01). Он предназначен для профилактики, лечения хирургической инфекции и дисбактериозов различной этиологии. Споробактерин принимается больными через рот. Попытки местного применения препарата были малоуспешными, так как бактерии быстро элиминировались из очага.

Существенным отличием предложенного лечебно-косметического средства, содержащего биологически активные вещества, является то, что она содержит жизнеспособные бактерии штамма Bacillus subtilis 534 и основу, состоящую из эмульгатора Т₂ , вазелина, подсолнечного масла и воды, при этом соотношение компонентом составляет в вес.%:

Штамм Bacillus subtilis 534	10-1015 КОЕ в 100 г
Эмульгатор Т2	6-10
Масло подсолнечное	8-15
Вазелин	25-36
Натрия хлорид	0,2-7
Вода	Остальное

Впервые установлено, что подсолнечное масло способствует увеличению сроков сохранения жизнеспособности вегетативных клеток и спор бактерий сенной палочки. Обнаружено, что при применении предложенного средства (мази) лечебный эффект намного больше, чем сумма лечебных эффектов отдельных компонентов. Скорость заживления гнойных ран намного выше, чем при использовании мази «Солкосерил». Установлено, что в предложенных составах мази бактерии штамма Bacillus subtilis 534 при хранении при температуре до +10°С сохраняют свою жизнеспособность и биологическую активность в течение двух лет и более.

Увеличение числа жизнеспособных бактерий штамма Bacillus subtilis 534 с 10 до 10¹⁵ КОЕ на 100 г лечебно-косметического средства (мази) умеренно увеличивает скорости очищения от некроза ран, пролежней и их эпителизации. При этом также улучшается качество лечения герпеса, кандидоза кожи и слизистых. Доза бактерий менее 10 КОЕ на 100 г мази нецелесообразна из-за резкого снижения эффекта лечения, а увеличение дозы более 10¹⁵ КОЕ на 100 г не увеличивает степень положительного действия мази. При внесении малого числа бактерий сенной палочки (10 КОЕ на 100 г) лечебный эффект может быть обусловлен свойствами самого штамма, когда живые бактерии сенной палочки могут размножаться в ране до определенного предела. Осуществляется положительное влияние на ткани за счет продукции биологически активных веществ, но не возникает нежелательных побочных реакций.

Увеличение содержания вазелина, эмульгатора позволяет получать мазь большей плотности, а повышение процентного содержания растительного масла, напротив, приводит к созданию более мягкой мази. Повышение количества натрия хлорида в мази увеличивает дегитратирующий эффект в гнойной ране.

Для иллюстрации приводим следующие примеры:

Пример 1. Изготовлена мазь следующего состава: штамм Bacillus subtilis 534 - 10±2 КОЕ в 100 г, вазелин - 30%, эмульгатор Т₂ - 10%, натрия хлорид - 7%, подсолнечное масло - 8%, вода подготовленная - остальное. Она расфасована по 15 г в стерильные пластиковые баночки с крышкой и контролем вскрытия. При контроле после изготовления трех образцов в 100 г мази обнаружено 9-12 КОЕ бактерий сенной палочки штамма 534. Все образцы хранились при температуре от 6 до 8°С в недоступном для света месте. Результаты контроля трех образцов через сутки: 8-12 КОЕ в 100 г, через 3 суток: 9-11 КОЕ в 100 г, через месяц: 10-12 КОЕ в 100 г, через год: 11-15 КОЕ в 100 г, через два года: 10-14 КОЕ в 100 г.

