способ приготовления переживающих срезов пириформной доли мозга

Формула изобретения

Способ приготовления переживающих срезов пириформной доли мозга путем иссечения ткани по форме эллиптического параболоида под углом от 18 до 22° к продольной оси мозга с последующей инкубацией в питательной среде, отличающийся тем, что при иссечении производят одномоментную дифференциацию пириформной доли мозга на кортикомедиальный и базолатеральный отделы миндалевидного комплекса.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к нейробиологии.

Известен способ приготовления переживающих срезов пириформной доли мозга И.Г.Акмаев, Л.Б.Калимуллина. Миндалевидный комплекс мозга. М., «Наука», 1993, стр.177-181, в котором иссечение пириформной доли мозга, включающей миндалевидный комплекс, осуществляют специальным резцом, выполненным в форме эллиптического параболоида. При этом угол иссечения устанавливают от 18-22 градусов к продольной оси мозга.

Недостатком этого способа является невозможность одномоментной дифференциации иссекаемого миндалевидного комплекса на кортикомедиальный и базолатеральный отделы.

Наиболее близким является изобретение по А.С. № 1679246, в котором иссечение пириформной доли мозга, включающей миндалевидный комплекс, осуществляют специальным резцом, выполненным в форме эллиптического параболоида. При этом угол иссечения устанавливают от 18-22 градусов к продольной оси мозга.

Недостатком этого способа является невозможность одномоментной дифференциации иссекаемого миндалевидного комплекса на кортикомедиальный и базолатеральный отделы.

Техническим результатом изобретения является полное выделение структур пириформной доли мозга с одномоментной дифференциацией их на кортикомедиальный и базолатеральный отделы миндалевидного комплекса.

Технический результат достигается тем, что при приготовлении переживающих срезов пириформной доли мозга путем иссечения ткани по форме эллиптического параболоида под углом от 18 до 22 градусов к продольной оси мозга с последующей инкубацией в питательной среде иссечение производят с одномоментной дифференциацией пириформной доли мозга на кортикомедиальный и базолатеральный отделы миндалевидного комплекса.

Способ позволяет получить пириформную долю мозга с одномоментной дифференциацией ее на кортикомедиальный и базолатеральный отделы миндалевидного комплекса с сохраненными нейрональными связями.

На чертеже представлен резец с емкостью и иллюстрация техники иссечения пириформной доли мозга.

Способ осуществляется следующим образом.

Пириформная доля мозга включает в себя как часть миндалевидный комплекс, представляющий собой совокупность поверхностно расположенных структур обонятельной коры и глубинно расположенных ядер. В состав миндалевидного комплекса входит два функционально различных отдела - кортикомедиальный 1 и базолатеральный 2.

Для дифференцированного выделения кортикомедиального 1 и базолатерального 2 отделов миндалевидного комплекса в составе пириформной доли предложен резец 3 с емкостью 4 в форме объемного образования - эллиптического параболоида, в полости которого находится центральная режущая часть 5, позволяющая получить пириформную долю, разделенную на две основные составляющие части - кортикомедиальный 1 и базолатеральный 2 отделы миндалевидного комплекса.

После декапитации и извлечения мозга из черепа его располагают базальной поверхностью кверху. Резцом 3 из пириформной доли мозга иссекают кусочек ткани, имеющий форму эллиптического параболоида. Иссечение проводят под углом 18-22° (оптимально 20°) к продольной оси мозга. Результатом иссечения является получение двух неравных по величине кусочков ткани, при этом меньший по величине, иссеченный из медиальной части полушария конечного мозга, представляет собой кортикомедиальный отдел 1 миндалевидного комплекса, а другой - базолатеральный отдел 2 миндалевидного комплекса.

Иссеченные кусочки ткани помещают основанием на столик, имеющий охлаждение, и разделяют с помощью вибратома на срезы, толщина которых варьируется в пределах 220-350 мкм.

Полученные срезы переносят в первую порцию инкубационной среды, в которой выдерживают 30 мин (преинкубация). В качестве инкубационной среды используют бикарбонатную среду Кребса-Рингера, в состав которой входят следующие компоненты, ммоль л-1: NaCl 118; KCl 4,7; CaCl ₂ 2,5; KHPO₄ 1,2; MgSO₄ 1,2; NaHCO ₃ 25; глюкоза 10. Инкубационную среду при комнатной температуре насыщают газовой смесью, содержащей 95% O₂ и 5% СО ₂, с момента извлечения мозга из черепа до перемещения срезов в инкубационную среду должно пройти не более 5 мин.

Нейрофизиологические исследования проводят на срезах, которые после преинкубации помещают в свежую порцию инкубационной среды («рабочая порция»). Фиксацию срезов (устранение их смещения при перемещении инкубационной среды) обеспечивают с помощью помещения их между двумя нейлоновыми сеточками. Для исследования срезов используют комплекс устройств и приборов, предназначенных как для обеспечения длительного переживания срезов, так и регистрации электрической активности компонентов нервной ткани. Под контролем микроскопа к различным структурам миндалевидного комплекса вводят стеклянные микроэлектроды с диаметром кончика до 10-20 мкм. Регистрируют вне- и внутриклеточную активность и фокальные потенциалы в структурах палеокортекса (периамигдалярная кора, ядро латерального обонятельного тракта) и ряда ядер миндалевидного комплекса (базомедиальное, медиальное, кортикальное, базолатеральное). Полученные результаты характеризуют электрофизиологические ответы различных структур, а также их своеобразие, обусловленное взаимодействием различных образований миндалевидного комплекса, сохраняющих целостность и комплексность в составе срезов.

Морфологический контроль эффективности иссечения пириформной доли мозга и констатацию топографии введенного микроэлектрода осуществляют после завершения регистрации электрофизиологических ответов путем окрашивания срезов гистологическими методами (крезилом фиолетовым и гематоксилином-эозином).

Изучение микропрепаратов показало, что способ, реализуемый с помощью специального резца, обеспечивает полное выделение пириформной доли мозга с одномоментной дифференциацией ее на кортикомедиальный 1 и базолатеральный 2 отделы миндалевидного комплекса, а иссекаемые кусочки и срезы этого образования мозга полностью сохраняют свою структурную организацию.

Пример. Резцом 3 иссекают из мозга его часть под углом 20° к продольной оси мозга размером не более 5 мм. Переднюю режущую часть 6 резца 3 приводят в соприкосновение с поверхностью мозга так, чтобы основание резца 3, стоящего вертикально, пришлось на уровень incisura olfactoria. После этого резец 3 погружают в ткань мозга на глубину выступа передней режущей части 6. Затем положение резца 3 меняют до 45° к поверхности мозга и резец 3 вводят наклонно вниз до полного заполнения его емкости 4 тканью мозга. Из биоптатов кортикомедиального 1 и базолатерального 2 отделов миндалевидного комплекса готовят срезы, которые помещают в питательную среду. Срезы использут в дальнейшем для нейробиологических исследований. Морфологический и физиологический контроль срезов позволил установить наличие сохранных связей нервных клеток пириформной доли мозга.

Способ позволяет выделить полностью пириформную долю с миндалевидным комплексом с дифференциацией его на кортикомедиальный и базолатеральный отделы с сохраненными нейрональными связями и использовать переживающие срезы в нейробиологических исследованиях.