способ оценки эффективности лечения язвенного колита

Формула изобретения

Способ оценки эффективности лечения язвенного колита, включающий исследование проб сыворотки крови до лечения и в процессе лечения, отличающийся тем, что одновременно проводят микроскопическое исследование двух проб сыворотки крови, которые в виде капель наносят на поверхность предметного стекла, одну из них высушивают для получения фации, а другую накрывают покровным стеклом и дегидратируют при температуре 24-25°С, и при повторном исследовании через 7 дней от начала лечения при появлении в фации частично упорядоченных радиальных трещин, а в составе текстур второй пробы параллельных линий, оценивают лечение как эффективное.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для определения эффективности лечения при язвенном колите (ЯК).

Проблема язвенного колита заключается в том, что его лечение включает три основных направления: базисную терапию, дополнительные методы лечения и симптоматические средства. К базисным патогенетическим средствам относятся три группы лекарственных препаратов: препараты 5-аминосалициловой кислоты, кортикостероидные гормоны и иммуносупрессоры. Терапия препаратами первых двух групп патогенетически обоснована, но далеко не всегда успешна. Примерно 20-35% больных с воспалительными заболеваниями кишечника резистентны к проводимому лечению. В этих случаях в качестве препаратов резерва применяют иммуносупрессоры. Но и эти лекарственные средства могут не дать желаемого эффекта (Е.А.Белоусова. Язвенный колит и болезнь Крона. М., 2002, стр.46-78). В связи с этим высока актуальность объективной оценки эффективности лечения язвенного колита, так как с ее помощью можно обоснованно и в ранние сроки переводить больного на препараты резерва или рекомендовать альтернативный метод - хирургическое лечение.

Известно, что фактом заживления слизистой оболочки толстой кишки у больных ЯК при эффективном лечении является результат гистологического исследования. При этом в препарате биоптата толстой кишки отмечается резкая активизация пролиферативных процессов, гиперплазия эпителия. Однако недостатком гистологического исследования является инвазивное вмешательство в стенку толстой кишки, использование стерильных инструментов, трудоемкость пробоподготовки и т.д.

Известен способ оценки эффективности лечения болезни Крона и язвенного колита (Патент РФ № 2391914, кл. A61B 10/00, 2006), включающий биохимическое исследование сыворотки крови и исследование электромоторной активности восходящего отдела толстой кишки, цель которого состоит в повышении точности такой оценки.

Однако способ довольно трудоемок, так как включает определение в сыворотке крови различных иммуноглобулинов, уровня аутоантител к нейтрофилам и париетальным клеткам, а также использование прибора для измерения частоты медленных волн электромоторной активности восходящего отдела толстой кишки.

Наиболее близким к предлагаемому является способ оценки эффективности лечения язвенного колита, включающий исследование пробы сыворотки крови до лечения в процессе лечения (Пат. РФ № 2224253, кл. G01N 33/50, 2004 г.).

В данном способе исследование крови осуществляют методом инфракрасной спектроскопии.

Хотя данный способ решает вопрос оценки эффективности проводимого лечения в ранние сроки после начала лечения, однако он ограничен контингентом больных детского возраста и является трудоемким, так как необходимо использование специального оборудования.

В соответствии с этим поставлена задача, направленная на создание такого способа оценки эффективности лечения язвенного колита, который бы отличался объективностью, возможностью использования для больных различных возрастных групп, доступностью для применения, то есть использования оборудования, имеющегося в каждой лаборатории, а также возможностью динамического контроля за эффективностью лечения от самых ранних сроков до принятия решения об использовании хирургического лечения.

Для решения этой задачи в способе оценки эффективности лечения язвенного колита, включающем исследование пробы сыворотки крови до лечения в процессе лечения, предложено в процессе лечения исследовать две пробы сыворотки крови, которые в виде капель наносят на поверхность предметного стекла, одну из них высушивают для получения фации, а другую накрывают покровным стеклом и дегидратируют при температуре 24-25°C, проводят одновременное микроскопическое исследование, и при появлении в фации частично упорядоченных радиальных трещин, а в составе текстур второй пробы параллельных линий оценивают лечение как эффективное.

Ранее было установлено, что при использовании метода клиновидной дегидратации сыворотки крови диагноз ЯК основывался на аномально широких трещинах в фации (Патент РФ 2251694, 2003). Приводилось объяснение данному феномену, что у больных ЯК нарушена способность всасывания воды в организме и для поддержания гомеостаза клетки вынуждены продуцировать высокогидрофильные молекулы белка. При дегидратации сыворотки крови эти гидрофильные агрегаты, отдав воду, сжимаются значительно плотнее, чем менее гидрофильные и вызывают аномальное растрескивание фации.