Пример 2. Изготовлена мазь следующего состава: штамм Bacillus subtilis 534 - 10¹⁵ КОЕ в 100 г, вазелин - 30%, эмульгатор Т₂ - 10%, натрия хлорид - 7%, подсолнечное масло - 8%, вода подготовленная - остальное. Она расфасована по 15 г в стерильные пластиковые баночки с крышкой и контролем вскрытия. При контроле после изготовления трех образцов в перерасчете на 100 г мази обнаружено 8×10¹⁴ -1×10¹⁵ КОЕ бактерий сенной палочки штамма 534. Все образцы хранились при температуре от 6 до 8°С в недоступном для света месте. Результаты контроля трех образцов через сутки: 8×10¹⁴-1,1×10¹⁵ КОЕ в 100 г, через 3 суток: 9×10¹⁴-1×10¹⁵ КОЕ в 100 г, через месяц: 8×10¹⁴-1,1×10 ¹⁵ КОЕ в 100 г, через год: 9×10¹⁴-1×10 ¹⁵ в 100 г, через два года: 8-9×10¹⁴ КОЕ в 100 г.

Пример 3. Изготовлена мазь следующего состава: штамм Bacillus subtilis 534 - 10⁷ КОЕ в 100 г, вазелин - 30%, ланолин (в качестве эмульгатора) - 10%, вода подготовленная - остальное. Она расфасована по 15 г в стерильные пластиковые баночки с крышкой и контролем вскрытия. При контроле после изготовления трех образцов в перерасчете на 100 г мази обнаружено 3,4×10⁴-5,6×10⁴ КОЕ бактерий сенной палочки штамма 534. Все образцы хранились при температуре от 6 до 8°С в недоступном для света месте. Результаты контроля трех образцов через сутки: 1,7×10²-4,4×10 ² КОЕ в 100 г, через 3 суток: 11-14 КОЕ в 100 г, через месяц: живых бактерий сенной палочки штамма 534 не найдено, в одном образце обнаружена плесень.

Пример 4. Изготовлена мазь следующего состава: штамм Bacillus subtilis 534 - 10 ⁷ КОЕ в 100 г, вазелин - 30%, ланолин (в качестве эмульгатора) - 10%, гиалуроновая кислота - 2,5%, метронидазол - 0,1%, натрия хлорид - 7%, вода подготовленная - остальное. Она расфасована по 15 г в стерильные пластиковые баночки с крышкой и контролем вскрытия. При контроле после изготовления трех образцов в перерасчете на 100 г мази обнаружено 1,1×10² - 2,3×10 ² КОЕ бактерий сенной палочки штамма 534. Все образцы хранились при температуре от 6 до 8°С в недоступном для света месте. Результаты контроля через сутки: живых бактерий сенной палочки штамма 534 не найдено.

Пример 5. Больной Б., 74 года. Диагноз: Черепно-мозговая травма, закрытый перелом правого бедра, пролежни в области ягодиц. Лечение пролежней олазолем, синтомициновой эмульсией, мазью «Солкосерил» в течение 2 недель было безуспешным. По рецепту изготовлено лечебно-косметическое средство следующего состава в вес.%: эмульгатор Т₂ - 6, масло подсолнечное - 15, вазелин - 25, натрия хлорид - 0,2, штамм Bacillus subtilis 534 - 10 КОЕ в 100 г, вода - до 100. Она наносилась на раны один раз в сутки. Эпителизация пролежней ягодиц произошла на 18 сутки.

Пример 6. Больная З., 23 года. Диагноз: Ожог туловища 5% Шб степени. Выполнена кожная пластика свободными кожными трансплантатами. На 5 сутки диагностировано нагноение. Кожные трансплантаты стали расплавляться. По рецепту изготовлено лечебно-косметическое средство (мазь) следующего состава в вес.%: эмульгатор Т₂ - 10, масло подсолнечное - 8, вазелин - 36, натрия хлорид - 7, штамм Bacillus subtilis 534 - 10¹⁵ КОЕ в 100 г, вода - до 100. Мазь наносилась на ожоговые раны поверх трансплантатов 1 раз в день. Нагноительный процесс купирован через двое суток. Полная эпителизация зарегистрирована на 6 сутки лечения мазью.

Пример 7. Больная Н., 16 лет. Диагноз: Герпес верхней губы. По рецепту изготовлено лечебно-косметическое средство следующего состава в вес.%: эмульгатор Т₂ - 8, масло подсолнечное - 12, вазелин - 30, натрия хлорид - 1, штамм Bacillus subtilis 534 - 10 млрд КОЕ в 100 г, вода - до 100. Мазь наносилась на везикулы 2 раза в сутки. Новых высыпаний не было. Выздоровление через трое суток.

