способ определения типа течения множественной миеломы

Формула изобретения

Способ определения типа течения множественной миеломы, включающий отбор пробы, приготовление образца для исследования и поведение микроскопического исследования, отличающийся тем, что в качестве пробы берут костный мозг из грудины, а при проведении микроскопии в образце исследуют не менее 50 полей зрения, в каждом из которых определяют количество кластеров, состоящих по меньшей мере из трех плазматических клеток, оценочный показатель определяют как среднее арифметическое полученное от деления суммы всех обнаруженных кластеров на количество подсчитанных полей, и при значении этого показателя меньше 1 устанавливают аваскулярный тип течения множественной миеломы, а при значении этого показателя больше 1 устанавливают васкулярный тип течения множественной миеломы.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторным методам исследования, и может быть использовано при определении типа течения множественной миеломы.

Аваскулярный и васкулярный типы течения множественной миеломы различаются по характеру поражения костной системы, степени выраженности осалгического синдрома, по прогнозу тяжести осложнений. Выявление типа течения множественной миеломы на ранней стадии позволит своевременно разработать методику лечения, что существенно повысит его эффективность.

Известен способ определения степени ангиогенеза при множественной миеломе (ММ), включающий выделение мРНК плазматических клеток из аспирата костного мозга у больных ММ, проведение ОТ-ПЦР на выделенной мРНК и определение интенсивности экспрессии генов VEGFs и их рецепторов VEGFRs в аспирате костного мозга у больных MM (Angelo Vacca, Roberto Ria, Domenico Ribatti, Fabrizio Semeraro, Valentin Djonov, Francesco Di Raimondo, Franco Dammacco, A paracrine loop in the vascular endothelial growth factor pathway triggers tumor angiogenesis and growth in multiple myeloma, Haematologica/journal of hematology vol. 88(02): February 2003).

Недостатком указанного метода является то, что такое исследование требует сложнейшего оборудования в условиях крупного научного центра и высококвалифицированного персонала, а также значительных материальных затрат больного.

Наиболее близким к предлагаемому является способ определения типа течения множественной миеломы, включающий отбор пробы, приготовление образца для исследования и проведение микроскопического исследования. (Bone marrow angiogenesis in 400 patients with monoclonal gammopathy of undetermined significance, multiple myeloma, and primary amyloidosis, S. Vincent Rajkumar, Ruben A. Mesa, Rafael Fonseca and /, J. Clinical Cancer Research, Vol.8. 2210-2216. July 2002.)

Данный способ позволяет определить тип течения множественной миеломы по количеству сосудов, окрашенных специальными красителями, в трепанобиоптате подвзошной кости. При этом, как и в предлагаемом методе, количества сосудов определяют визуально, при проведении микроскопии.

Недостатком данного способа является травматичность получения материала для исследования, трудоемкость, дороговизна, недоступность для ЛПУ. Кроме того, этот способ позволяет провести самую раннюю диагностику, поскольку первое проявление заболевания выражается в появлении кластеров плазматических клеток (за счет адгезии). На следующем этапе кластеры закрепляются за счет образования сосудов, которое инициируется активными генами.

Для решения этой задачи в способе определения типа течения множественной миеломы, включающем отбор пробы, приготовление образца для исследования и проведение микроскопического исследования, предложено в качестве пробы брать костный мозг из грудины, при проведении микроскопии в образце исследовать не менее 50 полей зрения, в каждом из которых определять количество кластеров, состоящих по меньшей мере из трех плазматических клеток, оценочный показатель определять как среднее арифметическое, полученное от деления суммы всех обнаруженных кластеров на количество подсчитанных полей, и при значении этого показателя меньше 1 устанавливать аваскулярный тип течения множественной миеломы, а при значении этого показателя больше 1 устанавливают васкулярный тип течения множественной миеломы.

На Фиг 1, 2, 3, 4 показаны картины исследования под микроскопом, примеры 1, 2, 3, 4 соответственно.

Способ осуществляют следующим образом.

Препараты костного мозга из грудины изучают в световом микроскопе (увеличение ×400). Для анализа пригодны мазки умеренноклеточного и гиперклеточного костного мозга. Подсчитывается количество кластеров из плазматических клеток (групп клеток из 3 и более клеток) в каждом поле зрения (не менее 50 полей зрения), оценочный показатель высчитывается как среднее арифметическое и при значениях полученного числа менее 1,0 диагностируется аваскулярный тип множественной миеломы.

Исследование 50 полей зрения является необходимым и достаточным для объективной оценки картины.

Примеры

Больной Р., 55 лет, диагноз: множественная миелома.

Под местным обезболиванием получен костный мозг из грудины и из него приготовлены мазки традиционным способом. Клеточность костного мозга умеренная, подсчитано количество кластеров в 50 полях зрения (увеличение ×400). Подсчитано общее количество кластеров, которое составило 41. Среднее арифметическое составило 0,82. Диагностирован аваскулярный тип течения множественной миеломы. Параллельно из этого же костного мозга проведено: выделение мРНК плазматических клеток, ОТ-ПЦР на выделенной мРНК и определение интенсивности экспрессии генов VEGFs и их рецепторов VEGFRs. Экспрессия генов VEGF С, Д и их рецепторов VEGFR1, R1s, R2, R3 отсутствовала, что подтвердило аваскулярный тип у данного больного.

Больной Ф., 63 г., диагноз: множественная миелома.

Под местным обезболиванием получен костный мозг из грудины и из него приготовлены мазки традиционным способом. Клеточность костного мозга достаточная, подсчитано количество кластеров в 50 полях зрения (увеличение ×400). Оно составило 29. Среднее арифметическое составило 0,58. Диагностирован аваскулярный тип течения множественной миеломы. Параллельно из этого же костного мозга проведено: выделение мРНК плазматических клеток, ОТ-ПЦР на выделенной мРНК и определение интенсивности экспрессии генов VEGFs и их рецепторов VEGFRs. Экспрессия генов VEGF С, Д и их рецепторов VEGFR1, R1s, R2, R3 низкая, что подтвердило аваскулярный тип у данного больного.

Больной Ш., 63 г. диагноз: множественная миелома.

Аналогично вышеприведенному примеру проведено исследование. Среднее арифметическое составило 3,84. Экспрессия генов VEGF С, Д и их рецепторов VEGFR1, R1s, R2, R3 высокая, что подтвердило васкулярный тип у данного больного.

Больная И., 62 г., диагноз: множественная миелома.

Аналогично вышеприведенному примеру проведено исследование. Среднее арифметическое составило 17,0. Экспрессия генов VEGF С, Д и их рецепторов VEGFR1, R1s, R2, R3 высокая, что подтвердило васкулярный тип у данного больного.

Способ технически и материально прост, позволяет диагностировать тип течения множественной миеломы на самой ранней стадии, что существенно повысит эффективность лечения.