мутантные рецепторы и их использование в системе экспрессии индуцибельного гена на основе ядерного рецептора

Формула изобретения

1. Система модулирования экспрессии рекомбинантного гена, которая содержит:

а) первую кассету экспрессии рекомбинантного гена, способного к экспрессии в клетке-хозяине, содержащую полинуклеотид, кодирующий первый полипептид, который содержит:

i) ДНК-связывающий домен, распознающий элемент ответа, ассоциированный с геном, экспрессия которого должна быть модулирована, и выбранный из группы, включающей домен рецептора экдизона, ДНК-связывающий домен GAL4 и ДНК-связывающий домен LexA, и ii) первый лигандсвязывающий домен ядерного рецептора; и

б) вторую кассету экспрессии рекомбинантного гена, способного к экспрессии в клетке-хозяине, содержащую полинуклеотид, кодирующий второй полипептид, который содержит:

i) домен трансактивации, выбранный из группы, включающей домен трансактивации рецептора экдизона, домен трансактивации VP16, домен трансактивации кислотного активатора В42 и домен трансактивации р65,

и

ii) второй лигандсвязывающий домен ядерного рецептора,

при этом один из первого и второго лигандсвязывающих доменов ядерного рецептора является лигандсвязывающим доменом рецептора экдизона, содержащим мутацию, находящуюся в состоянии, эквивалентном или аналогичном, по меньшей мере, аминокислотному остатку 132 SEQ ID NO:1, которая обеспечивает повышение чувствительности указанного лигандсвязывающего домена к диацилгидразиновым лигандам, а другой из лигандсвязывающих доменов ядерного рецептора способен димеризоваться с лигандсвязывающим доменом рецептора экдизона, содержащим указанную мутацию.

2. Система модулирования экспрессии рекомбинантного гена по п.1, в которой мутация представляет собой L132M, L132N, L132V или L132E.

3. Изолированный полинуклеотид, входящий в систему модулирования экспрессии рекомбинантного гена по п.1 и кодирующий полипептид, который содержит лигандсвязывающий домен рецептора экдизона, содержащий мутацию в состоянии, эквивалентном или аналогичном, по меньшей мере, аминокислотному остатку 132 SEQ ID NO:1.

4. Изолированный полинуклеотид по п.3, в котором мутация SEQ ID NO:1 представляет собой L132M, L132N, L132V или L132E.

5. Вектор экспрессии, входящий в систему модулирования экспрессии рекомбинантного гена по п.1, содержащий изолированный полинуклеотид по п.4, функционально связанный с элементом, регулирующим транскрипцию.

6. Клетка-хозяин для регулируемой экспрессии рекомбинантного гена, включающая систему модулирования экспрессии по п.1.

7. Клетка-хозяин по п.6, включающая вектор экспрессии по п.5.

8. Система модулирования экспрессии рекомбинантного гена по п.1, в которой лигандсвязывающий домен рецептора экдизона дополнительно включает мутацию, находящуюся в состоянии, эквивалентном или аналогичном аминокислотному остатку 125 SEQ ID NO:1.

9. Система модулирования экспрессии рекомбинантного гена по п.8, в которой мутация в аминокислотном остатке 125 представляет собой М125Р, M125R, М125Е, M125L, М125С, M125W, M125G, M125I, M125N, М125S или М125V.

10. Изолированный полинуклеотид по п.3, в котором лигандсвязывающий домен рецептора экдизона дополнительно включает мутацию, находящуюся в состоянии, эквивалентном или аналогичном аминокислотному остатку 125 SEQ ID NO:1.

11. Изолированный полинуклеотид по п.10, в котором мутация в аминокислотном остатке 125 представляет собой М125Р, M125R, М125Е, M125L, М125С, M125W, M125G, M125I, M125N, M125S или M125V.

12. Система модулирования экспрессии рекомбинантного гена по п.1, в которой другой лигандсвязывающий домен ядерного рецептора является лигандсвязывающим доменом ретиноидного Х-рецептора.

Описание изобретения к патенту

Текст описания приведен в факсимильном виде.