Пример 8. С., 54 года, страдает сухостью кожи. Известные кремы для сухой кожи не помогают. По рецепту изготовлено лечебно-косметическое средство следующего состава в вес.%: эмульгатор Т₂ - 10, масло подсолнечное - 15, вазелин - 20, натрия хлорид - 2, штамм Bacillus subtilis 534 - 100 млн КОЕ в 100 г, вода - до 100. После нанесение крема кожа и слизистые остаются влажными в течение 2 суток.

В предложенном лечебно-косметическом средстве бактерии штамма Bacillus subtilis 534 при хранении при температуре от - 2 до +8°С сохраняли жизнеспособность (табл.1) в течение двух лет и более. В препаратах, изготовленных по прописям прототипа, бактерии сенной палочки штамма 534 довольно быстро погибали, что, несомненно, снижает эффективность лечения. Таким образом, предложенные авторами составы лечебно-косметического средства способствуют значительно более длительному сохранению живых бактерий сенной палочки штамма 534, чем в ранее известном средстве (р<0,001).

После создания лечебно-косметического средства выполнены эксперименты на белых крысах. В области спины под наркозом им скальпелем наносились раны до мышц длиной 1 см. Края ран обкалывались физраствором, содержащим 2×10⁸ КОЕ штамма Staphillococcus aureus 209P. 6 крыс составили контрольную группу, им лечение не проводилось. Средний срок заживления гнойных ран составил 17,3±1,4 дней (табл.2). Еще 6 животным на рану один раз в сутки наносилась водно-эмульсионная основа. Средний срок заживления гнойных ран составил 16,7+1,3 дней. В третьей

Таблица 1 Число жизнеспособных бактерий штамма Bacillus subtilis 534 при хранении при температуре от -2 до +8°С.
Состав средства	Срок контроля/числе КОЕ штамма Bacillus subtilis 534 в 100 г
После изготовления	Через сутки	Через месяц	Через 24 месяца	Через 48 месяцев
Прототип 1. Штамм Bacillus subtilis 534 - 107 КОЕ в 100 г, вазелин - 30%, ланолин - 10%, вода - остальное.	(4,2±0,3)×10 4 КОЕ n*=9	(2,7±0,3)×102 КОЕ n=9	0 КОЕ n=9 **	0 КОЕ n=9 **	0 КОЕ n=9 **
Прототип 2. Штамм Bacillus subtilis 534 - 107 КОЕ в 100 г, вазелин - 30%, ланолин - 10%, гиалуроновая кислота - 2,5%, метронидазол - 0,1%, натрия хлорид - 7%, вода - остальное.	(1,4±0,3)×10 11 КОЕ n=9	(3±0,2) КОЕ n=9	0 КОЕ n=9	0 КОЕ n=9 **	0 КОЕ n=9 **
Предложенное средство. Штамм Bacillus subtilis 534 - 107 КОЕ в 100 г, вазелин - 30%, эмульгатор Т2 - 10%, натрия хлорид - 7%, подсолнечное масло - 8%, вода - остальное.	(4,4±0,2)×10 4 КОЕ n=9	(4,3±0,3)×104 КОЕ n=9	(4,4±0,4)×104 КОЕ n=9	(3,9±0,2)×104 КОЕ n=9	(3,0±0,2)×104 КОЕ n=9
Предложенное средство. Штамм Bacillus subtilis 534 - 1015 КОЕ в 100 г, эмульгатор Т2 - 10%, масло подсолнечное - 8%, вазелин - 36%, натрия хлорид - 7%, вода - до 100%.	0,2±0,2)×10 11 КОЕ n=9	(1,3±0,3)×1011 КОЕ n=9	(1,5±0,3)×1011 КОЕ n=9	(0,9±0,4)×1010 КОЕ n=9	(0,9±0,3)×1010 КОЕ n=9
Примечание: *n - число исследований (по три исследования в каждой из трех серий); ** - наличие контаминации грибами или бактериями).