При эффективном лечении ЯК происходит массивная пролиферация клеток эпителия толстого кишечника, язвы рубцуются, всасывание воды в организме восстанавливается. Мы предположили, что при эффективном лечении гетерогенность агрегатного состояния белковых структур организма должна исчезнуть. В таких случаях феномен формирования аномально широких трещин в фации сыворотки крови должен отсутствовать.

Изучение состава текстур сыворотки крови методом краевой дегидратации позволяет диагностировать процессы гиперплазии клеток, их пролиферацию, что является объективным морфологическим признаком заживления воспалительных очагов в толстой кишке.

Для подтверждения данной гипотезы мы обследовали 57 больных ЯК при динамическом контроле эффективности лечения методом краевой и клиновидной дегидратации сыворотки крови. Результаты проведенных исследований показали, что при эффективном лечении фация сыворотки крови приобретала несколько другой вид, характеризующийся относительным восстановлением радиальной симметрии, что указывало на происходящие сдвиги в системе гомеостаза организма. Однако для объективного подтверждения гиперплазии/пролиферативной активности эпителия толстой кишки (то есть процесса заживления ее дефектов) необходимым является также выявление в составе текстур сыворотки крови параллельных линий (маркера пролиферации или гиперплазии клеток). У 44 больных ЯК при изучении состава текстур в сыворотке крови определялись параллельные линии - признак активной пролиферации (гиперплазии) клеток, что является подтверждением объективности оценки эффективности лечения.

Оставшимся 13 больным с морфологическими признаками ЯК по фации сыворотки крови и отсутствием признаков пролиферации (гиперплазии) клеток были назначены иммуносупрессоры. Эффект лечения был отмечен у 8 больных. Остальным 5 больным было рекомендовано хирургическое лечение.

На Фиг.1, 2 изображены фации сыворотки крови и проба, исследованная методом краевой дегидратации у больного язвенным колитом до лечения (пример 1).

На Фиг.3, 4 изображены фация сыворотки крови и проба, исследованная методом краевой дегидратации у больного язвенным колитом в процессе лечения (пример 1).

На Фиг.5, 6 изображены фация сыворотки крови и проба, исследованная методом краевой дегидратации у больного язвенным колитом до лечения (пример 2).

На Фиг.7, 8 изображены фация сыворотки крови и проба, исследованная методом краевой дегидратации у больного язвенным колитом в процессе лечения (пример 2).

Способ осуществляют следующим образом: у больного берут кровь и получают сыворотку крови. Затем наносят на поверхность предметного стекла дважды по 0,01-0,02 мл сыворотки крови в виде капель. Одну каплю оставляют для получения фации, другую накрывают покровным стеклом и дегидратируют при температуре 24-25°C. После полной дегидратации фацию и аналитическую ячейку одновременно анализируют под микроскопом и отмечают наличие или отсутствие частично упорядоченных радиальных трещин в фации, а также наличие или отсутствие параллельных линий в составе текстур второй пробы.

По выявленным картинам устанавливают эффективность лечения. Конкретные примеры осуществления способа.

Пример 1. Больная В., 34 г. В клинике впервые был поставлен диагноз - язвенный колит. До начала лечения фация сыворотки крови характеризовалась наличием аномально широких трещин (Фиг.1). Признаки пролиферации клеток (скопления параллельных линий) отсутствуют (Фиг.2). Больной назначены препарат 5-аминосалициловой кислоты и кортикостероидные гормоны.

Через 7 дней повторное исследование крови показало, что в фации сыворотки крови появились частично упорядоченные радиальные трещины, аномально широкие трещины отсутствуют (Фиг.3), в составе текстур появились скопления параллельных линий (Фиг.4). Заключение: лечение эффективно.

Больная была выписана из стационара с ремиссией ЯК.

Пример 2. Больной В., 42 г. В клинике впервые был поставлен диагноз - язвенный колит. До лечения фация сыворотки крови характеризовалась наличием аномально широких трещин (Фиг.5). Признаки пролиферации клеток (скопления параллельных линий) отсутствуют (Фиг.6). Больной назначены препарат 5-аминосалициловой кислоты и кортикостероидные гормоны.

Через 7 дней повторное исследование сыворотки крови показало, что в фации отмечались аномально широкие трещины (Фиг.7), в составе текстур признаки усиленной пролиферации клеток отсутствуют (Фиг.8). Заключение: лечение неэффективно. Были назначены иммуносупрессоры.

Повторное исследование на 14 день показало, что каких-либо изменений ни в фации сыворотки крови, ни в составе текстур не произошло.

Заключение: лечение неэффективно.

Больному предложено хирургическое лечение.

Использование способа позволит быстро и достоверно оценить эффективность лечения, сменить группу препаратов и дать оценку их действия на воспалительный процесс в толстой кишке или обоснованно предложить хирургическое лечение. Такое применение способа значительно снизит риск развития тяжелых осложнений в течении ЯК. Кроме того, способ не требует специальной аппаратуры, высокоэкономичен, доступен для лабораторий лечебно-профилактических учреждений любой мощности.