группе из 6 животных раны один раз в сутки орошались 0,2 мл лекарственного препарата споробактерин жидкий (взвесь 1 млрд живых бактерий штамма Bacillus subtilis 534 на мл 7% раствора натрия хлорида). Средний срок заживления гнойных ран уменьшился и составил 13,9+1,4 дней. Примерно такие же результаты получены при нанесении на гнойные раны один раз в сутки мази «Солкосерил». Средний срок заживления гнойных ран у 6 белых крыс был равен 14,2+1,0 дням.

Таблица 2 Сроки заживления гнойных ран у белых крыс при различных методахлечения (в днях)
Контроль	Водно-эмульсионная основа с 8% подсолнечного масла	Споробактерин жидкий	Мазь «Солкосерил»	Предложенный препарат
17,3±1,4	16,2±1,4	13,9±1,4	14,2±1,0	8,7±0,7

Ежедневное нанесение на гнойные раны 6 животным лечебно-косметического средства по п.1 (на вводно-эмульсионной основе) мази позволило сократить сроки лечения по сравнению с контролями до 8,7±0,7 дней (р<0,01).

Изготовление по индивидуальным рецептам позволило, не нарушая действующего законодательства, использовать данное лечебно-косметическое средство для лечения больных. В период с 2005 по 2007 год оно применено для лечения ожогов у 76, гнойных ран у 22, пролежней у 5 больных. Контрольная группа, рандомизированная по характеру повреждения, полу, возрасту состояли из 160 больных. Они получали различные мази, в том числе мазь «Солкосерил» (56 человек). Средние сроки заживления ран и лечения больных в группах, лечившихся предложенным лечебно-косметическим средством, были в 1,6-2,3 раза меньшими, чем в группе сравнения (р<0,001). Осложнений и нежелательных побочных реакций при применении лечебно-косметического средства не отмечено, тогда как другие мази у 4 больных дали аллергические реакции.

Для лечения герпеса губ, кожи, слизистых лечебно-косметическое средство использовано у 11 больных. Группа сравнения из 20 больных лечилась мазью «Зовиракс». Мази наносились на область воспаления 1-4 раза в сутки. Средние сроки лечения предложенным лечебно-косметическим средством - 4,8±0,2 дней, а при использовании мази «Зовиракс» - 6,4±0,3 (р<0,001). При молочнице (кандидозе) в гинекологии предложенное лечебно-косметическое средство применено у 9 больных. Во всех наблюдениях получен выраженный положительный лечебный эффект.

Для увлажнения сухой кожи рук и тела предложенное лечебно-косметическое средство использовалось у 18 женщин, 6 мужчин, 4 детей. Группа сравнения состояла из 20 женщин, 5 мужчин, 5 детей. Здесь применяли детский крем и косметические средства для сухой кожи. Путем опроса больных определялся срок, когда эффект увлажнения и смягчения кожи сохранялся. В группе сравнения он был равен 18,4±1,3 часа, а при использовании предложенного лечебно-косметического средства - 34,6±1,5 часа (р<0,001).

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

1. Даценко Б.М., Перцев И.М., Белов С.Г., Тамм Т.И., Дружинин Е.Б. Многокомпонентные мази на гидрофильной основе для лечения гнойных ран // Хирургия, 1984. - № 4. - С.10-13.

2. Блатун Л.А. Возможности современных мазей в лечении гнойных ран, пролежней, трофических язв // Фарм. Вестник. 2002. - № 3. - С.6-10.

3. Peter F.W., Li-Peuser H., Vogt P.M., Muehlberger Т., Homann H.H., Steinau H.U. The effect of wound ointments on tissue microcirculation and leucocyte behaviour // Clin. Exp. Dermatol. 2002. Jan. - № 27(1). - P.51-5.

4. RU 2185840. Описание изобретения к патенту «Лекарственный препарат для профилактики и лечения инфекционных заболеваний». Гапонюк П.Я., Марков И.А., Маркова Е.А., Гапонюк П.П.